Anreicherung, Nachweis und Analyse fetaler Blutzellen aus maternalem venösem Blut:
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1999
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
E
INLEITUNG
.
1
2.
M
ATERIAL
UND
M
ETHODEN
.
12
2.1.
PUFFER
.
12
2.2.
ZELLEN
.
12
2.2.1.
HYBRIDOMZELLEN
.
12
2.2.2.
AUFTAUEN
UND
EINFRIEREN
VON
HYBRIDOMZELLEN
.
13
2.2.3.
HERKUNFT
DER
HAEMATOPOETISCHEN
GEWEBE
.
13
2.2.4.
PRAEPARATION
VON
MONONUKLEAEREN
ZELLEN
AUS
HUMANEM
PERIPHEREM
BLUT.
13
2.3.
ANTIKOERPER
.
15
2.3.1.
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
GEGEN
HUMANE
MOLEKUELE
.
15
2.3.2.
SEKUNDAERANTIKOERPER
.
15
2.4.
REINIGUNG
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
AUS
DEM
KULTURUEBERSTAND
VON
HYBRIDOMZELLEN
.
16
2.5.
KOPPLUNG
VON
FLUOROCHROMEN
AN
ANTIKOERPER
.
17
2.5.1.
KOPPLUNG
VON
CY5
.
17
2.5.2.
KOPPLUNG
VON
FLUORESCEINISOTHIOCYANAT
.
18
2.5.3.
KOPPLUNG
VON
PHYCOERYTHRIN
.
18
2.6.
MAGNETISCHE
ZELLSORTIERUNG
.
19
2.6.1.
ANREICHERUNG
HLA-A2*
UND
HLA-B7*
ZELLEN
.20
2.6.2.
ANREICHERUNG
CD34*
HAEMATOPOETISCHER
VORLAEUFERZELLEN
.20
2.6.3.
ANREICHERUNG
CD7R
NUKLEIERTER
ERYTHROIDER
ZELLEN
.
21
2.7.
ZELLKULTUR
.
21
2.7.1.
KULTUR
VON
HYBRIDOMZELLEN
BB7.2
UND
BB7.1
ZUR
ANTIKOERPERPRODUKTION
.21
2.7.2.
KULTUR
VON
CD34
+
HAEMATOPOETISCHEN
VORLAEUFERZELLEN
.
21
2.8.
FLUORESZENZ
IN
SITU-HYBRIDISIERUNG
.24
2.8.1.
FLUORESZENZ
IN
SITU-HYBRIDISIERUNG
MIT
CEP
X/Y
.
24
2.9.
IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG
.
25
2.9.1.
FAERBUNG
VON
MOLEKUELEN
AUF
DER
OBERFLAECHE
LEBENDER
ZELLEN
.
26
2.10.
IMMUNFLUORESZENZANALYSE
.
26
2.10.1.
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.
26
2.10.2.
FLUORESZENZMIKROSKOPIE
.27
2.11.
ZELLZAHLBESTIMMUNGEN
.
27
2.11.1.
BERECHNUNG
DER
ZELLZAHL
NACH
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.
27
2.11.2.
BESTIMMUNG
DER
ZELLZAHL
DURCH
MIKROSKOPIE
.28
3.
E
RGEBNISSE
.
29
3.1.
PHAENOTYPISIERUNG
VON
PBMC
AUS
FETALBLUT
.29
3.1.1.
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
CHARAKTERISIERUNG
FETALER
PBMC
.
29
3.1.2.
ZUSAMMENSETZUNG
VON
PBMC
AUS
FETALBLUT
IM
VERGLEICH
ZU
PBMC
AUS
ADULTEM
BLUT
HINSICHTLICH
DER
MHC1,
CD34
UND
CD71
EXPRESSION.
.31
3.2.
MOLEKULARBIOLOGISCHE
NACHWEISMETHODE
VON
FETALEN
ZELLEN
.32
3.2.1.
EFFIZIENZ
DER
DNA-SONDEN
IN
PBMC
AUS
WEIBLICHEN
UND
MAENNLICHEN
SPENDERN
.
33
3.2.2.
WIEDERFINDUNGSRATEN
VON
FISH
ANHAND
VON
10.000
ZELLEN
.34
3.3.
METHODEN
ZUR
ANREICHERUNG
FETALER
ZELLEN
AUS
MATEMALEM
VENOESEM
BLUT
.
35
3.3.1.
ANREICHERUNG
MHC1
+
ZELLEN
DURCH
MARKIERUNG
SPEZIFISCHER
HISTOKOMPATIBILITAETSANTIGENE
.
38
3.3.2.
ANREICHERUNG
CD34
+
HAEMATOPOETISCHER
VORLAEUFERZELLEN
.50
3.3.3.
ANREICHERUNG
CD71
+
NUKLEIERTER
ERYTHROIDER
ZELLEN
.
50
3.4.
IN
VITRO
EXPANSION
CD34
+
ERYTHROIDER
HAEMATOPOETISCHER
VORLAEUFERZELLEN
.
51
3.4.1.
SELEKTIVE
EXPANSION
FETALER
UND
ADULTER
CD34
+
ERYTHROIDER
HPC
.
51
3.4.2.
ANREICHERUNG
FETALER
ERYTHROIDER
CD34
+
HPC
AUS
MISCHUNGEN
VON
FETALEN
CD34*
HPC
UND
ADULTEN
CD34
+
HPC
.
53
3.5.
ANREICHERUNG
UND
NACHWEIS
FETALER
ZELLEN
AUS
VENOESEM
BLUT
SCHWANGERER
FRAUEN
.
54
3.5.1.
ANREICHERUNG
FETALER
HLA-A2*
UND
HLA-B7*
ZELLEN
AUS
MATERNALEM
BLUT
.
54
3.5.2.
ANREICHERUNG
CD34
+
HAEMATOPOETISCHER
VORLAEUFERZELLEN
AUS
MATERNALEM
BLUT
.57
3.5.3.
ANREICHERUNG
FETALER
CD71
+
NUKLEIERTER
ERYTHROIDER
ZELLEN
AUS
MATERNALEM
BLUT
.
59
4.
D
ISKUSSION
.62
4.1.
ANREICHERUNGS
UND
NACHWEISMETHODEN
FETALER
ZELLEN
.
62
4.1.1.
MAGNETISCHE
ANREICHERUNG
FETALER
ZELLEN
.
62
4.1.2.
FLUORESZENTER
NACHWEIS
FETALER
XY-ZELLEN
.
63
4.2.
DIE
ANREICHERUNG
FETALER
ZELLEN
AUS
MATEMALEM
VENOESEM
BLUT
.
66
4.2.1.
ANREICHERUNG
FETALER
ZELLEN
UEBEREIN
VOM
VATER
VERERBTES
HLA-ANTIGEN.,66
4.2.2.
ANREICHERUNG
UND
EXPANSION
FETALER
ERYTHROIDER
HAEMATOPOETISCHER
VORLAEUFERZELLEN
.
70
4.2.3.
ANREICHERUNG
FETALER
CD71
+
NUKLEIERTER
ERYTHROIDER
ZELLEN
.
73
4.3.
VERGLEICH
DER
ANREICHERUNGSMETHODEN
.
76
4.3.1.
MHC1
+
ZELLEN
UND
CD71
+
NRBC
.76
4.3.2.
ERYTHROIDE
CD34
+
HPC
.
78
4.3.3.
EINSATZ
IN
DER
PRAENATALMEDIZIN
?
.
80
5.
Z
USAMMENFASSUNG
.82
6.
L
ITERATURVERZEICHNIS
.
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