Der Experimentator: Proteinbiochemie, Proteomics:
Gespeichert in:
Vorheriger Titel: | Rehm, Hubert Der Experimentator Proteinbiochemie |
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1. Verfasser: | |
Format: | Buch |
Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
Heidelberg [u.a.]
Spektrum Akad. Verl.
2000
|
Ausgabe: | 3., überarb. Aufl. |
Schlagworte: | |
Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
Beschreibung: | X, 250 S. Ill., graph. Darst. |
ISBN: | 3827410258 |
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adam_text | Inhaltsverzeichnis
Vorwort yj
Danksagung VI
Abkürzungen XI
Das Konzept des Experimentators 1
1 Das tägliche Brot 3
1.1 Puffer herstellen 3
1.2 Protein bestimmen 4
1.2.1 BCA Test 5
1.2.2 Bradford Test 5
1.2.3 Lowry Test 5
1.2.4 Femer liefen 6
1.3 Gele 6
1.3.1 SDS Gele 6
1.3.2 Native Gele 9
1.4 Gele färben 10
1.4.1 Fixieren 10
1.4.2 Färben 11
1.4.3 Trocknen 14
1.5 Fällen und Konzentrieren 15
1.5.1 Denaturierende Fällung 15
1.5.2 Native Fällung 16
1.5.3 Konzentrieren 16
1.6 Blotten 17
1.6.1 Proteinfärbung auf Blots 19
1.6.2 Blocken 21
1.6.3 Immunfärbung 22
1.6.4 Ca2+ Bindung 24
1.6.5 Ligandenfärbung 24
1.7 Autoradiographie von Gelen und Blots 25
2 Ligandenbindung 29
2.1 Radioaktive Ligandenmarkierung 30
2.1.1 Iodierung von Peptiden und Proteinen 3q
2.1.2 Iodierung von Molekülen mit niedrigem MG 34
2.1.3 Isolierung einzelner iodierter Spezies 34
2.1.4 Vor und Nachteile des Iodierens 35
2.1.5 Tritiieren 37
2.2 Bindung 38
2.2.1 Isolierung von Membranen 38
2.2.2 Bindungstest 40
2.2.3 Bindungstests mit Membranen 41
2.2.4 Entwicklung von Membranbindungstests 44
2.2.5 Bindungstests mit löslichen Proteinen 45
2.2.6 Keine Bindung, was tun? 64
2.3 Auswertung von Bindungsdaten 65
2.3.1 Die Bindung ist im Gleichgewicht 66
2.3.2 Kinetik 77
2.4 Vernetzen von Liganden 82
2.4.1 Dreikomponentenvernetzung (3K Vernetzung) 82
2.4.2 Photoaffinitätsvernetzung 87
2.4.3 Kontrollen bei Vernetzungsversuchen 89
2.5 Sinniges 90
3 Membranproteine solubilisieren 94
3.1 Seifen 94
3.1.1 Saubere Begriffe 94
3.1.2 Vom Umgang mit Seifen 96
3.2 Solubilisieren 99
3.2.1 Solubilisierungskriterien 103
3.2.2 Physikalische Parameter solubilisierter Proteine 105
4 Proteinnachweis durch Funktionsmessung 107
4.1 Translokatoren 1°7
4.1.1 Liposomen 109
4.1.2 Proteoliposomen HO
4.2 Rekonstitution Hl
4.2.1 Rekonstitution aus einer Lösung Hl
4.2.2 Rekonstitution in vorgefertigte Liposomen 1*3
4.3 Fluxtest 113
4.3.1 Influxtest 115
4.3.2 Effluxtest 18
4.4 Aufbauende Überlegungen H9
5 Säubern und Putzen 121
5.1 Putziges l21
5.2 Konventionelle Reinigungsmethoden ^5
5.2.1 Zur Säulentechnik 126
5.2.2 Reinigung nach Größenunterschieden l2
5.2.3 Reinigung nach Ladungsunterschieden 130
5.2.4 Hydrophobe Chromatographie 138
5.3 Affinitätschromatographie 139
5.3.1 Lektinchromatographie 139
5.3.2 Ligandenchromatographie 141
5.4 Die Reinheitsprobe 147
5.5 Ausschlachten 148
6 Antikörper 151
6.1 Herstellung von polyklonalen Antikörpern 153
6.1.1 Antigen 153
6.1.2 Adjuvans 156
6.1.3 Injektion und Serumgewinnung 157
6.1.4 Reinigung von Antikörpern 158
6.2 Immunpräzipitation 159
6.2.1 Immunpräzipitation mit immobilisiertem Protein A 160
6.2.2 Immunpräzipitation mit immobilisiertem Antikörper 161
6.3 Immunoaffinitätschromatographie 161
6.4 Antikörper gegen ungereinigte Proteine 162
6.5 Immunologische Nachweistechniken 164
7 Proteomics 169
7.1 Einführung 169
7.2 Probennahme 172
7.3 2D Gelelektrophorese 176
7.4 Massenspektroskopie von Proteinen und Peptiden 181
7.4.1 Die Massenspektrometer 181
7.4.2 Probenvorbereitung für MALDI 186
7.4.3 Die Möglichkeiten von MALDI und ESI 188
7.5 Proteinchips mit SELDI 191
7.6 Mikrosequenzierung 194
7.6.1 Zubereiten des Proteins 194
7.6.2 Blockierte N termini 195
7.6.3 Spaltung des Proteins in Peptide 196
7.6.4 Carboxyterminale Sequenzierung 198
7.6.5 Leitersequenzierung von Peptiden 198
7.7 Strategie 203
8 Untereinheiten .„,
8.1 Stöchiometrie Merigkeit 2n5
8.1.1 Über die Schwierigkeiten bei Stöchiometriebestimmungen ......... 205
8.1.2 S M mit Röntgenstrukturanalyse 206
8.1.3 S M mit Hybridisierung 206
8.1.4 S M mit Vernetzung ™8
e t c c o »« ¦ » ¦ ^ °
8.1.5 S M mit Aminosäureanalysen oder Antikörpern 214
8.2 Was unsre Welt im Innersten zusammenhält 217
9 Glykoproteine iq
9.1 Wie, wo und wozu werden Proteine glykosyliert? 219
9.2 Nachweis von Glykoproteinen in Gelen 220
9.3 Nachweis von Glykoproteinen auf Blots 220
9.3.1 Nichtselektive Glykoproteinfärbung 220
9.3.2 Selektive (Lektin ) Färbung 222
9.4 Deglykosylierung 223
9.4.1 Glykosylierungshemmer 223
9.4.2 Endoglykosidasen 223
9.4.3 Chemische Deglykosylierung 230
9.5 Die Zuckerketten 231
9.5.1 Monosaccharidzusammensetzung 231
9.5.2 Aufbau und Sequenz 231
10 Der Schatz im Silbersee 237
10.1 Vom Paper 237
10.2 Vom Schreiben eines Papers 238
11 Durch die Wüste 240
12 Unter Geiern 242
12.1 Lieferanten 242
12.2 Lieferanten gegliedert nach Produkten 245
Das Letzte 247
Register 24g
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