Untersuchung von DNA-Schutz- und Reparaturmechanismen in UVA- und UVB-bestrahlten Zellen der menschlichen Haut:
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1998
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INHALTSVERZEICHNIS
I
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS I
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS V
I EINLEITUNG
_1
1 UV-STRAHLUNG 1
2 SCHAEDIGENDE WIRKUNG DER UV-STRAHLUNG AUF DEN MENSCHEN 3
3 SCHAEDIGENDE WIRKUNG DER UV-STRAHLUNG AUF DIE ZELLE 7
4 ENDOGENE SCHUTZMECHANISMEN GEGEN UV-STRAHLUNG 9
5 DNA-REPARATURMECHANISMEN 12
6 PROBLEMSTELLUNG 16
II MATERIAL UND METHODEN
_19
1 ZELLKULTUR 19
1.1 ZELLINIE HACAT 19
1.2 NORMALE HUMANE EPIDERMALE KERATINOZYTEN 20
1.3 ISOLIERUNG HUMANER EPIDERMALER ZELLEN AUS SAUGBLASENBIOPSIEN 22
1.4 HUMANE DERMALE FIBROBLASTEN 22
1.5 BEHANDLUNG DER ZELLKULTUREN MIT WIRKSTOFFEN 23
1.5.1 BUTHIONINSULFOXIMIN ZUR GLUTATHION-DEPLETION 23
1.5.2 MG-ASCORBYLPHOSPHAT 24
1.5.3 A-TOCOPHEROL 24
1.5.4 MELATONIN 24
1.5.5 CIS- UND TRANS-UROCANINSAEURE 24
1.5.6 ECTOIN UND HYDROXYECTOIN 24
2 BESTRAHLUNG
25
2.1 UVA-BESTRAHLUNG 25
2.1.1 BESTRAHLUNG VON ZELLKULTUREN
27
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/958611351
INHALTSVERZEICHNIS
_II
2.1.2 BESTRAHLUNG VON DNA 28
2.2 UVB-BESTRAHLUNG 28
2.2.1 BESTRAHLUNG VON ZELLKULTUREN 30
2.3 SONNENSIMULATOR-BESTRAHLUNG IN VIVO 30
3 ZYTOTOXIZITAETSTESTS 30
3.1 NEUTRALROT-TEST 30
3.2 TRYPANBLAUFAERBUNG 32
4 GLUTATHION-BESTIMMUNG 32
4.1 ERSTELLEN EINER EICHGERADEN MIT REDUZIERTEM GLUTATHION 33
4.2 AUFARBEITUNG DER ZELLEN FUER DIE GLUTATHION-BESTIMMUNG 33
4.3 DURCHFUEHRUNG DER GLUTATHION-BESTIMMUNG 34
5 ABTS-TEST 34
5.1 HEMMUNG DER ABTS* KATIONRADIKALBILDUNG 34
5.2 REDUKTION DES ABTS* KATIONRADIKALS 35
6 EINZELZELLGELELEKTROPHORESE 36
6.1 SILANOXIDBESCHICHTUNG VON OBJEKTTRAEGERN 36
6.2 DURCHFUEHRUNG DER EINZELZELLGELELEKTROPHORESE 37
7 NACHWEIS VON DNA-STRANGBRUECHEN UND ALS IN ISOLIERTER DANN 40
8 DURCHFLUOZYTOMETRIE 41
8.1 NACHWEIS VON THYMINDIMEREN UND (6-4) PHOTOPRODUKTEN 41
8.2 ZELLZYKLUSANALYSE 43
9 IMMUNFLUORESZENZNACHWEIS DER POLY(ADP-RIBOSYL)IERUNG 44
