Klonierung von MERM3 aus muriner Niere und initiale Charakterisierung des putativen Apoptose-Mediators:
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2000
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INHALTSVERZEICHNIS
I
INHALTSVERZEICHNIS
ZUSAMMENFASSUNG
.
IV
1
EINLEITUNG
.
1
1.1
EINFUEHRUNG
.
1
1.2
NIERENENTWICKLUNG
.
1
1.2.1
UEBERBLICK
UEBER
DIE
NEPHROGENESE
.
1
1.2.2
MOLEKULARE
EREIGNISSE
UND
MECHANISMEN
DER
EPITHELIALEN
NEPHROGENESE
.
3
1.3
ENTDECKUNG
NEUER
EMBRYONALER
MURINER
NIEREN-MARKER
GENPRODUKTE
(MERMS)
MIT
DIFFERENTIELLER
EXPRESSION
WAEHREND
DER NEPHROGENESE.
.9
1.3.1
DAS
EXPRESSIONSMUSTER
VON
MERM3
WAEHREND
DER
NEPHROGENESE
.
10
1.4
APOPTOSE
WAEHREND
DER
NEPHROGENESE
.
10
1.4.1
APOPTOSE:
ZELLULAERE
UND
MOLEKULARE
MECHANISMEN
.
11
1.4.2
MORPHOLOGISCHE
VERAENDERUNGEN
BEI
APOPTOSE
.
17
1.4.3
APOPTOSE
IM
ADULTEN
GLOMERULUM
.
17
1.4.4
APOPTOSE
IM
TUBULOINTERSTITIELLEN
KOMPARTIMENT
.
18
1.4.5
AUTOIMMUNITAET
UND
APOPTOSE
.
19
1.4.6
ENTZUENDUNG
UND
APOPTOSE
.
19
1.4.7
FIBROSE
UND
APOPTOSE
.
19
1.5
ZIELSETZUNG
DER
VORLIEGENDEN
ARBEIT
.
20
2
METHODEN
UND
MATERIAL
.
22
2.1
ARBEITEN
MIT
NUKLEINSAEUREN
.
2.1.1
REINIGUNG
UND
KONZENTRIERUNG
VON
DNA
IN
WAESSRIGEN
LOESUNGEN
.
22
2.1.2
QUANTIFIZIERUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
.
23
2.1.3
RNA-ISOLATION
.
23
2.1.4
REVERSE
TRANSKRIPTION
DERMRNA
.
24
2.1.5
POLYMERASEKETTENREAKTION
(PCR)
.
26
2.1.6
NUKLAINSAEURENAUFTRENNUNG
DURCH
GEL-ELEKTROPHORESE
.
27
2.1.7
STORM-PHOSPHORIMAGINGSYSTEM
.
28
2.1.8
ENZYMATISCHE
DNA
SPALTUNG
.
28
II
INHALTSVERZEICHNIS
2.1.9
PCR-KLONIERUNG
.
29
2.1
10
TRANSFORMATION
VON
E.COLI
MIT
PLASMID
DNA
.
29
2.1.11
EXTRAKTION
UND
REINIGUNG
VON
PLASMID-DNA
.
30
2.1.12
GEN-BANK
SCREENING
.
32
2.1.13
5'-MARATHON
RACE
PCR
.
35
2.1.14
DNA-SEQUENZIERUNG
UND
SEQUENZANALYSE
.
35
2.1.15
NORTHERN
BLOT
ANALYSE
.
37
2.1.16
IN-SITU
HYBRIDISIERUNG
.
38
2.2
FOLSAEURE-TIERMODELL
DER
AKUTEN
TUBULUSNEKROSE
.
41
2.2.1
VERSUCHSAUFBAU
UND
-DURCHFUEHRUNG
.
41
2.2.2
EVALUATION
DER
NIERENSCHAEDIGUNG
.
41
2.3
MATERIAL
.
42
2.3.1
CHEMIKALIEN
.
