Interaktion von Listeria monocytogenes mit Endothelzellen:
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INHALTSVERZEICHNIS
ZUSAMMENFASSUNG
1
1 EINLEITUNG 3
1.1
LISTERIA MONOCYTOGENES
.
3
1.1.1 INTERNALINE UND ANDERE INVASIONSFAKTOREN. 5
1.2 BLUT-HIRN- UND BLUT-LIQUOR-SCHRANKE. 8
1.3 INFEKTIONEN DES GEHIRNS.
11
1.3.1 MENINGITIS UND ZYTOKINE._.
15
1.3.2
L. MONOCYTOGENES
VERURSACHT ERKRANKUNGEN DES ZENTRALEN NERVEN
SYSTEMS .'. 16
1.4 ENDOTHELZELLEN .
17
1.4.1 WIRTSZELLANTWORT VON HUVEC AUF EINE INFEKTION MIT
L. MONOCYTOGENES
20
1.5 ZIELSETZUNG DER ARBEIT.20
2 ERGEBNISSE 23
2.1 ADHAESION VON LISTERIEN AN BZW. ASSOZIATION MIT HBMEC.23
2.1.1 ASSOZIATION VON
L. MONOCYTOGENES
UND
L. INNOCUA
MIT HBMEC . 24
2.1.2 RASTERELEKTRONENMIKROSKOPISCHE ANALYSE DER ASSOZIATION VON
L. MO
NOCYTOGENES
EGD,
L. INNOCUA
UND
L. MONOCYTOGENES AINLB
MIT
HBMEC.24
2.1.3 ADHAESION VON LISTERIEN AN HBMEC .26
2.2
INVASION VON LISTERIEN IN ENDOTHELZELLEN.29
2.2.1 INVASION VON LISTERIEN IN HBMEC.29
2.2.2 INVASION VON LISTERIEN IN HUVEC.
39
2.3 INTRAZELLULAERE VERMEHRUNG VON
L. MONOCYTOGENES
IN ENDOTHELZELLEN.41
2.3.1 BEOBACHTUNG DER INTRAZELLULAEREN VERMEHRUNG VON L. MONOCYTOGENES
IN HBMEC MIT GFP-EXPRIMIERENDEN LISTERIEN.
43
2.3.2 RASTERELEKTRONENMIKROSKOPISCHE ANALYSE VON HBMEC NACH DER IN
FEKTION MIT
L. MONOCYTOGENES
.
43
2.4 EINFLUSS EINER LISTERIEN-INFEKTION AUF DIE TYANSKRIPTION EINZELNER
ENDOTHEL
ZELLGENE .
45
2.5 EIN ZWEI-ZELL-IN-TNTRO-MODELL DES
CHOROID PLEXUS
.48
3 DISKUSSION
53
3.1 WICHTIGE FAKTOREN FUER DIE INVASION VON
L. MONOCYTOGENES
IN ENDOTHELZELLEN 53
3.2 MECHANISMUS DER INVASION.
59
3.3 WIRTSZELL-ANTWORT VON ENDOTHELZELLEN AUF EINE INFEKTION MIT
L. MONOCYTOGENES
62
3.4 SCHLUSSFOLGERUNGEN AUS DEM ZWEI-ZELL
IN
VITRO-MODELL DES
CHOROID PLEXUS .
. 63
3.5 DER EINFLUSS DER INFEKTIONSBEDINGUNGEN.
66
IX
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/959898417
X
3.5.1 ZELLBEDINGTE EINFLUESSE.
71
4
MATERIAL ^
4.1 BAKTERIENSTAEMME.73
4.2 ZELLINIEN. 74
4.2.1 PRIMAERE ZELLEN.74
4.2.2 TRANSFORMIERTE ZELLEN .74
4.3 BAKTERIEN- UND ZELLKULTUR.75
4.3.1 VERBRAUCHSMATERIAL.75
4.3.2 MEDIEN FUER EUKARYONTENZELLEN.75
4.3.3 MEDIEN FUER DIE LISTERIENKULTUR .76
4.3.4 LOESUNGEN UND WASCHPUFFER.77
4.3.5 INHIBITOREN.78
4.3.6 ANTIKOERPER UND FLUORESZIERENDE LATEX-KUEGELCHEN.78
4.3.7 GEREINIGTE PROTEINE.78
4.4 ELEKTRONENMIKROSKOPIE.78
4.5 OLIGONUKLEOTIDE.
4.5.1 OLIGONUKLEOTIDE FUER DIE CDNA-SYNTHESE.79
4.5.2 OLIGONUKLEOTIDE FUER DIE PCR.79
4.6 MOLEKULARGEWICHTSSTANDARDS.80
4.7 GERAETE.80
5 METHODEN
5.1 STATISTIK.3
5.1.1 SIGNIFIKANZTEST .83
5.1.2 STANDARDABWEICHUNG.83
5.2 ZELLKULTUR.84
5.2.1 BESCHICHTEN DER ZELLKULTURGEFAESSE MIT GELANTINE.84
5.2.2 PASSAGIEREN VON ZELLEN MIT TRYPSIN/EDTA .85
5.2.3 LEBENDZELLZAHLBESTIMMUNG VON EUKARYONTENZELLEN MIT TVYPANBLAU . 85
5.2.4 EINFRIEREN UND AUFTAUEN VON ZELLEN.86
5.2.5 INFEKTION VON ENDOTHELZELLEN MIT LISTERIEN UND BESTIMMUNG DER IN
VASIONSRATE .86
5.2.6 BESTIMMUNG DER ADHAESION VON LISTERIEN AN BZW. DER ASSOZIATION
MIT ENDOTHELZELLEN.88
5.2.7 INTRAZELLULAERE VERMEHRUNG.88
5.2.8 ZWEI-ZELL-MODELL MIT CACO-2-ZELLEN UND HBMEC AUF LYANSWELL-FILTERN
89
5.2.9 WIDERSTANDSMESSUNGEN .90
5.2.10 GIEMSARFAERBUNG.90
5.3 ZYTOKIN-TRANSKRIPTIONSUNTERSUCHUNGEN.90
5.3.1 RNA-ISOLATION AUS ENDOTHELZELLEN .91
5.3.2 CDNA-SYNTHESE.92
5.3.3 POLYMERASE-KETTENREAKTION (PCR).92
5.3.4 HORIZONTALE AGAROSE-GELELEKTROPHORESE.93
5.3.5 SPEKTROPHOTOMETRISCHE KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON DNA UND
RNA.94
5.4 LISTERIEN-GLYCERINKULTUREN.94
5.5 MIKROSKOPIE.95
XI
5.5.1 RASTER-ELEKTRONENMIKROSKOPIE.95
5.5.2 TRANSMISSIONS-ELEKTRONENMIKROSKOPIE.96
5.5.3 FLUORESZENZMIKROSKOPIE.97
6 LITERATUR 99
A ANHANG 111
A.L ABKUERZUNGEN.111
A.2 PUBLIKATIONSLISTE .113
A.2.1 PUBLIKATIONEN.113
A.2.2 VORTRAEGE.113
A.2.3 ABSTRACTS.114
A.2.4 POSTER.114
A.3 CURRICULUM VITAE.115
A.4 SUMMARY.117 |
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