10 NACHWEIS DER KOLLAGENASE-MRNA EXPRESSION 46
10.1 RNA-ISOLIERUNG 46
10.2 NORTHERN BLOT 48
11 DNA-METHYLIERUNGSSTUDIEN MIT DER METHYLASE HAPII 51
12 RESTRIKTIONSENZYMVERDAU VON PLASMIDEN 54
INHALTSVERZEICHNIS
III
HI ERGEBNISSE
_56
1 UNTERSUCHUNGEN MIT UVA-BESTRAHLTEN ZELLEN 56
1.1 PHOTOTOXIZITAET VON UVA-STRAHLUNG 56
1.1.1 NORMALE HUMANE EPIDERMALE KERATINOZYTEN 56
1.1.2 HUMANE IN VITRO GENERIERTE DENDRITISCHE ZELLEN 57
1.2 DNA-SCHAEDEN UND DNA-REPARATUR IN KERATINOZYTEN 58
1.2.1 EINFLUSS VERSCHIEDENER ANTIOXIDANTIEN 60
1.2.2 EINFLUSS DES GLUTATHIONGEHALTES 64
1.2.3 WIRKUNG VON ECTOIN UND HYDROXYECTOIN 67
1.3 DNA-SCHAEDEN IN IN VITRO GENERIERTEN DENDRITISCHEN ZELLEN 68
1.4 EINFLUSS VON ANTIOXIDANTIEN, ECTOIN UND HYDROXYECTOIN AUF DIE
KOLLAGENASE-MRNA
EXPRESSION IN HUMANEN DERMALEN FIBROBLASTEN 70
1.5 UNTERSUCHUNGEN ZUR POLY(ADP-RIBOSYL)IERUNG 71
2 UNTERSUCHUNGEN MIT UVB-BESTRAHLTEN ZELLEN 73
2.1 PHOTOTOXIZITAET VON UVB-STRAHLUNG 73
2.1.1 ZEIT- UND DOSIS-ABHAENGIGKEIT 73
2.1.2 EINFLUSS DES ANTIOXIDANSSTATUS 75
2.2 DNA-SCHAEDEN UND DNA-REPARATUR 75
2.2.1 EINFLUSS VON MG-ASCORBYLPHOSPHAT 77
2.2.2 EINFLUSS DES GLUTATHIONGEHALTES 79
2.2.3 WIRKUNG VON ECTOIN UND HYDROXYECTOIN 81
3 UNTERSUCHUNGEN IN YYIN VIVO" UV-BESTRAHLTEN ZELLEN 82
4 UNTERSUCHUNGEN ZUR WIRKUNGSWEISE VON ECTOINEN 83
4.1 ANTIOXIDATIVES POTENTIAL 83
4.2 PROTEKTION ISOLIERTER UVA-BESTRAHLTER DNA 88
4.3 WECHSELWIRKUNGEN MIT DER DNA 89
INHALTSVERZEICHNIS
IV
IV DISKUSSION
_92
1 PHOTO- UND GENOTOXIZITAET VON UVA- UND UVB-STRAHLUNG 92
2 EINFLUSS DES ANTIOXIDANSSTATUS AUF DIE UVA-INDUZIERTE DNA-SCHAEDIGUNG
UND
DNA-REPARATUR 96
3 EINFLUSS DES ANTIOXIDANSSTATUS AUF DIE UVB-INDUZIERTE DNA-SCHAEDIGUNG
UND
DNA-REPARATUR 104
4 ZYTOPROTEKTIVE EIGENSCHAFTEN VON ECTOIN UND HYDROXYECTOIN IN
MENSCHLICHEN
HAUTZELLEN 110
5 POLY(ADP-RIBOSYL)IERUNG ALS MOLEKULARE ANTWORT AUF UVA-INDUZIERTE
DNA-SCHAEDEN 117
V ZUSAMMENFASSUNG_121
VI ANHANG
_123
1 ZYTOTOXIZITAETSDATEN 123
2 GLUTATHIONEICHKURVE 126
3 ABSORPTIONSSPEKTREN 127
4 STRUKTURFORMELN 131
VII LITERATURVERZEICHNIS
_132 |
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