Genotypische und immunologische Charakterisierung von Zytomegalievirusisolaten von knochenmarktransplantierten Patienten:
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1999
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INHALTSVERZEICHNIS
I
INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG 4
1.1. DIE HERPESVIREN 4
1.2. VIRUSSTRUKTUR 5
1.3. REPLIKATIONSZYKLUS 6
1.4. REGULATION DER VIRALEN GENEXPRESSION 6
1.5. EPIDEMIOLOGIE, PATHOGENESE UND KRANKHEITSBILDER DER
HCMV-INFEKTIONEN 7
1.6. HCMV-VARIANTEN 9
1.7. ZIELE DER VORLIEGENDEN ARBEIT 10
2. MATERIAL
11
2.1. GERAETE 11
2.2. CHEMIKALIEN 12
2.3. ENZYME 12
2.4. WEITERE VERBRAUCHSMATERIALIEN 13
2.5. SYNTHETISCHE OLIGONUKLEOTIDE 14
2.6. KULTURMEDIEN, PUFFER UND LOESUNGEN
3. METHODEN
18
3.1. RESTRIKTIONSFRAGMENT - LAENGENPOLYMORPHISMUS-ANALYSE (RFLP) 18
3.1.1. DNA-EXTRAKTION 18
3.1.2. REINIGUNG VON OLIGONUKLEOTIDEN 19
3.1.3. POLY MERASE-KETTEN-REAKTION (PCR) 19
3.1.4. AGAROSE-GELELEKTROPHORESE VON DNA 22
3.1.5. SPALTUNG MIT RESTRIKTIONSENZYMEN 22
3.1.6. POLYACRYLAMID-GELE 22
3.2. VIRUSVERMEHRUNG 23
3.2.1. KULTIVIERUNG VON HUMANEN EMBRYONALEN LUNGENFIBROBLASTEN (HEL) 23
3.2.2. INFEKTION VON HEL MIT HCMV 23
3.2.3. HERSTELLUNG VON ZELLFREIEM VIRUSUEBERSTAND 24
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INHALTSVERZEICHNIS
2
3.2.4. LANGZEITLAGERUNG VON INFIZIERTEN ZELLEN 24
3.2.5. VIRUSTITRATION: ID50 UND IEPU-BESTIMMUNG 24
3.2.6. HERSTELLUNG VON KANINCHEN ANTISEREN GEGEN HCMV 25
3.2.7. NEUTRALISATIONSTEST 26
3.2.8. KREUZNEUTRALISATIONSTEST 27
4. ERGEBNISSE
28
4.1. RESTRIKTIONSFRAGMENT - LAENGENPOLYMORPHISMUS-ANALYSE (RFLP)
KLINISCHER HCMV - ISOLATE 28
4.1.1. GEWINNUNG VON DNA AUS ZELLFREIEM EINGEFRORENEN VIRUSUEBERSTAND 28
4.1.2 ETABLIERUNG DER PCR FUER FRAGMENTE ZWISCHEN 2,0 - 2,7 KBP 28
4.1.3 REINIGUNG DER PCR-PRODUKTE 30
4.1.4. GELSYSTEME FUER RESTRIKTIONSFRAGMENTE . 30
4.1.5. GENOTYPISCHE CHARAKTERISIERUNG VON HCMV-ISOLATEN 31
4.1.6. RESTRIKTIONSANALYSE DER AMPLIFIZIERTEN FRAGMENTE 32
4.1.7 VERLAUFSBEOBACHTUNG SEQUENTIELLER ISOLATE AUS VERSCHIEDENEN
MATERIALIEN 38
4.1.8. STABILITAET DES RESTRIKTIONSMUSTERS IN VITRO 39
4.2. ERGEBNISSE AUS DEN NEUTRALISATIONSVERSUCHEN 40
4.2.1. ETABLIERUNG DER IEPU - BESTIMMUNG NACH 20H 40
4.2.2. KREUZNEUTRALISATIONTEST - METHODIK 41
4.2.3. NEUTRALISATIONSEFFIZIENZ EINES PATIENTENSERUMS IM VERLAUF DER KMT
42
4.2.4. KREUZNEUTRALISATIONSTEST 44
5. DISKUSSION
45
5.1. DIE RFLP-ANALYSE ZUR CHARAKTERISIERUNG VON HCMV 45
5.2 MOLEKULARBIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG VON HCMV MITTELS RFLP 46
5.3. DER KREUZNEUTRALISATIONSTEST - MOEGLICHKEIT ZUR IMMUNOLOGISCHEN
CHARAKTERISIERUNG VON HCMV 48
6. ZUSAMMENFASSUNG
51
7. LITERATURVERZEICHNIS
52 |
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