Schubspannungsabhängige Steigerung des intrazellulären Kalziums in Endothelzellen: Rolle der Glykokalyx
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1998
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INHALTSVERZEICHNIS:
I.
EINLEITUNG
.
1
II.
METHODIK
.
5
1.
PRAEPARATION
DER
HUVEC
(HUMAN
UMBILICAL
VENOUS
ENDOTHELIAL
CELIS).
.
5
2.
VERSUCHSAUFBAU
.
6
2.1.
FLUSSKAMMER
.
6
2.2.
PERFUSIONSSYSTEM
.9
2.3.
MESSAUFBAU
FUER
KALZIUMMESSUNG.
.9
3.
VERSUCHSBESCHREIBUNG
.
12
3.1.
VORBEREITUNG
.
12
3.2.
VERSUCHE.
.
13
3.2.1.
FLUSSRATENERHOEHUNG
.
13
3.2.2.
ABHAENGIGKEIT
VOM
EXTRAZELLULAEREN
KALZIUM
.
14
3.2.3.
EINFLUSS
VON
DRUCKAENDERUNG,
BZW.
VISKOSITAETSAENDERUNG
VERSCHIEDENER
PERFUSIONSMEDIEN.
.
14
3.2.4.
INKUBATION
MIT
ENZYMEN
UND
LEKTINEN
.
15
3.2.5.
NACHWEIS
DER
WIRKSAMKEIT
VON
NEURAMINIDASE-UND
HEPARINASEBEHANDLUNG
MIT
RHODAMINMARKIERTEN
LEKTINEN
.
16
4.
LOESUNGEN
UND
PHARMAKA
.17
4.1.
KULTIVIERUNG
DER
HUVEC.
.
17
4.2.
PERFUSAT
.
17
4.3.
SUBSTANZEN
FUER
MESSUNG
UND
AUSWERTUNG.
.
18
4.4.
PERFUSATZUSAETZE.
.
18
5.
BERECHNUNG
UND
STATISTIK
.
19
5.1.
DRUCKMESSUNG
IN
DER
FLUSSKAMMER.
.
19
5.2.
SCHUBSPANNUNGSBERECHNUNG.
.
20
5.3.
BESTIMMUNG
DER
LEKTINBINDUNG
MITTELS
RHODAMINFLUORESZENZ
.
.21
5.4.
KALZIUMMESSUNG
.
21
5.5.
AUSWERTUNG
.
23
III.
ERGEBNISSE
.
25
1.
CHARAKTERISTIK
DES
DURCH
FLUSSRATENERHOEHUNG
INDUZIERTEN,
INTRAZELLULAEREN
KALZIUMANSTIEGS.
.
.25
1.1.
VERHAELTNIS
ZWISCHEN
AUSMASS
DER
FLUSSRATENERHOEHUNG
UND
HOEHE
DES
INTRAZELLULAEREN
KALZIUMANSTIEGS.
.
26
1.2.
REPRODUZIERBARKEIT
DES
FLUSSRATENINDUZIERTEN,
INTRAZELLULAEREN
KALZIUMANSTIEGS
.
26
1.3.
DAUER
DER
FLUSSINDUZIERTEN
ERHOEHUNG
DER
INTRAZELLULAEREN
KALZIUM
KONZENTRATION.
.
28
2.
ABHAENGIGKEIT
DES
DURCH
FLUSSRATENERHOEHUNG
INDUZIERTEN
INTRAZELLULAEREN
KALZIUMANSTIEGS
VOM
EXTRAZELLULAEREN
KALZIUM
.
30
2.1.
REDUKTION
VON
EXTRAZELLULAEREN
KALZIUMIONEN
DURCH
EGTA
.
30
2.2.
HEMMUNG
DES
REZEPTORMEDIIERTEN
KALZIUMEINSTROMS
DURCH
SK&F.
.
31
3.
BEDEUTUNG
DES
DRUCKS,
VERSCHIEDENER
MEDIEN
UND
DER
WANDSCHUBSPANNUNG
FUER
DAS
INTRAZELLULAERE
KALZIUM.
.
