Transformationsstudien an Vitis vinifera cv. 'Seyval blanc':
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L.LNHATAVERZEICHNU
1.
INHALTSVERZEICHNIS
1.
INHALTSVERZEICHNIS
.
I
2.
ABKUERZUNGEN
.
V
3.
EINLEITUNG
.
1
3.1
S
TILBENE
UND
R
ESVERATROL
.
1
3.1.1
TECHNISCHE
ANWENDUNG
.
7
3.1.2
MEDIZINISCHE
WIRKUNG
.
7
3.1.3
TOXISCHE
WIRKUNG
VON
STILBENEN
.
12
3.1.4
STILBENE
UND
DNA
.
16
3.1.5
VERWANDTE
SUBSTANZEN
.
16
3.2
G
ENETISCHE
T
RANSFORMATION
.
19
3.2.1
GENETISCHE
TRANSFORMATION
MIT
STILBENSYNTHASEGENEN
.
19
3.2.2
TRANSFORMATION
DURCH
ELEKTROPORATION
.
21
3.2.3
ERFOLGREICH
DURCHGEFUEHRTE
TRANSFORMATIONEN
BEI
DER
REBE
.
26
3.3
Z
IEL
DER
A
RBEIT
.
29
4.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
30
4.1
G
ERAETE
UND
SPEZIELLE
M
ATERIALIEN
.
30
4.2
S
PEZIELLE
E
NZYME
UND
C
HEMIKALIEN
.
32
4.3
P
RIMER
.
33
4.4
P
FLANZENMATERIAL
.
33
4.5
M
EDIEN
UND
L
OESUNGEN
.
34
4.5.1
MEDIUM
ZUR
BAKTERIENKULTUR
.
34
4.5.2
MEDIEN
ZUR
KULTUR
VON
PFLANZENMATERIAL
UND
PROTOPLASTENGEWINNUNG
.
34
4.6
P
LASMIDE
.
37
4.6.1
PLASMIDE,
DIE
VON
HERRN
PROF.
KINDL
ZUR
VERFUEGUNG
GESTELLT
WURDEN
.
37
4.6.2
PLASMIDE,
DIE
VON
HERRN
DR.
TOEPFER
ZUR
VERFUEGUNG
GESTELLT
WURDEN
.
38
4.6.3
EIGENKONSTRUKTE
.
38
4.6.4
SEQUENZIERUNG
VON
PLASMIDEN
.
41
4.7
I
SOLATION
VON
N
UKLEINSAEUREN
.
43
4.7.1
ISOLATION
VON
PLASMIDEN
.
43
4.7.2
DNA-ISOLATION
AUS
PFLANZENGEWEBE
.
44
4.8
K
ULTUR
UND
T
RANSFORMATION
VON
B
AKTERIEN
.
45
4.8.1
HERSTELLUNG
KOMPETENTER
ZELLEN
.
46
4.8.2
ELEKTROPORATION
VON
BAKTERIEN
.
46
4.9
T
RANSFORMATION
VON
IN
-
VITRO
N
ODIEN
MIT
A
GROBACTERIUM
TUMEFACIENS
.
47
4.10
H
ISTOCHEMISCHER
GUS-N
ACHWEIS
.
47
4.11
E
RMITTLUNG
DER
L
OESLICHKEIT
VON
S
TILBENEN
.
48
4.12
T
RANSFORMATION
VON
P
ROTOPLASTEN
MITTELS
E
LEKTROPORATION
.
49
4.12.1
PROTOPLASTIERUNG
.
49
4.12.2
ELEKTROPORATIONSBEDINGUNGEN
.
50
4.12.3
TRANSFORMATION
VON
PROTOPLASTEN
.
51
4.13
N
ACHWEIS
DER
TRANSIENTEN
GUS-E
XPRESSION
IN
P
ROTOPLASTEN
.
53
4.14
N
ACHWEIS
DER
TRANSIENTEN
S
TILBENSYNTHASE
-E
XPRESSION
IN
P
ROTOPLASTEN
.
53
4.14.1
ERMITTLUNG
DES
EMISSIONSMAXIMUMS
VON
RESVERATROL
.
54
4.14.2
MESSUNG
VON
RESVERATROL
AUS
ELEKTROPORIERTEN
PROTOPLASTEN
.
54
4.15
P
ROTOPLASTENREGENERATION
.
