Intrazytoplasmatische Spermieninjektion (ICSI) in vivo und in vitro gereifter porziner Oozyten mit Nebenhodenschwanzspermien und flowzytometrisch geschlechtsspezifisch sortierten Eberspermien:
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
11
2.
SCHRIFTTUM
13
2.1.
ASPEKTE
DER
OOGENESE
UND
BEFRUCHTUNG
BEIM
SCHWEIN
13
2.2.
PARTHENOGENETISCHE
ENTWICKLUNGEN
NACH
IN-VITRO-AKTIVIERUNG
VON
OOZYTEN
19
2.3.
ERSTELLUNG
IN
VIVO
UND
IN
VITRO
GEREIFTER
PORZINER
KUMULUS-OOZYTEN
KOMPLEXE
IHR
DIE
INTRAZYTOPLASMATISCHE
SPERMIENINJEKTION
23
2.3.1.
GEWINNUNG
PORZINER
KUMULUS-OOZYTEN-KOMPLEXE
(KOK)
23
2.3.2.
IN-VITRO-REIFUNG
PORZINER
KUMULUS-OOZYTEN-KOMPLEXE
24
2.4.
MIKROASSISTIERTE
FERTILISATION
30
2.4.1.
ALLGEMEIN
30
2.4.2.
TECHNIKEN
ZUR
ZONA
OEFFNUNG
31
2.4.3.
SUBZONALE
INJEKTION
(SUZI)
33
2.4.4.
INTRAZYTOPLASMATISCHE
SPERMIENINJEKTION
(ICSI)
35
2.4.4.1.
ALLGEMEIN
35
2.4.4.2.
HISTORISCHER
UEBERBLICK
36
2.4.4.3.
ANWENDUNG
DER
ICSI
BEI
MENSCHEN
38
2.4.4.4.
ANWENDUNG
DER
ICSI
BEI
VERSCHIEDENEN
HAUSTIEREN
39
2.4.4.4.
1.
TECHNISCHE
VORAUSSETZUNGEN
FUER
DIE
PRAKTISCHE
DURCHFUEHRUNG
DER
ICSI
39
2.4.4.4.2.
VORBEHANDLUNG
DER
SPERMIEN
VOR
DER
ICSI
40
2.4.4.4.3.
ICSI
MIT
SUB
ODER
INFERTILEN
SOWIE
UNTERSCHIEDLICH
AUSGEREIFTEN
SPERMIEN
41
2A.4.4.4.
MIKROTUBULAERE
PROZESSE
NACH
ICSI
42
2.4.4.4.5.
ICSI
MIT
FLOWZYTOMETRISCH
GESEXTEN
SPERMIEN
43
2.4.4.4.6.
INTRAZYTOPLASMATISCHE
SPERMIENINJEKTION
(ICSI)
BEI
VERSCHIEDENEN
HAUSTIEREN
45
2.4.4.4.7.
NACHKOMMEN
NACH
ICSI
52
2.5.
IN-VITRO-KULTUR
VON
EMBRYONEN
NACH
ICSI
BEI
VERSCHIEDENEN
HAUSTIEREN
54
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
56
3.1.
TIERMATERIAL
56
3.2.
ERSTELLUNG
IN
VIVO
GEREIFTER
OOZYTEN
56
3.2.1.
GEWINNUNG
IN
VIVO
GEREIFTER
KUMULUS-OOZYTEN-KOMPLEXE
56
3.2.2.
DENUDIERUNG
IN
VIVO
GEREIFTER
KUMULUS-OOZYTEN-KOMPLEXE
(KOK)
57
3.3.
ERSTELLUNG
IN
VITRO
GEREIFTER
KUMULUS-OOZYTEN-KOMPLEXE
57
3.3.1.
GEWINNUNG
DER
UNREIFEN
KUMULUS-OOZYTEN-KOMPLEXE
57
3.3.2.
IN-VITRO-MATURATION
DER
UNREIFEN
OOZYTEN
IN
TCM1
99
ODER
NCSU37
58
3.3.3.
VORBEHANDLUNG
DER
IN
VITRO
GEREIFTEN
KUMULUS-OOZYTEN-KOMPLEXE
(KOK)
59
3.3.4.
UEBERPRUEFUNG
DER
MATURATIONSRATE
59
3.4.
MORPHOLOGISCHE
BEURTEILUNG
IN
VITRO
UND
IN
VIVO
GEREIFTER
KUMULUS-OOZYTEN-KOMPLEXE
59
3.5.