32
3.1.
WIRKUNG
ISOLIERTER
DRUCKAENDERUNGEN
AUF
DAS
INTRAZELLUAERE
KALZIUM.
.33
3.2.
EINFLUSS
DES
PERFUSIONSMEDIUMS
.
.34
3.3.
WANDSCHUBSPANNUNGSERHOEHUNG
DURCH
VISKOSITAETSAENDERUNG
.
36
4.
WIRKUNG
VON
INKUBATION
MIT
ENZYMEN,
DIE
TEILE
DER
GLYKOKALYX
ENTFERNEN,
AUF
DEN
DURCH
FLUSSRATENERHOEHUNG
INDUZIERTEN,
INTRAZELLULAEREN
KALZIUMANSTIEG.
.37
4.1.
WIRKUNG
VON
NEURAMINIDASE.
.
37
4.2.
WIRKUNG
VON
PHOSPHOLIPASE
C.
.
38
4.3.
WIRKUNG
VON
HEPARINASE.
.
39
4.4
KONTROLLINKUBATION.
.
.40
4.S.
WIRKUNG
VON
INKUBATION
MIT
LEKTINEN
AUF
DEN
DURCH
FLUSSRATENERHOEHUNG
INDUZIERTEN,
INTRAZELLULAEREN
KALZIUMANSTIEG.
.
42
4.5.1.
WIRKUNG
VON
TRITICUM
VULGARIS
AGGLUTININ
(WGA).
.
.42
4.5.2.
WIRKUNG
VON
RICINUS
COMMUNIS
AGGLUTININ
(RCA
T20
).
.
.43
4.6
BINDUNG
VON
RHODAMINMARKIERTEM
WGA
UND
PNA
(ARACHIS
HYPOGEAE
AGGLUTININ)
.
.44
IV.
DISKUSSION.
.
48
1.
DER
FLUSSRATENINDUZIERTE,
INTRAZELLULAERE
KALZIUMANSTIEG
IST
ABHAENGIG
VOM
AUSMASS
DER
FLUSSRATENERHOEHUNG
UND
WIEDERHOLT
AUSLOESBAR.
.
49
2.
FLUSSRATENINDUZIERTER
UND
REZEPTORMEDIERTER
KALZIUMANSTIEG:
ZWEI
UNTERSCHIEDLICHE
SIGNALPFADE
.51
3.
DER
FLUSSRATENINDUZIERTE,
INTRAZELLULAERE
KALZIUMANSTIEG
IST
NUR
EIN
TRANSIENTES
SIGNAL.
.
.53
4.1.
DER
FLUSSRATENINDUZIERTE,
INTRAZELLULAERE
KALZIUMANSTIEG
IST
NICHT
DURCH
EINE
ERHOEHTE
ATP-VERFUEGBARKEIT
AUSGELOEST.
.
55
4.2.
DER
FLUSSRATENINDUZIERTE,
INTRAZELLULAERE
KALZIUMANSTIEG
IST
AUCH
NICHT
DRUCKABHAENGIG.
.
56
4.3.
BICARBONATVERFUEGBARKEIT
IST
NICHT
RELEVANT
FUER
DEN
WANDSCHUBSPANNUNGSINDUZIERTEN,
INTRAZELLULAEREN
KALZIUMANSTIEG
56
4.4.
DER
FLUSSRATENINDUZIERTE,
INTRAZELLULAERE
KALZIUMANSTIEG
IST
WANDSCHUBSPANNUNGSABHAENGIG
.
57
5.
FLUSSSENSOR
DES
INITIALEN,
INTRAZELLULAEREN
KALZIUMANSTIEGS
IST
EIN
BESTANDTEIL
DER
ENDOTHELIALEN
GLYKOKALYX.
.
59
5.1
.WIRKSAMKEIT
DER
NEURAMINIDASE
UND
HEPARINASEBEHANDLUNG
62
V.
ZUSAMMENFASSUNG
.
66
VI.
LITERATURVERZEICHNIS
.
68
VII.
DANKSAGUNG
.
80
VIII.
LEBENSLAUF
.
81 |
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