Eigenschaften, Regulation und Funktion einer Hydrogenase im Wasserstoffmetabolismus der einzelligen Grünalge Scenedesmus obliquus:
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Marburg
Görich und Weiershäuser
1999
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| Series: | Wissenschaft in Dissertationen
462 |
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| adam_text | EIGENSCHAFTEN, REGULATION UND FUNKTION EINER HYDROGENASE IM
WASSERSTOFFMETABOLISMUS DER EINZELLIGEN GRUENALGE SCENEDESMUS OBLIQUUS
DISSERTATION ZUR ERLANGUNG DES DOKTORGRADES DER NATURWISSENSCHAFTEN (DR.
RER. NAT.) DEM FACHBEREICH BIOLOGIE DER PHILIPPS-UNIVERSITAET MARBURG
VORGELEGT VON ROBBE WUENSCHIERS GEBOREN IN BEIRUT/LIBANON F* MARBURG, IM
JUNI 1999 INHALTSVERZEICHNIS INHALTSVERZEICHNIS 1. EINLEITUNG. 1.1.
HYDROGENASEN 1 1.1.1. EINTEILUNG, STRUKTUR UND MECHANISMUS VON
HYDROGENASEN 2 1.1.2. PHYSIOLOGIE PROKARYONTISCHER HYDROGENASEN 6 1.1.3.
PHYSIOLOGIE CYANOBAKTERIELLER HYDROGENASEN 7 1.1.4. PHYSIOLOGIE
EUKARYONTISCHER HYDROGENASEN 9 1.1.5. WASSERSTOFF-METABOLISMUS IN
GRUENALGEN 9 1.1.6. HYDROGENASEN IN DER GRUENALGE S. OBLIQUUS 13 1.2.
PHOTOBIOLOGISCHER WASSERSTOFF ALS ENERGIEQUELLE 14 1.3. WEITERE
UNTERSUCHTE PROTEINE, DIE MIT DER HYDROGENASE AUS S. OBLIQUUS IM
ZUSAMMENHANG STEHEN 16 1.3.1. FERREDOXINE 16 1.3.2. CYTOCHROME 17
1.3.3. THIOREDOXINE 18 2. PROBLEMSTELLUNG 19 3. MATERIAL UND METHODEN 20
3.1. UNTERSUCHTER ORGANISMUS 20 3.2. ANZUCHT 20 3.3. BESTIMMUNG DER
BEZUGSPARAMETER 21 3.3.1. PCV-BESTIMMUNG 21 3.3.2. PROTEINKONZENTRATION
22 3.3.3. FERREDOXINKONZENTRATION 22 3.3.4. CYTOCHROM C6 -KONZENTRATION
23 3.4. POLAROGRAPHISCHE MESSUNG DER WASSERSTOFF-PRODUKTION 23 3.4.1.
DAS MESSSYSTEM 23 3.4.2. DER REAKTIONSANSATZ FUER DIE MESSUNGEN IN VITRO
25 3.4.3. DER REAKTIONSANSATZ FUER DIE MESSUNGEN IN VIVO 26 3.4.4.
AUSWERTUNG DER MESSDATEN 26 3.5. PHOTOMETRISCHE MESSUNG DER
WASSERSTOFF-AUFNAHME 26 3.5.1. REDUKTION VON METHYLVIOLOGEN 27 3.5.2.
REDUKTION VONNADP + 27 INHALTSVERZEICHNIS 3.5.3. INHIBITION DURCH
KOHLENMONOXID ODER NITRIT 27 3.6. GASCHROMATOGRAPHISCHE MESSUNG DES
WASSERSTOFFS 28 3.7. ANAEROBE ANREICHERUNG DER NIFE-HYDROGENASE 28
3.7.1. ERNTE UND ADAPTATION DER ALGEN 28 3.7.2. HERSTELLUNG EINES
ZELLFREIEN ROHEXTRAKTES 29 3.7.3. FRAKTIONIERTE AMMIONIUMSULFAT-FAELLUNG
30 3.7.4. SAEULENCHROMATOGRAPHISCHE REINIGUNGSSCHRITTE 30 3.8. REINIGUNG
VON FERREDOXIN UND CYTOCHROM C6 32 3.8.1. ANKONZENTRIERUNG UND
ENTSALZUNG DER UEBERSTAENDE 32 3.8.2. GELELEKTROPHORETISCHE AUFTRENNUNG 32
3.8.3. RUECKGEWINNUNG AUS DEM GEL 32 3.9. POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
(PAGE) VON PROTEINEN 33 3.9.1. SDS-PAGE 33 3.9.2. NATIVE PAGE 35 3.10.
ANFAERBUNG VON PROTEINEN NACH DER POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE 36
3.10.1. FAERBUNG MIT COOMASSIE-BLUE 36 3.10.2. SILBER-FAERBUNG 36 3.11.
WESTERN BLOTTING 38 3.11.1. TRANSFER VON PROTEINEN AUF NITROZELLULOSE 38
3.11.2. REVERSIBLE PROTEINFAERBUNG AUF NITROZELLULOSE 38 3.11.3.
INKUBATION MIT EINEM SPEZIFISCHEN ANTIKOERPER 39 3.11.4. NACHWEIS DER
ANTIKOERPER-MARKIERTEN PROTEINE 40 3.12. SPEKTROSKOPISCHE METHODEN 40
3.12.1. UV-/ VIS-SPEKTROSKOPIE 40 3.12.2. ATOMABSORPTIONS-SPEKTROSKOPIE
40 3.12.3 ESR-SPEKTROSKOPIE 41 3.12.4.