GEWINNUNG
UND
VORBEREITUNG
DER
SPERMIEN
60
3.5.1.
GEWINNUNG
UND
KRYOKONSERVIERUNG
DES
NEBENHODENSCHWANZSPERMAS
60
3.5.2.
BEARBEITUNG
VON
NEBENHODENSCHWANZSPERMIEN
ZUR
INTRAZYTOPLASMATISCHEN
SPERMIENINJEKTION
(ICSI)
61
3.5.3.
GEWINNUNG
UND
KRYOKONSERVIERUNG
VON
GESEXTEM
SPERMA
61
3.5.4.
VORBEREITUNG
DES
GESEXTEN
SPERMAS
FIIR
DIE
INTRAZYTOPLASMATISCHE
SPERMIENINJEKTION
(ICSI)
62
3.6.
INTRAZYTOPLASMATISCHE
SPERMIENINJEKTION
(ICSI)
62
3.6.1.
MIKROMANIPULATIONSINSTRUMENTARIUM
62
3.6.2.
DURCHFUEHRUNG
DER
SPERMIENINJEKTION
68
3.7.
IN-VITRO-KULTUR
DER
SPERMIENINJIZIERTEN
OOZYTEN
/
KONTROLLGRUPPEN
70
3.8.
BEWERTUNG
DES
BEFRUCHTUNGSERFOLGES
71
3.8.1.
FIXATION
UND
FAERBUNG
DER
ZYGOTEN
IN
VERSUCHS
UND
KONTROLLGRUPPEN
ZUR
BEURTEILUNG
DER
VORKEMSTADIEN
71
3.8.2.
BEURTEILUNG
DES
ENTWICKLUNGSPOTENTIALS
KULTIVIERTER
EMBRYONEN
71
3.8.2.1.
MORPHOLOGISCHE
BEURTEILUNG
DER
KULTIVIERTEN
EMBRYONEN
NACH
48-STUENDIGER
IN-VITRO-KULTUR
71
3.8.2.2.
BESTIMMUNG
DER
ENTWICKLUNGSPOTENZ
UNTER
IN-VITRO-BEDINGUNGEN
DURCH
5-TAEGIGE
IN-VITRO-KULTUR
72
3.8.2.3.
UEBERPRUEFUNG
DER
VITALITAET
DER
EMBRYONEN
AUS
ICSI
DURCH
EMBRYOTRANSFER
73
3.9.
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
75
4.
ERGEBNISSE
76
4.1.
INTRAZYTOPLASMATISCHE
SPERMIENINJEKTION
(ICSI)
IN
IN
VIVO
UND
IN
VITRO
GEREIFTE
OOZYTEN
76
4.1.1.
ERSTER
VERSUCHSABSCHNITT:
ENTWICKLUNGSVERHALTEN
IN
VIVO
UND
IN
VITRO
GEREIFTER
OOZYTEN
IM
ERSTEN
ZELLZYKLUS
NACH
INTRAZYTOPLASMATISCHER
SPERMIENINJEKTION
76
4.1.1.1.
AKTIVIERUNGSRATE
IN
VIVO
UND
IN
VITRO
GEREIFTER
OOZYTEN
NACH
ICSI
80
4.1.1.2.
BEWERTUNG
DER
BEFRUCHTUNGS
BZW.
PARTHENOGENESERATE
NACH
ICSI
82
4.1.2.
ZWEITER
VERSUCHSABSCHNITT:
ENTWICKLUNGSVERHALTEN
IN
VITRO
KULTIVIERTER
EMBRYONEN
48
STUNDEN
NACH
INTRAZYTOPLASMATISCHER
SPERMIENINJEKTION
85
4.1.2.1.
ERGEBNISSE
DER
MORPHOLOGISCH
BEURTEILTEN
TEILUNGSRATE
48
STUNDEN
NACH
ICSI
MIT
UNTERSCHIEDLICH
GEREIFTEN
OOZYTEN
90
4.1.3.
DRITTER
VERSUCHSABSCHNITT:
UEBERPRUEFUNG
DES
ENTWICKLUNGSVERHALTENS
ANHAND
VON
TEILUNGSRATEN
UND
ZELLKEMZAHL
NACH
5-TAEGIGER
IN-VITRO-KULTUR
DER
DURCH
INTRAZYTOPLASMATISCHE
SPERMIENINJEKTION
ERSTELLTEN
EMBRYONEN
93
4.1.3.1.
