Antisense-Oligodesoxynukleotide gegen Tumor-Nekrose-Faktor-alpha: Aufnahme und Wirkung in humanen Leukozyten
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
.
1
1.1
FRAGESTELLUNG
.
1
1.2
EINFUEHRUNG
IN
DAS
THEMA
.
1
1.3
DIE
ANTISENSE-STRATEGIE
.
2
1.3.1
DEFINITION
UND
WIRKUNGSMECHANISMUS
.
2
1.3.2
MODIFIKATIONEN
.
5
1.3.3
SPEZIFITAET
.
7
1.3.4
ZELLULAERE
AUFNAHME
VON
ANTISENSE-OLIGONUKLEOTIDEN
.
9
1.4
TUMOR-NEKROSE-FAKTOR-A
.
10
1.4.1
CHARAKTERISIERUNG
.
10
1.4.2
BIOLOGISCHE
UND
PATHOPHYSIOLOGISCHE
BEDEUTUNG
.
11
1.5
AUSGANGSPUNKT
UND
ZIELE
DER
ARBEIT
.
14
2
MATERIAL
UND
METHODEN
.
17
2.1
PRAEPARATION
MONONUKLEAERER
ZELLEN
.
17
2.2
OLIGONUKLEOTIDE
UND
KATIONISCHES
LIPID
.
17
2.3
AUFNAHME
VON
OLIGONUKLEOTIDEN
IN
MONONUKLEAERE
ZELLEN
.
19
2.3.1
ZELLKULTUR
.
19
2.3.2
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.
20
2.3.3
FLUORESZENZMIKROSKOPIE
.
22
2.4
SUPPRESSION
DER
TUMOR-NEKROSE-FAKTOR-A-SYNTHESE
DURCH
ANTISENSE-OLIGONUKLEOTIDE
.
24
2.4.1
ZELLKULTUR
.
24
2.4.2
RADIOIMMUNOASSAY
FUER
TUMOR-NEKROSE-FAKTOR-A
.
24
2.4.3
INTRAZELLULAERE
MESSUNG
VON
TUMOR-NEKROSE-FAKTOR-A
MIT
DURCHFLUSS
ZYTOMETRIE
25
2.5
STATISTISCHE
ANALYSE
.
26
3
ERGEBNISSE
.
27
3.1
AUFNAHME
VON
OLIGONUKLEOTIDEN
IN
HUMANE
MONONUKLEAERE
ZELLEN
.
27
3.1.1
SPONTANE
OLIGONUKLEOTID-AUFNAEHME
IN
MONOZYTEN
UND
LYMPHOZYTEN
.
27
3.1.2
OPTIMIERUNG
DER
LIPOFECTIN-KONZENTRATION
FUER
DIE
OLIGONUKLEOTID
AUFNAHME
.
30
3.1.3
LIPOFECTIN-VERMITTELTE
OLIGONUKLEOTID-AUFNAHME
IN
SUBPOPULATIONEN
MONONUKLEAERER
ZELLEN
.
35
3.1.4
INTRAZELLULAERE
VERTEILUNG
FLUORESZENZ-MARKIERTER
OLIGONUKLEOTIDE
.
37
3.2
SUPPRESSION
DER
TUMOR-NEKROSE-FAKTOR-A-SYNTHESE
DURCH
ANTISENSE-OLIGONUKLEOTIDE
.
43
3.2.1
KORRELATION
DER
OLIGONUKLEOTIDAUFNAHME
MIT
DER
HEMMUNG
DER
TUMOR-NEKROSE-FAKTOR-A-SYNTHESE
.
43
3.2.2
NACHWEIS
VON
TUMOR-NEKROSE-FAKTOR-A
AUF
EINZELZELLEBENE
.
45
4
DISKUSSION
.
51
4.1
UEBERSICHT
UEBER
DIE
EXPERIMENTELLEN
BEFUNDE
.
51
4.2
METHODENDISKUSSION
.
52
4.2.1
NACHWEIS
FLUORESZENZ-MARKIERTER
ANTISENSE-OLIGONUKLEOTIDE
.
52
4.2.2
LIPOFECTIN
.
53
4.2.3
PROTOKOLL
ZUR
SUPPRESSION
VON
TUMOR-NEKROSE-FAKTOR-A
MIT
ANTISENSE-OLIGONUKLEOTIDEN
.
54
4.3
EIGENE
BEFUNDE
IM
VERGLEICH
MIT
DER
LITERATUR
.
54
4.3.1
ZELLULAERE
AUFNAHME
PHOSPHOROTHIOAT-MODIFIZIERTER
ANTISENSE
OLIGONUKLEOTIDE
.
54
4.3.2 INTRAZELLULAERE
VERTEILUNG
DER
OLIGONUKLEOTIDE
.
56
4.3.3
SUPPRESSION
VON
TUMOR-NEKROSE-FAKTOR-A
DURCH
ANTISENSE
OLIGONUKLEOTIDE
.
57
4.3.4
NACHWEIS
VON
TUMOR-NEKROSE-FAKTOR-A
AUF
EINZELZELLEBENE
.60
4.4
BEWERTUNG
DER
ERGEBNISSE
.60
4.4.1
UNTERSCHIEDLICHE
AUFNAHME
VON
OLIGONUKLEOTIDEN
IN
SUBPOPULATIONEN
MONONUKLEAERER
ZELLEN
.
60
4.4.2
WIRKUNGSWEISE
DES
KATIONISCHEN
LIPIDS
LIPOFECTIN
.
62
4.4.3
SUPPRESSION
VON
TUMOR-NEKROSE-FAKTOR-A
DURCH
ANTISENSE
OLIGONUKLEOTIDE
.
65
4.4.4
MESSUNG
VON
INTRAZELLULAEREM
TUMOR-NEKROSE-FAKTOR-A
AUF
EINZELZELLEBENE
.
68
4.4.5
SCHLUSSFOLGERUNGEN
.
68
4.5
KLINISCHE
RELEVANZ
.
69
4.5.1
ANTAGONISIERUNG
VON
TUMOR-NEKROSE-FAKTOR-A
IN
KLINISCHEN
STUDIEN
.
69
4.5.2
ANTISENSE-OLIGONUKLEOTIDE
IN
KLINISCHEN
STUDIEN
.
71
5
ZUSAMMENFASSUNG
.
75
6
LITERATUR
.
77
VERZEICHNIS
DER
ABKUERZUNGEN
.
99
DANKSAGUNG
.
101
VEROEFFENTLICHUNGEN
.
103
LEBENSLAUF
.
105 |
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