Vitamin-D-Rezeptor-Polymorphismus und Osteoporose:
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2000
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INHALTSVERZEICHNIS
_I
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
1 ZUSAMMENFASSUNG 1
2 EINLEITUNG 2
2.1 DAS KRANKHEITSBILD OSTEOPOROSE 2
2.2 SOZIALMEDIZINISCHE ASPEKTE DER OSTEOPOROSE 4
2.3 VERFAHREN DER OSTEOPOROSEDIAGNOSTIK 5
2.4 KNOCHENPHYSIOLOGIE UND CALCIUMSTOFFWECHSEL 7
2.5 DIE ENTDECKUNG DES VITAMIN D-REZEPTOR-POLYMORPHISMUS 8
2.6 DERZEITIGER STAND DER ERFORSCHUNG DES VDR-POLYMORPHISMUS 9
2.7 DIE BERLINER ALTERSSTUDIE (BASE) - EIN IDEALES PROBANDENKOLLEKTIV 10
2.8 PROBLEMSTELLUNG UND ZIELSETZUNG DER DISSERTATION 13
3 MATERIAL UND METHODEN 1 5
3.1 MATERIAL 15
3.1.1 VERBRAUCHSMATERIAL 15
3.1.2 CHEMIKALIEN UND ZELLKULTURMEDIEN 15
3.1.3 REAKTIONSKITS 16
3.1.4 ENZYME 16
3.1.5 NUKLEINSAEUREN 16
3.1.6 RADIOAKTIV MARKIERTE VERBINDUNGEN 17
3.1.7 NUKLEINSAEURE-MOLEKULARGEWICHTSSTANDARDS 17
3.1.8 PLASMIDE 17
3.1.9 BAKTERIEN 17
3.1.10 PUFFERLOESUNGEN 17
3.1.11 GERAETE 18
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INHALTSVERZEICHNIS
II
3.2 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 2 0
3.2.1 ALLGEMEINE VERFAHREN 20
3.2.2 ISOLIERUNG VON DNA 20
3.2.3 AMPLIFIKATION DER DNA MIT DER POLYMERASEKETTENREAKTION 21
3.2.4
IN VITRO REKOMBINATION VON DNA 23
3.2.4.1 RESTRIKTIONSANALYSEN 23
3.2.4.2 ELEKTROPHORESE VON DNA 23
3.2.4.3 DNA-LIGATION 24
3.2.4.4 TRANSFORMATION VON
E.COLI 24
3.2.5 SEQUENZIERUNG VON DNA 25
3.2.5.1 DIDEOXYSEQUENZIERUNG NACH SAENGER 25
3.2.5.2 SEQUENZGELELEKTROPHORESE IM POLYACRYLAMIDGEL 26
3.3 RADIOLOGISCHE UNTERSUCHUNGSMETHODEN 2 7
3.3.1 THEORETISCHE UEBERLEGUNGEN 27
3.3.2 DURCHFUEHRUNG DER QUANTITATIVEN COMPUTERTOMOGRAPHIE (QCT) 2S
3.3.2.1 PATIENTENLAGERUNG 28
3.3.2.2 BESTIMMUNG DER UNTERSUCHUNGSEBENE 28
3.3.2.3 MESSUNG DER KNOCHENDICHTE 29
3.4 DATENVERARBEITUNG 3 1
3.4.1 COMPUTER UND PROGRAMME 31
3.4.2 STATISTISCHE METHODEN 31
4 ERGEBNISSE 3 3
4.1 OPTIMIERUNG DER PCR-AMPIFIKATION DES POLYMORPHEN VDR-ABSCHNITTS 3 3
4.2 VERIFIKATION DES PCR-FRAGMENTES 3 8
4.2.1 RESTRIKTIONSVERDAU DES PCR-PRODUKTES 38
4.2.2 KLONIERUNG UND SEQUENZIERUNG DES PCR-PRODUKTES 40
4.2.2.1 KLONIERUNG DES PCR-PRODUKTES 40
4.2.2.2 ANALYSE DER KLONE 41
4.3 SEQUENZANALYSE DES PCR-PRODUKTES
44
INHALTSVERZEICHNIS
-UEI
4.4 ETABLIERUNG EINER ALTERNATIVEN DNA-AMPLIFIKATION ZUR GENOTVPISIERUNG
48
4.5 GENOTVPISIERUNG DES BASE-KOLLEKTIVS 51
4.6 ERGEBNIS DER KNOCHENDICHTEMESSUNG 5 5
4.7 VERGLEICH DER KNOCHENDICHTEN MIT DEN GENOTYPEN 60
5 DISKUSSION 63
5.1 ASSOZIATION VON VDR-POLYMORPHISMUS UND KNOCHENDICHTE 63
5.2 BETRACHTUNG MOEGLICHER VORGAENGE AUF MOLEKULARER EBENE 6 5
5.3 POTENTIELLE URSACHEN FUER DIE UNGLEICHVERTEILUNG DER VDR-GENOTYPEN 6
7
5.4 DER GENETISCHE EINFLUSS AUF DIE KNOCHENDICHTE 6 9
5.5 BISHER ERSCHIENENE STUDIEN ZUM BSMI-POLYMORPHISMUS 7 0
5.6 DER STARTCODONPOLYMORPHISMUS 74
5.7 AUSBLICK 74
6 LITERATURVERZEICHNIS 7 6
7 ERKLAERUNG 87
8 LEBENSLAUF 88
9 DANKSAGUNG
90 |
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