Untersuchungen zum Tissue-engineering vaskularisierter Transplantatgewebe in der Mund-, Kiefer- und Gesichtschirurgie:
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III
INHALTSVERZEICHNIS
EINFUEHRUNG IN DIE THEMATIK 1
0.1 AKTUELLER STAND UND PROBLEME DER DEFEKTVERSORGUNG IM
KIEFER-GESICHTSBEREICH 1
0.2 DEFEKTVESORGUNG IM KIEFER-GESICHTSBEREICH - AUSGEWAEHLTE KLINISCHE
BEISPIELE 3
03 HYPOTHESE: ARTIFIZIELLER VASKULARISIERTER GEWEBEERSATZ 7
0.4 AKTUELLE ANSAETZE FUER DAS TISSUE-ENGINEERING 8
-
EPITHELIALE GEWEBE 9
-
KNORPEL, KNOCHEN UND ANDERE STUETZGEWEBE 10
-
GEFAESSERSATZ 11
-
EXPERIMENTELLE ANSAETZE ZUR ETABLIERUNG EINES VASKULAEREN STROMAS 12
0.4 PHYSIOLOGIE DER ANGIOGENESE UND ANGIOGENETISCHE WACHSTUMSFAKTOREN 13
-
ANGIOGENESE: DEFINITION UND ABLAUF 13
-
VASCULAR ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR (VEGF) 16
-
ANSAETZE ZUR THERAPEUTISCHE NUTZUNG VON VEGF 19
-
BASIC FIBROBLAST GROWTH FACTOR (BFGF) UND ACIDIC FIBROBLAST GROWTH
FACTOR {AFGF) 20
-
INDIREKTE ANGIOGENTISCHE WACHSTUMSFAKTOREN 22
YY REIFUNG NEUGEBILDETER KAPILLAREN 25
0.5 FRAGESTELLUNGEN UND GLIEDERUNG 28
ABSCHNITT I:
ENTWICKLUNG EINES IN VITRO GEWEBEMODELLS UNTER NON-FLOW BEDINGUNGEN 30
1.1 VORUEBERLEGUNGEN 30
1.1.1 ANGIOGENESEMODELLE 30
1.1.2 VERSUCHSMODELL UND -PLANUNG 31
1.1.3 UEBERLEGUNGEN ZUR DARSTELLUNG UND ERFASSUNG KAPILLARARTIGER
STRUKTUREN 34
1.1.4 NATUERLICHE HUMANE GEWEBE ALS REFERENZ 34
1.1.5 FRAGESTELLUNGEN 36
1.2 MATERIAL UND METHODEN 38
1.2.1 GEWINNUNG UND ANZUCHT DER ZELLEN 38
-
ZUSAMMENSETZUNG VON KULTURMEDIEN UND PUFFERN 38
-
HUMANE UMBILIKALE VENOESE ENDOTHELZELLEN (HUVE) 39
-
FETTGEWEBSSTROMAZELLEN (HATC) 39
-
MICROCARRIERKULTUREN 40
1.2.2 STATISCHES GEWEBEMODELL 41
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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IV
1.2.3 VERSUCHSDURCHFUEHRUNGEN 42
-
VARIATION DER SERUMKONZENTRATION IM MEDIUM 43
-
FIBRIN ALS SUBSTRAT (VERSUS HUMANES PLASMA) MIT UND OHNE SERUMZUSATZ IM
MEDIUM 44
-
EINFLUSS VON TGF SS 44
-
EINFLUSS EINER KONTINUIERLICHEN VEGF-SUBSTITUTION 45
-
EINFLUSS EINER KONTINUIERLICHEN IGF-L- ODER SOMATOTROPIN-SUBSTITUTION 45
1.2.4 PRAEPARATENTNAHMEN UND UEA-I-MARKIERUNG 45
1.2.5 REFERENZDARSTELLUNG DER MIKROVASKULARISATION HUMANER GEWEBE 47
1.2.6 KONFOKALE LASER RASTER MIKROSKOPIE UND BILDAUSWERTUNG 47
1.2.7 STATISTIK 49
-
BESCHREIBENDE STATISTIK 49
-
SCHLIESSENDE STATISTIK 51
1.3 ERGEBNISSE 54
1.3.1 ZELLKULTUREN 54
1.3.2 DARSTELLUNG KAPILLARAEHNLICHER STRUKTUREN 55
1.3.3 LEERKONTROLLE OHNE HUVE IN DER MATRIX 56
1.3.4 VARIATION DER SERUMKONZENTRATION IM MEDIUM 57
1.3.5 FIBRIN VERSUS HUMANES PLASMA ALS SUBSTRAT 63
1.3.6 EINFLUSS VON TGF-SS 70
1.3.7 EINFLUSS EINER KONTINUIERLICHEN VEGF-SUBSTITUTION 72
1.3.7 EINFLUSS VON IGF-1 UND SOMATOTROPIN 75
I. 3.7 VERGLEICH MIT HUMANEN REFERENZGEWEBEN 82
ABSCHNITT
II:
KAPILLARAEHNLICHE NETZE UNTER DYNAMISCHEN KULTURBEDINGUNGEN FUER DAS
TISSUE-
ENGINEERING VASKULARISIERTER GEWEBE 89