42
2.3.2
FOTOMATERIALIEN
.
43
2.3.3
ENZYME
UND
REAGENZIEN-KITS
.
43
2.3.4
OLIGONUKLEOTIDPRIMER
.
44
2.3.5
BAKTERIENSTAEMME,
KULTUR
UND
EINFRIERMEDIEN
.
44
2.3.6
LOESUNGEN
UND
PUFFER
.
45
2.3.7
GERAETE/MASCHINEN
.
46
2.3.8
VERSUCHSTIERE
.
46
2.3.9
SONSTIGES
.
46
3
ERGEBNISSE
.
47
3.1
VERLAENGERUNG
DER
BEKANNTEN
SEQUENZ
VON
MERM3
DURCH
DAS
EST
EMEST5
.
47
3.2
KLONIERUNG
DER
MERM3-PROBE
.
47
3.3
NORTHERN
BLOT
.
48
3.4
KLONIERUNG
DER
MERM3
VOLLAENGE
CDNA
.
49
3.4.1
CDNA
LIBRARY
SCREENING
.
49
3.4.2
5
'-MARATHON
RACE
PCR
.
52
3.4.3
VERGLEICH
DER
MERM3
CDNA
SEQUENZ
MIT
EINER
MAUS-EST
DATENBANK
.
54
3.5
SEQUENZANALYSE
DER
MERM3
VOLLAENGE
CDNA
.
55
INHALTSVERZEICHNIS
III
3.5.1
ANALYSE
DER
CDNA
KONSENSUSSEQUENZ
VON
MERM3
.
57
3.5.2
ANALYSE
DER
PROTEINSEQUENZ
VON
MERM3
.
57
3.5.3
AEHNLICHKEIT
VON
MERM3
ZU
ANDEREN
GENEN
.
61
3.6
UNTERSUCHUNG
DER
MERM3
MRNA
VERTEILUNG
.
63
3.6.1
ORGANVERTEILUNG
DER
MERM3
MRNA
.
63
3.6.2
IN
SITU
HYBRIDISIERUNG
.
64
3.7
MERM3
MRNA
EXPRESSION
IN
DER
AKUTEN
TUBULUSNEKROSE
DER
MAUS.66
4
DISKUSSION
.
68
4.1
DIE
ENTDECKUNG
VON
MERM3
.
68
4.2
ZIELSETZUNG
DER
VORLIEGENDEN
ARBEIT
.
68
4.3
KLONIERUNG
DER
MERM3
VOLLAENGE
CDNA
.
69
4.3.1
KOLONIEHYBRIDISIERUNG
.
69
4.3.2
ANALYSE
DER
GEWONNENEN
KLONE
.
70
4.3.3
5'-MARATHON
RACE
PCR
.
71
4.4
SEQUENZANALYSE
DER
MERM3
CDNA
.
72
4.4.1
NUKLEINSAEURESEQUENZ
.
72
4.4.2
PROTEINSEQUENZ
.
72
4.4.3
MERM3
IST
EIN
NEUES
MURINES
GEN,
MIT
AEHNLICHKEIT
ZUM
HUMANEN
APOPTOSEMEDIATOR
DAP-3
.
75
4.5
VERTEILUNG
DER
MERM3
MRNA
.
76
4.5.1
ORGAN-VERTEILUNG
DER
MERM3
MRNA
.
76
4.5.2
EXPRESSION
DER
MERM3
MRNA
IN
DER
EMBRYONALEN
UND
ADULTEN
NIERE
.
77
4.5.3
MERM3
MRNA
EXPRESSION
IN
DER
AKUTEN
TUBULUSNEKROSE
DER
MAUS
.
79
4.6
SCHLUSSFOLGERUNGEN
.
80
LITERATURVERZEICHNIS
.
81
ABBILDUNGS
UND
TABELLENVERZEICHNIS
.
87
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
88
LEBENSLAUF
.
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