FOURIER-TRANSFORMATIONS-INFRAROT-SPEKTROSKOPIE 43 3.12.5. MESSUNG DER
CHLOROPHYLL A-FLUORESZENZAUSBEUTE IN VIVO 44 4. ERGEBNISSE UND
DISKUSSION. 4.1. REINIGUNG DER NIFE-HYDROGENASE 4.1.1.
ATOMABSORPTIONSSPEKTROSKOPISCHE UNTERSUCHUNG DES ELUATES DES
ANIONEN-AUSTAUSCHERS 4.1.2. WESTERN-BLOT ANALYSE DER REINIGUNGSSCHRITTE
4.2. CHARAKTERISIERUNG DER NIFE-HYDROGENASE 4.2.1.
TOTALREFLEKTIONS-ROENTGENFLUORESZENZ-SPEKTROSKOPIE 4.2.2.
ESR-SPEKTROSKOPIE .47 47 49 50 52 52 53 INHALTSVERZEICHNIS 4.2.3.
FOURIER-TRANSFORMATIONS-INFRAROT-SPEKTROSKOPIE 4.2.4. REVERSIBLE
INHIBIERUNG DER HYDROGENASEAKTIVITAET DURCH KOHLENMONOXID, NITRIT UND
SAUERSTOFF 4.2.5. KN-WERT FUER METHYLVIOLOGEN UND WASSERSTOFF 4.2.6.
REAKTION MIT FERREDOXIN 4.3. CHARAKTERISIERUNG VON CYTOCHROM C 4.3.1.
REINIGUNG DES CYTOCHROMS A 4.3.2. UVWIS-SPEKTROSKOPIE 4.3.3.
ESR-SPEKTROSKOPIE 4.3.4. BESTIMMUNG DER KRISTALLFELDPARAMETER 4.4.
EINFLUSS VON THIOLEN AUF DIE AKTIVITAET DER NIFE-HYDROGENASE 4.4.1.
DITHIOTHREITOL 4.4.2. GLUTATHION 4.4.3. THIOREDOXIN 4.4.4. WIRKUNGSWEISE
DER INHIBITION DURCH THIOLE 4.5. NEUE ASPEKTE ZUR FUNKTIONEN DER
NIFE-HYDROGENASE BEIM ANAEROBEN WASSERSTOFFMETABOLISMUS 57 59 67 69 72
73 73 75 77 80 80 82 83 85 87 4.5.1. BETEILIGUNG DER FD-NADP-REDUKTASE
BEI DER PHOTOREDUKTION VON CO2 87 4.5.2. DIE NIFE-HYDROGENASE ALS
WASSERSTOFFVENTIL BEI LICHT-DUNKEL-UEBERGAENGEN 91 4.5.3. HINWEISE FUER
EINE CHLOROPLASTIDAERE FD-PQ-REDUKTASE UND/ODER EINEN NDH-KOMPLEX 94 4.6.
ENTWICKLUNG EINES MODELL-BIOREAKTORS 98 5. ZUSAMMENFASSUNG 101 6.
LITERATUR 103 7. VEROEFFENTLICHUNGEN 117 8. DANKSAGUNG 118 9. LEBENSLAUF
119 INHALTSVERZEICHNIS 4.2.3.
FOURIER-TRANSFORMATIONS-INFRAROT-SPEKTROSKOPIE 57 4.2.4. REVERSIBLE
INHIBIERUNG DER HYDROGENASEAKTIVITAET DURCH KOHLENMONOXID, NITRIT UND
SAUERSTOFF 59 4.2.5. KM-WERT FUER METHYLVIOLOGEN UND WASSERSTOFF 67
4.2.6. REAKTION MIT FERREDOXIN 69 4.3. CHARAKTERISIERUNG VON CYTOCHROM
C6 72 4.3.1. REINIGUNG DES CYTOCHROMS C6 73 4.3.2. UV/VIS-SPEKTROSKOPIE
73 4.3.3. ESR-SPEKTROSKOPIE 75 4.3.4. BESTIMMUNG DER
KRISTALLFELDPARAMETER 77 4.4. EINFLUSS VON THIOLEN AUF DIE AKTIVITAET DER
NIFE-HYDROGENASE 80 4.4.1. DITHIOTHREITOL 80 4.4.2. GLUTATHION 82 4.4.3.
THIOREDOXIN 83 4.4.4. WIRKUNGSWEISE DER INHIBITION DURCH THIOLE 85 4.5.
NEUE ASPEKTE ZUR FUNKTIONEN DER NIFE-HYDROGENASE BEIM ANAEROBEN
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EINE CHLOROPLASTIDAERE FD-PQ-REDUKTASE UND/ODER EINEN NDH-KOMPLEX 94 4.6.
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