Qualitativer und quantitativer Nachweis von humanem, nicht kovalent gebundenem Apolipoprotein(a) und Untersuchung zu dessen diagnostischer Relevanz in Bezug auf kardiovaskuläre Erkrankungen:
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
1. ABKUERZUNGEN 1
2. EINLEITUNG 3
2.1. LIPOPROTEINE
3
2.2. LIPOPROTEIN (A)
3
2.3. APOLIPOPROTEIN(A)
3
2.3.1 .STRUKTUR UND BIOCHEMIE DES APOLIPOPROTEIN(A) 3
2.3.2. METABOLISMUS DES LP(A)/ APO(A)
5
2.3.3. EPIDEMIOLOGIE UND PHYSIOLOGIE DES LP(A) UND APO(A) 6
2.3.4. EVOLUTION UND GENETIK DES APOLIPOPROTEIN(A)
6
2.3.5. PATHOPHYSIOLOGIE DES LP(A) UND APO(A) 7
2.3.6. KLINISCHE CHEMIE DES LP(A) UND APO(A)
8
2.3.7. NOMENKLATUR FUER APO(A) 9
2.3.8. NICHT KOVALENT GEBUNDENES APOLIPOPROTEIN (A) 1
0
3. ZIELSTELLUNG 11
3.1. DETAILLIERTE ZIELSTELLUNG UND METHODISCHES VORGEHEN 13
4. TEIL 1: DARSTELLUNG UND QUANTITATIVER NACHWEIS VON
F-APOLIPOPROTEIN(A) IN
HUMANEM PLASMA/SERUM 17
4.1. MATERIAL UND METHODEN 17
4.1.1. PERJODATKOPPLUNG NACH WILSON UND NAKANE 17
4.1.2. BIOTINYLIERUNG VON ANTIKOERPERN UND ANDEREN PROTEINEN 17
4.1.3. GESAMTPROTEINBESTIMMUNG
17
4.1.4. PROTEINBESTIMMUNG NACH BRADFORD 17
4.1.5. ELISA 18
4.1.6. DIFFERENZIELLE ELEKTROIMMUNDIFFUSION MODIFIZIERT NACH LAUREIL 18
4.1.7. DISKONTINUIERLICHE SDS-PAGE NACH LAEMMLI 18
4.1.8. SDS-PAGE MIT DEM PHASTSYSTEM
YY
20
4.1.9. SILBERFAERBUNG 20
4.1.10. LIPIDELEKTROPHORESE MIT LIPIDOPHOR
YY
20
4.1.11. ZWEIDIMENSIONALE ELEKTROPHORESE ZUM NACHWEIS VON F-APO(A) 20
4.1.12. IMMUNBLOTTING NACH SDS-PAGE 21
4.1.13. IMMUNBLOTTING NACH LIPIDELEKTROPHORESE UND SDS PAGE MIT DEM
PHASTSYSTEM
YY
21
4.1.14. ULTRAZENTRIFUGATION LP(A)-HALTIGER PLASMEN 22
4.1.15. AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE AN LYSIN-SEPHAROSE
22
4.1.16. BESTIMMUNG DER FIBRINOLYTISCHEN AKTIVITAET VON ISOLIERTEM APO(A)
23
4.1.17. SEQUENZVERGLEICHE 23
4.1.18. PEPTIDSYNTHESE 24
4.1.19. PEPTIDBIBLIOTHEK 24
4.1.20. BERECHNUNG DES CUT-OFFS 25
4.1.21. KOPPLUNG VON NHS-SEPHAROSE MIT SYNTHETISCHEM PEPTID 25
4.1.22. AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE AN PEPTID-SEPHAROSE 25
4.1.23. ELLSA 26
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INHALTSVERZEICHNIS
4.1.24. STATISTISCHE METHODEN 26
4.2. ERGEBNISSE 27
4.2.1. DARSTELLUNG VON F-APOLIPOPROTEIN(A) IN HUMANEM PLASMA/SERUM 27
4.2.2. FIBRINOLYTISCHE AKTIVITAET VON F-APOLIPOPROTEIN(A) 34
4.2.3. PROTEOLYTISCHE AKTIVITAET VON F-APO(A) GEGENUEBER APO B 35
4.2.4. BINDUNG VON F-APO(A) AN APOE 39
4.2.5. ENTWICKLUNG EINES SCREENING-SYSTEMS ZUR QUANTITATIVEN BESTIMMUNG
VON
F-APOLIPOPROTEIN(A) IN HUMANEM PLASMA/SERUM 43
4.3. DISKUSSION 52
4.3.1. NACHWEIS VON F-APOLIPOPROTEIN(A) IN HUMANEM PLASMA/SERUM 52
4.3.2. FIBRINOLYTISCHE UND PROTEOLYTISCHE AKTIVITAET VON F-APO(A) 55
4.3.3. ENTWICKLUNG EINES SCREENING-SYSTEMS ZUR QUANTITATIVEN BESTIMMUNG
VON
F-APOLIPOPROTEIN(A) IN HUMANEM PLASMA/SERUM 57
4.4. AUSBLICK 61
5. TEIL 2: UNTERSUCHUNG AN KHK-PATIENTEN UND GESUNDEN KONTROLLEN ZUR
BESTIMMUNG DER DIAGNOSTISCHEN RELEVANZ VON F-APOLIPOPROTEIN(A) IN
HUMANEM SERUM 62
5.1. MATERIAL UND METHODEN 62
5.1.1. NEPHELOMETRISCHER LP(A)-TEST 62
5.1.2.SANDWICH-ENZYM-LMMUNO-ASSAY, IMMUNOGMBH 62
5.1.3.SANDWICH-ENZYM-LMMUNO-ASSAY, ALERCHEK 62
5.1.4. FREIES APO(A)-ELLSA 62
5.1.5. STATISTISCHE METHODEN 62
5.1.6. PROBANDENKOLLEKTIV 63
5.1.7. PROBENGEWINNUNG UND MESSUNG 63
5.2. ERGEBNISSE UND DISKUSSION 64
6. APPENDIX 70
6.1. ABBILDUNGS-UND TABELLENVERZEICHNIS 70
6.2. ABBILDUNGEN UND TABELLEN 75
6.2.1. FIBRINOLYTISCHE AKTIVITAET VON F-APOLIPOPROTEIN(A) 75
6.2.2. BINDUNG VON F-APOLIPOPROTEIN(A) AN APOE 77
6.2.3. REAKTIVITAET DES IMMOBILISIERTEN PEPTIDS APO
B^MOS MIT PROTEINEN DES
FIBRINOLYSE- UND GERINNUNGSSYSTEMS 77
6.2.4. REAKTIVITAET DES IMMOBILISIERTEN PEPTIDS APO B3375.3405 MIT
APOLIPOPROTEIN B 78
6.3. BEZUGSQUELLEN 79
6.3.1. ANTIKOERPER 82
7. ZUSAMMENFASSUNG 83
8. SUMMARY 86
9. DANKSAGUNG 89
10. LEBENSLAUF 90
11. LITERATURVERZEICHNIS 91 |
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