II. L VORUEBERLEGUNGEN 89
II. 1.1 ROTATIONSKULTUREN IN 3D MODULEN ("ROTATING WALL VESSEL") 91
II. 1.2 PERFLUORCARBONE ALS SAUERSTOFFTRAEGER 92
II. 1.3 FRAGESTELLUNGEN 93
II.2 MATERIAL UND METHODE 94
11.2.1 MEDIEN UND ZELLEN 94
11.2.2 ROTATIONSKULTUREN 94
-
GRUPPE 1 UND 2: PERFLUORDECALIN ALS MEDIUMZUSATZ 96
-
GRUPPE 3: VEGF-SUBSTITUTION 97
-
GRUPPE 4: SERUMFREIES MEDIUM UND SOMATOTROPINZUSATZ 97
11.2.3 PRAEPARATEGEWINNUNG UND MARKIERUNG MIT UEA-I-TRITC 99
V
11.2.4 BESCHREIBENDE STATISTISCHE AUSWERTUNG UEA-I-MARKIERTER PRAEPARATE
99
11.2.5 SCHLIESSENDE STATISTIK 100
-
STATISTISCHE AUSWERTUNG DER FELDSUMMENWERTE 100
-
STATISTISCHE AUSWERTUNG DER HISTOGRAPHISCHEN LAENGENVERTEILUNG 103
11.2.6 SAUERSTOFFMESSUNGEN IM MEDIUM UND STATISTISCHE AUSWERTUNG 106
11.2.7 PH-MESSUNGEN IM MEDIUM 105
11.2.8 DIL-AC-LDL-MARKIERUNG 105
11.2.9 INDIREKTE IMMUNFLUORESZENZ UND DOPPELMARKIERUNGEN 106
-
CD 31-ANTIGEN (PECAM) 106
-
VON WILLEBRAND FAKTOR 107
-
A-ACTIN 107
11.2.10 TRANSMISSIONSELEKTRONENMIKROSKOPIE 108
11.2.11 RASTERELEKTRONENMIKROSPKOPIE 108
II.3 ERGEBNISSE 110
11.3.1 QUANTITATIVE AUSWERTUNG KAPILLARARTIGER STRUKTUREN 110
-
GRUPPEN 1 UND 2: STANDARDMEDIUM MIT/OHNE PERFLUORDECALIN 110
-
GRUPPE 3: KONTINUIERLICHE VEGF-SUBSTITUTION 118
-
GRUPPE 4:SERUMFREIES MEDIUM UND SOMATOTROPINZUSATZ 131
11.3.2 SAUERSTOFF-UND PH-MESSUNGEN IM MEDIUM 132
11.3.3 ERGAENZENDE ULTRASTRUKTURELLE UND IMMUNFLUORESZENZOPTISCHE
UNTERSUCHUNGEN 142
-
DIL-AC-LDL-MARKIERUNG 142
-
DOPPELMARKIERUNG MIT UEA-1 UND ANTI CD 31 144
-
VON WILLEBRAND FAKTOR 145
-
IMMUNFLUORESZENZMARKIERUNG MIT ANIT-A-ACTIN 145
-
TRANSMISSIONSELEKTRONENMIKROSKOPISCHE BEFUNDE 147
-
RASTERELEKTRONENMIKROSKOPIE 149
ABSCHNITT III:
UNTERSUCHUNGEN ZUR PERFUSION KAPILLARAEHNLICHER STRUKTUREN IN VITRO MIT
SIMULATION EINER GEFAESS-
GEWEBE-EINHEIT
III. 1 VORUEBERLEGUNGEN 151
III. 1.1 FRAGESTELLUNGEN 15 2
III.2 MATERIAL UND METHODE 154
III.2.1 KONFIGURATION DER VERSUCHSMODELLE 154
-
VERSUCHSMODELL 1 154
- VERSUCHSMODELL 2
156
- VERSUCHSMODELL 3
156
VI
-
VERSUCHSMODELL 4 159
111.2.2 SAUERSTOFFPARTIALDRUCKMESSUNGEN 160
111.2.3 UEA-MARKIERUNG UND CLSM-AUSWERTUNG 161
111.2.4 DIL-AC-LDL-PERFUSION 161
111.2.5 ULTRASTRUKTURELLE UNTERSUCHUNGEN 161
III.3 ERGEBNISSE 162
III. 3.1 ERGEBNISSE AN DEN VERSCHIEDENEN VERSUCHSMODELLEN 162
-
VERSUCHSMODELL 1 162
-
VERSUCHSMODELL 2 UND 3 164
-
VERSUCHSMODELL 4 169
IV. DISKUSSION 171
IV. 1 TISSUE ENGINEERING VASKULARISIERTER TRANSPLANTATE 171
IV.2 FETTGEWEBE ALS MODELL FUER DAS TISSUE ENGINEERING 172
IV.3 FETTGEWEBSSTROMAZELLEN UND ANGIOGENESE 174
IV.4 UNTERSUCHUNGSMETHODIK 175
IV.5 STATISCHES MODELL 176
IV.6 ROTATIONSKULTUREN 185
IV.7 PERFLUORCARBONZUSATZ UND OXYGENIERUNG 186
IV.8 PERFUSIONSKULTUREN 187
IV.9 KRITISCHE BETRACHTUNGEN ZUM KONZEPT EINES VASKULARISIERTEN
GEWEBERSATZES 190
IV. 10 AUSBLICK 192
V. LITERATURVERZEICHNIS 194
DANKSAGUNG 219
ERKLAERUNGEN 221
222
LEBENSLAUF |
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