55
4.16
H
ISTOLOGISCHE
U
NTERSUCHUNGEN
ZUM
A
UFBAU
EINER
IN
-
VITRO
-K
NOSPE
.
56
4.16.1
FIXIERUNG
UND
EINBETTUNG
DES
GEWEBES
.
56
4.16.2
SCHNEIDEN
UND
FAERBEN
DER
EINGEBETTETEN
NODIEN
.
56
4.17
SOUTHERNANALYSE
.
56
4.17.1
SONDENHERSTELLUNG
FUER
DEN
NACHWEIS
VON
STILBENSYNTHASEGENEN
.
56
4.17.2
DEGENERIERTE
PCR
.
57
4.17.3
RESTRIKTION
GENOMISCHER
DNA
.
58
4.17.4
SOUTHEM-BLOTTING
.
58
4.17.5
HYBRIDISIERUNG
UND
DETEKTION
.
59
1.
INHALTSVERZEICHNIS
5.
ERGEBNISSE
.
60
5.1
SOUTHERNHYBRIDISIERUNG
.
60
5.1.1
GENOMISCHER
BLOT
.
60
5.1.2
PCR-BLOT
.
61
5.2
O
PTIMIERUNG
DER
E
LEKTROPORATIONSPARAMETER
.
62
5.2.1
PORENBILDUNGS
UND
LEBENSFAEHIGKEITSTEST
MIT
CALCEIN
UND
FDA
.
62
5.2.2
OPTIMIERUNG
DER
PULSZEIT
.
64
5.2.3
EFFEKT
DER
VERSCHIEDENEN
ELEKTROPORATIONSPUFFER
.
65
5.2.4
EFFEKT
DER
DNA-MENGE
AUF
DIE
EXPRESSION
.
66
5.2.5
EFFEKT
VON
LINEARISIERTEM
UND
ZIRKULAEREM
PLASMID
AUF
DIE
EXPRESSION
.
67
5.2.6
EFFEKT
DER
TEMPERATUR
AUF
ELEKTROPORIERBARKEIT
UND
PORENVERSCHLUSS
.
68
5.3
L
OESLICHKEIT
VON
R
ESVERATROL
.
70
5.4
T
RANSIENTE
E
XPRESSION
DES
GUS-G
ENS
IN
P
ROTOPLASTEN
.
71
5.5
T
RANSIENTE
E
XPRESSION
DES
S
TILBENSYNTHASEGENS
IN
P
ROTOPLASTEN
.
72
5.6
P
ROTOPLASTENREGENERATION
.
75
5.6.1
EINFLUSS
DES
KULTURMEDIUMS
.
75
5.6.2
EINFLUSS
VON
HORMONEN
.
75
5.6.3
EINFLUSS
VON
AKTIVKOHLE
UND
PH-WERT
.
76
5.6.4
EINFLUSS
DER
FELDSTAERKE
.
77
5.7
N
ODIENTRANSFORMATION
.
78
5.8
H
ISTOLOGISCHER
A
UFBAU
VON
IN
-
VITRO
N
ODIEN
.
80
6.
DISKUSSION
.
:
.
82
6.1
G
ENETISCHE
O
RGANISATION
VON
S
TILBENSYNTHASEGENEN
IN
V
ITIS
.
82
6.2
T
RANSFORMATION
VON
G
EWEBE
UND
P
ROTOPLASTEN
AUS
DER
R
EBE
.
88
6.2.1
TRANSFORMATION
VON
PROTOPLASTEN
.
88
6.2.2
ZUSAMMENHANG
VON
TRANSFORMATIONSRATE
UND
HISTOLOGISCHEM
AUFBAU
VON
IN-VITRO
KNOSPEN
.
94
6.3
R
EGENERATION
.
96
1
.INHALTSVERZEICHNIS
7.
ZUSAMMENFASSUNG
/
ABSTRACT
.
102
8.
LITERATURVERZEICHNIS
.
105
9.
ANHANG
.
121
9.1
T
ABELLARISCHE
UE
BERSICHT
ALLER
P
LASMIDE
.
121
9.2
G
RAPHISCHE
D
ARSTELLUNG
DER
VORHANDENEN
P
LASMIDE
.
123
9.2.1
PBIL
01
-DERIVATE
.
123
9.2.2
PUC-DERIVATE
.
125
9.3
S
EQUENZ
DER
STILBENSYNTHASESPEZIFISCHEN
S
ONDE
.
133 |
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