Untersuchungen zur PrtC-Kollagenase des Parodontitis-Erregers Porphyromonas gingivalis:
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
ABKQRZUNGSVERZEICHNIS
I. EINLEITUNG.1
1.1.
PORPHYROMONAS GINGIVALIS.1
1.1.1. TAXONOMIE.1
1.1.2. BIOCHEMIE.1
1.1.3. ASSOZIATION MIT MARGINALEN PARODONTOPATHIEN.2
1.1.4. P. GINGIVALIS IM TIERMODELL.3
1.1.5. VIRULENZFAKTOREN.5
1.2. KLINISCHES BILD DER MARGINALER PARODONTOPATHIEN.10
1.2.1. KASSIFIKATION.10
1.2.2. AETIOLOGIE DER ENTZUENDLICHEN, MARGINALEN PARODONTOPATHIEN.14
1.2.3. DIE BEDEUTUNG VON KOLLAGEN UND KOLLAGENASEN IM PARODONTIUM.16
1.3. ZIELSETZUNG.19
II. MATERIAL. 20
2.1. GERAETE.20
2.2. SONSTIGE MATERIALIEN.21
2.3. CHEMIKALIEN. 23
2.4. MOLEKULARGEWICHTSMARKER.24
2.5. SYNTHETISCHE OLIGONUKLEOTIDE.24
2.6. PLASMIDE.25
2.7. BAKTERIENSTAEMME.25
2.8. ENZYME U. A. PROTEINE.26
2.9. ANTIKOERPER-KONJUGATE.27
2.10. PATIENTENSEREN.27
2.11. MEDIEN, LOESUNGEN UND ALLGEMEINE PUFFER.27
III. METHODEN.30
3.1. ISOLIERUNG CHROMOSOMALER DNA.30
3.2. ISOLIERUNG VON PLASMID-DNA.30
3.2.1. PLASMID-MINIPRAEPARATION.31
3.2.2. PLASMID-MIDIPRAEPARATION.31
3.3. POLYMERASEKETTENREAKTION (PCR).32
3.3.1. PR/C-PCR (548 BP-FRAGMENT).33
3.3.2. PRTC-PCR (1002 BP-FRAGMENT).34
3.4. BESTIMMUNG DER DNA-KONZENTRATION MITTELS SPEKTRALPHOTOMETRIE.34
3.5. RESTRIKTION VON DNA.34
3.6. AGAROSE-GELELEKTROPHORESE ZUR DNA-AUFTRENNUNG.35
3.7. ISOLIERUNG VON DNA-FRAGMENTEN MITTELS PREP-A-GENE MATRIX.36
3.8. LIGATION VON DNA-FRAGMENTEN.37
3.9. HERSTELLUNG VON KOMPETENTEN E. CO//-ZELLEN.37
3.10. TRANSFORMATION VON E. COLI MIT PLASMID-DNA.38
3.11. HERSTELLUNG VON DNA-SONDEN MITTELS DIGOXIGENIN-MARKIERUNG.38
3.12. DETEKTION VON TRANSFORMANTEN MITTELS KOLONIEHYBRIDISIERUNG.39
3.13. TRANSFER VON DNA AUS AGAROSEGELEN AUF NITROZELLULOSEMEMBRANEN
(SOUTHEM-BIOT).41
3.14. DAS GLUTATHION-S-TRANSFERASE-EXPRESSIONSSYSTEM.42
3.14.1. EXPRESSION UND AUFREINIGUNG VON FUSIONSPROTEINEN MIT DEM
GLUTATHION-S-TRANSFERASE-
EXPRESSIONSSYSTEM.42
3.14.2. EXPRESSION UND REINIGUNG DER REKOMBINANTEN PRTC-KOLIAGENASE.44
3.15 EXPRESSION UND AUFREINIGUNG VON FUSIONSPROTEINEN MIT DEM
STREP-TAG-EXPRESSIONSSYSTEM.44
3.15. BESTIMMUNG DER PROTEINKONZENTRATION.45
3.16. PROTEINFAELLUNG MIT TRICHLORESSIGSAEURE.46
3.17. SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE) ZUR
PROTEINANALYSE.46
3.18. TRANSFER VON PROTEINEN AUF NITROZELLULOSEMEMBRANEN MITTELS
WESTERN-BLOT.48
3.19. DETEKTION EINER ANTIKOERPERREAKTION MITTELS IMMUNOBLOT.49
3.20. HERKUNFT UND GEWINNUNG DER PATIENTEN SEREN.50
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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3.21. ISOLIERUNG VON
P. GINGIVALIS AUS SUBGINGIVALEN PLAQUEPROBEN.50
3.22. NACHWEIS VON P. GINGIVALIS MIT HILFE DES BANA-TESTES. 51
3.23. UNTERSCHEIDUNG VON SCHWARZ-PIGMENTIERTEN ANAEROBIERN MITTELS
FLUORESZENZTEST.51
3.24. AUFREINIGUNG VON PCR-PRODUKTEN MITTELS YYQIAQUICK PCR PURIFICATION
KIT".52
3.25. DNA-SEQUENZIERUNG.52
3.26. BAKTERIENSTAMMKONSERVIERUNG.54
3.27. STATISTISCHE TESTS.54
3.28. KOLLAGENASEASSAYS.55
IV. ERGEBNISSE.56
4.1. IGG-, IGA- UND IGM-LMMUNANTWORT VON PATIENTEN MIT ADULTER
PARODONTITIS, FRUEH BEGINNENDER
PARODONTITIS UND GESUNDEN AUF DIE PRTC-KOLIAGENASE VON P. GINGIVALIS.56
4.2. KORRELATION DER PCR-DETEKTION VON P. GINGIVALIS MIT DER
KOLLAGENASESPEZIFISCHEN SERUM-LGA-
LMMUNANTWORT.58
4.3. CHARAKTERISIERUNG DER KLINISCHEN
P. GINGIVALIS-ISOLATE.59
4.4. SEQUENZANALYSE DER PRIC-GENE VERSCHIEDENER P. GINGIVALIS-LSOLATE.60
4.5. HETEROGENITAET DESPRRC-GENES.64
4.6. HETEROLOGIE DER AMINOSAEURESEQUENZEN DER PRTC-KOLLAGENASEN BEI
VERSCHIEDENEN ISOLATEN.67
4.7. PCR-RESTRIKTIONSFRAGMENTLAENGENPOLYMORPHISMUS (PCR-RFLP)
DESPR/C-GENES VON P. GINGIVALIS.69
4.8. KORRELATION DES PCR-RFLP DESPRTC-GENES MIT DEM KLINISCHEN BEFUND.73
4.9. GROESSE DES PRFC-GENS.75
4.10. HOMOLOGIE DER DNA- UND AMINOSAEURESEQUENZ ZU ANDEREN DNA- UND
AMINOSAEURE-SEQUENZEN.77
4.11. AKTIVITAET DER PRTC-FUSIONSPROTEINE IM KOLLAGENASEASSAY.-.81
V. DISKUSSION. 5
5.1. SERODIAGNOSE MIT HILFE DES PRTC-ANTIGENS.*5
5.2. HETEROGENITAET DES PRRC-GENES.
5.3. HOMOLOGIE DES PRTC-PROTEINS ZU ANDEREN PROTEINEN.91
5.4. AKTIVITAET DER KOLLAGENASE.91
VI. ZUSAMMENFASSUNG (DEUTSCH - ENGLISCH).94
VII. LITERATUR.98
LEBENSLAUF.114
PUBLIKATIONEN.* * 5
ERKLAERUNG."6
DANKSAGUNG.* * 7 |
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