ERMITTLUNG
DER
TEILUNGSRATE
UND
DER
ZELLKEMZAHL
IN
VIVO
UND
IN
VITRO
GEREIFTER
OOZYTEN
AUS
ICSI
NACH
FLUORESZENZFAERBUNG
IM
ANSCHLUSS
AN
EINE
5-TAEGIGE
IN-VITRO-KULTUR
97
4.1.4.
VIERTER
VERSUCHSABSCHNITT:
UEBERPRUEFUNG
DER
ENTWICKLUNGSPOTENZ
DER
EMBRYONEN
DURCH
EMBRYOTRANSFER
100
4.1.5.
FUENFTER
VERSUCHSABSCHNITT:
ICSI
IN
VIVO
UND
IN
VITRO
GEREIFTER
OOZYTEN
MIT
GESEXTEM
SPERMA
101
5.
DISKUSSION
102
5.1.
INTRAZYTOPLASMATISCHE
SPERMIENINJEKTION
IN
VIVO
UND
IN
VITRO
GEREIFTER
SCHWEINEOOZYTEN
MIT
UNGESEXTEN
SPERMIEN
103
5.1.1.
ENTWICKLUNG
UND
NACHWEISVERFAHREN
VON
PARTHENOGENETISCH
GEBILDETEN
VORKEMEN
UND
TEILUNGEN
NACH
ICSI
105
5.1.2.
ENTWICKLUNGSVERHALTEN
IN
VIVO
UND
IN
VITRO
GEREIFTER
OOZYTEN
IM
ERSTEN
ZELLZYKLUS
NACH
INTRAZYTOPLASMATISCHER
SPERMIENINJEKTION
106
5.1.2.1.
AKTIVIERUNG
IN
VIVO
UND
IN
VITRO
GEREIFTER
OOZYTEN
DURCH
ICSI
107
5.1.2.2.
BEWERTUNG
DES
BEFTUCHTUNGSERFOLGES
UND
DER
PARTHENOGENESERATE
NACH
ICSI
109
5.1.3.
MORPHOLOGISCHE
BEURTEILUNG
IN
VITRO
KULTIVIERTER
EMBRYONEN
48
STUNDEN
NACH
INTRAZYTOPLASMATISCHER
SPERMIENINJEKTION
(ICSI)
112
5.1.4.
FLUORESZENZMIKROSKOPISCHE
BEURTEILUNG
DER
EMBRYONALENTWICKLUNG
ANHAND
VON
TEILUNGSRATEN
UND
DER
ZELLKEMZAHL
NACH
IN-VITRO-KULTUR
113
5.1.5.
UEBERPRUEFUNG
DER
VITALITAET
DER
EMBRYONEN
AUS
ICSI
DURCH
EMBRYOTRANSFER
115
5.2.
INTRAZYTOPLASMATISCHE
SPERMIENINJEKTION
IN
VIVO
UND
IN
VITRO
GEREIFTER
SCHWEINEOOZYTEN
MIT
FLOWZYTOMETRISCH
GESEXTEN
SPERMIEN
117
5.3.
KRITISCHE
BETRACHTUNG
DER
ANWENDUNG
DER
ICSI
FUER
DIE
EMBRYONALE
ENTWICKLUNG
118
5.4.
ZUSAMMENFASSENDE
BETRACHTUNG
UND
SCHLUSSFOLGERUNGEN
119
6.
ZUSAMMENFASSUNG
121
7.
SUMMARY
124
8.
LITERATURVERZEICHNIS
127
9.
ANHANG
160
9.1.
ZUSAMMENSETZUNG
DER
VERWENDETEN
MEDIEN
160
9.1.1.
ZUSAMMENSETZUNG
DER
PF-T
LOESUNG
(PARAFORMALDEHYD
MIT
TRITON
X-100)
160
9.1.2.
ZUSAMMENSETZUNG
DES
MOUNTING
MEDIUMS
160
9.1.3.
HOECHST-33342-FAERBELOESUNG
160
9.1.4.
HANCOCK-LOESUNG
161
9.1.5.
LACMOID-FAERBELOESUNG
161
9.1.6.
ZUSAMMENSETZUNG
DER
KULTURMEDIEN
162
10.
VERZEICHNIS
DER
ABBILDUNGEN
163
11.
VERZEICHNIS
DER
TABELLEN
165 |
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