Isolierung und Charakterisierung des Gens für ein DNA-bindendes Protein aus Dictyostelium discoideum:
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| Language: | German |
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1999
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
ZUSAMMENFASSUNG.
_
.
1
2.
EINLEITUNG.~.3
2
1
MOBILE
GENETISCHE
ELEMENTE
.
3
2.2
RETROTRANSPOSONS
.
7
2.2
1
LTR-RETROTRANSPOSONS
.
7
2.2.2
NICHT-LTR-RETROTRANSPOSONS
.
10
2.3
DICTYOSTELIUM
DISCOIDEUM
.
12
2
4
MOBILE
GENETISCHE
ELEMENTE
IN
D.
DISCOIDEUM
.
16
2.4.1
LTR-RETROTRANSPOSONS
.
16
2.4
2
NICHT-LTR-RETROTRANSPOSONS
.
18
2
5
DER
C-MODUL
BINDENDE
FAKTOR
(CMBF)
IN
D.
DISCOIDEUM
.
22
2
6
ZIELSETZUNG
.
.
23
3.
MATERIAL
UND
METHODEN.
-----
.
25
3
1
CHEMIKALIEN,
GERAETE
UND
IHRE
BEZUGSQUELLEN
.
25
3
2
ALLGEMEINE
PUFFER
UND
LOESUNGEN
.
28
3
3
MEDIEN
.
29
3
4
SYNTHETISCHE
OLIGONUKLEOTIDE
.
30
3
5
VERWENDETE
ORGANISMEN
.
33
3
6
VEKTOREN
UND
PLASMIDE
.
34
3
7
ZUECHTUNG
VON
DICTYOSTELIUM
DISCOIDEUM
35
3.7
1
SPORENPRAEPARATION
.
35
3
7
2
ANLEGEN
VON
DMSO-GEFRIERSTOCKS
.
35
3
8
BIOCHEMISCHE
METHODEN
.
36
3
8
1
EXPRESSION
UND
REINIGUNG
EINES
CMBF-FRAGMENTES
IN
E.
COLI
.
36
3.8.2
RENATURIERUNG
DES
PROTEINS
CMBF
1001
'
2
"
.
37
3.8
3
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
.
37
3
84
FAERBUNG
MIT
COOMASSIE
BRILLANT
BLUE
R250
.
38
3
8
5
WESTERN
BLOT
.
39
3.8.6
GEL-RETARDATIONSEXPERIMENTE
.
40
3.8.7
FOOTPRINT-ANALYSE
MIT
DISTAMYCIN
.
41
3
9
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.
42
391
TRANSFORMATION
VON
BAKTERIEN
MIT
CACL
2
-KOMPETENTEN
ZELLEN
.
42
3.9
2
ELEKTROPORATION
VON
BAKTERIEN
.
43
3
9
3
TRANSFORMATION
CACL
2
-PRAEZIPITIERTER
DNA
IN
D.
DISCOIDEUM
.
44
3
9
4
SCHNELLPRAEPARATION
GENOMISCHER
DNA
AUS
D.
DISCOIDEUM
ZELLEN
.45
3.9
5
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
(FILL
IN-REAKTION)
.
46
3
9.6
NICK-TRANSLATION
.
46
3.9
7
SOUTHERN
BLOT
.
47
3
9
8
PRAEPARATION
VON
GESAMT-RNA
AUS
D
DISCOIDEUM
.
48
3
9
9
NORTHERN
BLOT
.
49
3
9.10
HYBRIDISIERUNGSMETHODEN
.
49
3
9.11
IN-VITRO-MUTAGENESE
.50
3
9
12
POLYMERASE-KETTEN-REAKTION
(PCR)
.
52
3.10
IDENTIFIZIERUNG
DER
CMBF-KODIERENDEN
DNA-SEQUENZ
.52
3
10
1
HERSTELLUNG
UND
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
DER
GENSONDE
JH-7B
.
53
3.102
GENOMI
SEHE
SOUTHERN
BLOTS
.
53
3.10.3
HERSTELLUNG
UND
SCREENING
VON
GENBANKEN
AUS
GENOMISCHER
DNA
VON
D.
DISCOIDEUM
.
54
3.10
4
INVERS-PCR
.54
4.
ERGEBNISSE.
_
TT1
YY,.,YY,
TTTT
YY
R
56
4.1
VERSUCH
ZUR
ISOLIERUNG
DES
CMBF
KODIERENDEN
GENS
UEBER
DIE
DNA
BINDENDEN
EIGENSCHAFTEN
DES
FAKTORS
.
57
4.2
IDENTIFIZIERUNG
DER
C/ 44-SEQUENZ
UEBER
DIE
AMINOSAEURESEQUENZ
VON
CMBF
.63
4.2.1
ISOLIERUNG
UND
MIKROSEQUENZIERUNG
VON
CMBF
.63
4
2
2
ISOLIERUNG
DES
CBFA-GEAS
.
64
423
ANALYSE
DES
CH#-GENS
.
67
INHALTSVERZEICHNIS
4
3
EIGENSCHAFTEN
DER
ABGELEITETEN
AMINOSAEURESEQUENZ
FUER
CMBF
.
.72
4.4
EXPRESSION
DES
C-TERMINALEN
ENDES
DES
C^4-GENS
IN
BAKTERIEN
.
.75
4
4.1
RENATURIERUNG
.
77
4
5
HERSTELLUNG
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
GEGEN
CMBF
1003
'
1206
78
4
6
GELRETARDATIONSEXPERIMENTE
MIT
CMBF
10
'
1206
.
80
4.7
VERSUCH
ZUR
ZERSTOERUNG
DES
CA/4-GENS
DURCH
HOMOLOGE
REKOMBINATION
.84
4
8
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
SPEZIFISCHEN
BINDUNG
VON
CMBF
AN
DAS
C-MODUL
.
86
4
8
1
FOOTPRINT-ANALYSE
VON
CMBS-2
UNTER
EINFLUSS
VON
DISTAMYCIN
.
87
4
8
2
DISTAMYCIN-GELRETARDATIONSEXPERIMENT
MIT
DEM
C-MODUL
.
.90
4
8.3
DISTAMYCIN-GELRETARDATIONSEXPERIMENT
MIT
CMBS-2
.
91
4
84
DISTAMYCIN-GELRETARDATIONSEXPERIMENTE
MIT
CMBF
1003
'
1206
.
92
5.
DISKUSSION.
_
.
_
.
95
5.1
ISOLIERUNG
DER
HISTON
H3
KODIERENDEN
CDNADCF/FD
AUS
D.
DISCOIDEUM
.
95
5.2
DIE
SEQUENZ
DES
CBFA
-GENS
.
98
5.2
1
KODIERT
DAS
-GEN
FUER
CMBF?
.
99
5.3
DIE
AMINOSAEURESEQUENZ
VON
CMBF
.
100
5
4
DIE
SPEZIFISCHE
BINDUNG
VON
CMBF
AN
DAS
C-MODUL
.
103
5
5
VERSUCHE
ZUR
DELETION
DES
CBFA-QEUES
.
106
5
6
PERSPEKTIVEN
.
107
6.
LITERATURVERZEICHNIS.
.109
7.
ABKUERZUNGEN
.
118 |
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