Klonierung und Charakterisierung postläsional regulierter cDNAs im Ischiasnerven der Ratte:
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1996
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1 EINLEITUNG
4
1.1 FRAGESTELLUNG UND ZIELE.7
2 MATERIAL UND METHODEN_8
2.1 MATERIAL.8
2.1.1 E.COLI-BAKTERIENSTAEMME.8
2.1.2 VEKTOREN. 8
2.1.3 OLIGODESOXYNUKLEOTIDE.9
2.1.4 CDNA BANKEN.10
2.1.5 ENZYME UND CHEMIKALIEN.10
2.1.6 SONSTIGE MATERIALIEN UND GERAETE.11
2.2 TIERVERSUCHE UND GEWEBEENTNAHME.12
2.2.1 LAESION DES ISCHIASNERVS.12
2.2.2 GEWEBEENTNAHME. 12
2.3 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN.13
2.3.1 SEQUENZIERUNG VON DNA.13
2.3.2 ISOLIERUNG VON GESAMT-RNA.13
2.3.3 ANREICHERUNG VON POLY(A)
+ RNA.14
2.3.4 RNA-GELELEKTROPHORESE UND NUKLEINSAEURETRANSFER AUF
FILTERMEMBRANEN.14
2.3.5 HYBRIDISIERUNG.14
2.3.6 RADIOAKTIVE MARKIERUNG VON CDNA-SONDEN.15
2.3.7 DURCHMUSTEM EINER CDNA-BANK.15
2.3.8 KLONIERUNG MITTELS RT-PCR.17
2.3.9 SEMIQUANTITATIVE RT-PCR.18
2.3.10 HERSTELLUNG DIGOXIGENIN-MARKIERTERTRANSKRIPTE.18
2.3.11 MOLEKULARBIOLOGISCHE STANDARDMETHODEN.19
2.4 HISTOCHEMISCHE METHODEN.19
2.4.1 VORBEHANDLUNG DER GEWEBE.19
2.4.2 PARAFFINEINBETTUNG.19
2.4.3 ANFERTIGUNG VON MIKROTOMSCHNITTEN.20
2.4.4
IN SITA-HYBRIDISIERUNG.20
3 ERGEBNISSE 22
3.1 IDENTIFIZIERUNG DIFFERENTIELL REGULIERTER CDNA KLONE.22
3.2 EINGEHENDE CHARAKTERISIERUNG AUSGEWAEHLTER CDNAS.25
3.2.1 PLASMOLIPIN.25
3.2.1.1 KLONIERUNG UND SEQUENZDATEN.25
3.2.1.2 NOITHEMBLOTANALYSEN.28
2
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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3.2.2 SDF-LSS/Y.38
3.2.2.1 KLONIERUNG UND SEQUENZDATEN.38
3.2.2.2 NORTHEMBLOTANALYSEN.43
3.2 2.3 ZELLULAERE LOKALISATION DURCH IN-SITU-HYBRIDISIERUNG.48
3.2.3 REPETITIVE SEQUENZEN MIT ID-ELEMENT.54
3.2.3.1 KLONIERUNG UND SEQUENZDATEN.54
3.2.3.2 NORTHEMBLOTANALYSEN.54
4 DISKUSSION_58
4.1
PLASMOLIPIN
.59
4.2 SDF LSS/Y.64
4.3 CDNAS
MIT REPETTTTVEN ELEMENTEN.67
5 ZUSAMMENFASSUNG_70
6 LITERATUR_72
7 ABKUERZUNGEN_82
8 ANHANG_84
3 |
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