Wirtsfindung von Hakenwürmern: Analyse und Spezifität der Wirtssignale
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1.
EINLEITUNG
.
1
1.1.
DIE
PARASITEN
.
3
1.1.1.
INFEKTIOESES
STADIUM
UND
WIRTSFINDEVERHALTEN
.
5
1.2
CHEMISCHE
WIRTSIGNALE
.
8
2.
MATERIAL
UND
METHODE
.
11
2.1.
VERSUCHSTIERE
.
11
2.2.
AUSLOESEN
DES
EXSHEATMENT
DER
LARVEN
.
11
2.3.
VERSUCHSAUFBAUTEN
UND
VERSUCHSBEDINGUNGEN
.
12
2.3.1.
OLFAKTOMETER
.
12
2.3.2.
AGGREGATIONSVERSUCHE
.
13
2.3.3.
PENETRATIONSVERSUCHE
.
14
2.3.4.
CHEMOTAXISVERSUCHE
.
16
2.3.4.1.
VERSUCHSAUFBAU
UND
ALLGEMEINE
VERSUCHSBEDINGUNGEN
.
16
2.3.4.2.
BESTIMMUNG
DER
DIFFUSIONSGESCHWINDIGKEIT
.
18
2.4.
SUBSTRATGEWINNUNG
.
19
2.4.1.
GEWINNUNG
VON
HUNDEDUFTSUBSTRATE
.
19
2.4.2.
GEWINNUNG
VON
HAUTSUBSTRATEN
.
19
2.4.3.
GEWINNUNG
VON
SERUM
.
21
2.5.
FRAKTIONIERUNG
DER
SUBSTRATE
.
21
2.5.1.
MOLEKULARFILTRATION
.
21
2.5.2.
ANIONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
.
22
2.5.3.
KATIONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
.
23
2.5.3.1.
BATCH-VERSUCHE
.
23
2.5.3.2.
SAEULENCHROMATOGRAPHIE
MIT
SALZGRADIENTEN-ELUTION
.
24
2.5.3.2.
SAEULENCHROMATOGRAPHIE
MIT
PH-GRADIENTEN-ELUTION
.
25
2.5.4.
REVERSED-PHASE
CHROMATOGRAPHIE
.26
2.5.5.
GELFILTRATIONSCHROMATOGRAPHIE
(SEC)
.
26
2.5.6.
CHEMISCHE
UND
ENZYMATISCHE
FRAKTIONIERUNGEN
.
27
2.5.6.1.
AUSFAELLEN
VON
PROTEINEN
MIT
TCA
.
27
2.5.6.2.
PEPTIDHYDROLYSE
MIT
HCL
.
27
2.5.6.3.
ENZYMATISCHE
HYDROLYSE
VON
PROTEINE
UND
PEPTIDEN
.
28
2.5.6.4.
CHEMIKALIEN
UND
AMINOSAEURE-REINSUBSTANZGEMISCHE
.
29
2.6.
ANALYTISCHE
METHODEN
.
30
2.6.1.
BESTIMMUNG
DES
PROTEINGEHALTS
.
30
2.6.2.
AMINOSAEURE-ANALYSE
MIT
RP-HPLC
.
30
2.6.3.
PEPTID-ANALYSE
NACH
VORSAEULENDERIVATISIERUNG
MIT
PITC
.
32
2.6.4.
PEPTID-ANALYSE
OHNE
DERIVATISIERUNG
.
33
2.7.STATISTIK
.
34
3.
ERGEBNISSE
.
35
3.1.
AKTIVIERUNG
DURCH
FERNREIZE
.
35
3.2.
AGGREGATIONSVERHALTEN
DER
LARVEN
.
37
3.3.
DIE
PENETRATIONSREAKTION
.
39
3.3.1.
CHARAKTERISIERUNG
DER
PENETRATIONSAUSLOESENDEN
KOMPONENTE
.
41
3.3.2.
ANALYSE
DER
PEPTIDE
AUS
HHH
.
47
3.3.3.
ISOLIERUNG
DER
PENETRATIONSAUSLOESENDEN
KOMPONENTE
.
50
3.3.3.1.
RP-1
8
CHROMATOGRAPHIE
.
50
3.3.3.2.
IEC
VON
HHH
3KDA
.
53
3.3.3.3.
SEC
VON
HHH
3KDA
.
60
3.3.3.4.
PRAEPERATIVE
HPLC
VON
HHH
3KDA
.
66
3.3.4.
ANALYSE
DER
PENETRATIONSAUSLOESENDEN
KOMPONENTE
.
69
3.3.5.
WIRKSAMKEIT
VON
REINSUBSTANZEN
.
74
3.3.6.
SPEZIFITAET
DER
PENETRATIONSREAKTION
.
TI
3.4.
CHEMOTAKTISCHE
ORIENTIERUNG
.
81
3.4.1.
CHARAKTERISIERUNG
DER
CHEMOTAXIS-AUSLOESENDEN
KOMPONENTEN
.
81
3.4.2.
MOLEKULARFILTRATION
DER
CHEMOTAXIS-AUSLOESENDEN
KOMPONENTEN
.
83
3.4.3.
SEC
DER
CHEMOTAXIS-AUSLOESENDEN
KOMPONENTEN
.
86
3.4.4.
SPEZIFITAET
DER
CHEMOTAKTISCHEN
ORIENTIERUNG
.
87
4.
DISKUSSION
.
89
4.1.
BIOASSAYS
UND
DIE
REAKTIONEN
DER
HAKENWURMLARVEN
.
89
4.2.
DIE
IDENTIFIZIERUNG
DER
WIRKSAMEN
SIGNALMOLEKUELE
.
94
4.2.1.
CHARAKTERISIERUNG
DER
PENETRATIONSAUSLOESENDEN
KOMPONENTE
.
94
4.2.2.
ISOLIERUNG
DER
PENETRATIONSAUSLOESENDEN
PEPTID-KOMPONENTEN
.
97
II
4.3.
INVASIONSPROZESS
UND
PEPTIDE
ALS
SIGNALSTOFFE
.
100
4.3.1.
PEPTIDSIGNALE
IN
VIVO
.
101
4.3.2.
ENTSTEHEN
SIGNALMOLEKUELE
UNTER
DEM
EINFLUSS
DES
PARASITEN?
.
104
4.3.3.
PROTEOLYSE
UND
PEPTIDBRUCHSTUECKE
ALS
SIGNALE
.
106
4.4.
WIRTSFINDESTRATEGIE
UND
WIRTSSPEZIFITAET
DER
HAKENWUERMER
.
111
4.5.AUSBLICK
.
115
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.
118
6.
UTERATUR
.
120
ANHANG
.
134
III |
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