Mechanismen der TZR-abhängigen und -unabhängigen Aktivierung primärer T-Zellen der Ratte durch CD28:
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INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG^.1
1.1 B- UND T-ZELLEN, ANTIGENPRAESENTATION.1
1.2 T-ZELLAKTIVIERUNG, KOSTIMULATION.2
1.3 MEMBRANUMLAGERUNGEN UND MIKRODOMAENEN.5
1.4 SIGNALTRANSDUKTIONSKASKADEN.7
1.4.1 MOTIVE, DOMAENEN: IT AM, SH2, SH3, PH.7
1.4.2 STRUKTUR/AUFBAU VON SIGNALKASKADEN.9
1.4.3 TZR-SIGNALTRANSDUKTION.11
1.4.4 CD28-SIGNALTRANSDUKTION.16
1.4.5 SERIN / THREONIN-KINASE-KASKADEN.21
1.5 TRANSKRIPTIONSFAKTOREN. 22
1.6 ZIEL DER ARBEIT.
:.23
2. MATERIALIEN.25
2.1 VERSUCHSTIERE.25
2.2 ANTIKOERPER UND SEREN.25
2.3 INHIBITOREN.26
2.4 CHEMIKALIEN.27
2.5 PUFFER UND MEDIEN.27
2.6 STANDARDS UND KITS.28
2.7 FUSIONSPROTEINE,.28
3. METHODEN.29
3.1 ZELLZAHLBESTIMMUNG^.29
3.2 GEWINNUNG VON LYMPHKNOTENZELLEN.29
3.3 T-ZELLAUFREINIGUNG DURCH NYLONWOLLSAEULE.29
3.4
IN VITRO-ZELLSTIMULATION.30
3.5 PROLIFERATIONSASSAY,.30
3.6 HERSTELLUNG VON PERVANADAT UND PERVANADAT-STIMULATION.31
3.7 HERSTELLUNG EINER NATRIUM-ORTHOVANADAT-LOESUNG.31
3.8 ZELLYSE.31
3.9 IMMUNPRAEZIPITATION.32
3.10 SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE.33
3.11 WESTERN BLOT.34
3.12 YYSTRIPPING" VON MEMBRANEN.35
3.13
LN VITRO-KINASE-ASSAY.35
3.14 ENOLASE-DENATURIERUNG.36
3.15 IL-2-ELISA 37
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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3.16 AUFREINIGUNG VON GST-FUSIONSPROTEIN.37
3.17 PROTEINGELFAERBUNG MIT COOMASSIE BLUE.38
4. ERGEBNISSE.39
4.1 PROLIFERATION UND IL-2-PRODUKTION.39
4.2 EFFEKTE PHARMAKOLOGISCHER INHIBITOREN AUF DIE PROLIFERATION.41
4.3 MEMBRANPROXIMALE SIGNALEREIGNISSE.47
4.3.1 ICK-AKTIVITAET.47
4.3.2 TZR -KETTE.48
4.3.3 ZAP-70.50
4.3.4 LAT UND SLP-76.51
4.4 MEMBRANDISTALE SIGNALEREIGNISSE (MAPK).53
4.4.1 ERK.53
4.4.2 P38. 54
4.4.3 JNK. 55
4.4.4 EINFLUSS VERSCHIEDENER INHIBITOREN AUF JNK-AKTIVITAET.55
5. DISKUSSION.63
5.1 EINGESETZTE METHODEN.63
5.2 MAPK IN TZR-, KO- UND DIREKTER CD28-STIMULATION.64
5.3 VIELE WEGE FUEHREN ZU MAPK.65
5.3.1 P56 ICK ALS YYFRUEHE" KINASE.65
5.3.2 BEDEUTUNG DES ZYTOSKELETTS.66
5.3.3 ANALYSE DER LCK-SUBSTRATE TZR U UND ZAP-70.66
5.3.4 UNTERSUCHUNG DER ZAP-70-SUBSTRATE LAT UND SLP-76.67
5.4 AKTIVIERUNG DES SIGRTALINTEGRATORS JNK DURCH DIREKTE
CD28-STIMULATION.71
5.5 CD28 ALS AUTONOMER SIGNALGENERATOR.73
5.6 ZWEI-SCHRITT-MODELL DER KOSTIMULATION.74
5.7 BEDEUTUNG MITOGENER SIGNALE FUER THL-/TH2-POLARISIERUNG.76
5.8 AUSBLICK.76
6. ZUSAMMENFASSUNG.78
7. ABSTRACT.80
8. LITERATUR.82
9. ABKUERZUNGEN.94
10. LEBENSLAUF.96
11. PUBLIKATIONEN.97 |
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