Zur Funktion von B-Typ-Cyclinen und von Cdk4/6 bei der Zellzyklus-Regulation in Drosophila melanogaster:
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| Format: | Book |
| Language: | German |
| Published: |
Bayreuth
<<H.>> Jacobs
1999
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| Item Description: | Zugl.: Tübingen, Univ., Diss., 1999 |
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INHALT
ZUSAMMENFASSUNG
1
1.
EINLEITUNG
5
1.1
DER
EUKARYOTISCHE
ZELLZYKLUS
5
1.2
CYCLIN
/
CDK
1
-KOMPLEXE
UND
DIE
REGULATION
DER
MITOSE
7
1.3
GEMEINSAMKEITEN
UND
UNTERSCHIEDE
IM
VERHALTEN
DER
MITOTISCHEN
CYCLINE
9
1.4
DIE
CYCBN-KOMPLEMENTE
DER
METAZOEN
UND
DER
HEFEN
SCHEINEN
UNABHAENGIG
ENTSTANDEN
ZU
SEIN
12
1.5
DER
ZELLZYKLUS
WAEHREND
DER
ENTWICKLUNG
DES
DRASPPMA-EMBRYOS
14
DIE
SYNCYTIALEN
ZYKLEN
14
DIE
POSTBLASTODERMALEN
ZYKLEN
15
DIE
EINFUEHRUNG
EINER
GL-PHASE
UND
DER
AUSTRITT
AUS
DER
PROLIFERATION
15
ENDOREDUPHKATION
UND
LARVALE
ZELLZYKLEN
16
1.6
WAS
IST
DIE
FUNKTION
DER
VERSCHIEDENEN
CYCLIN
/
CDKL-KOMPLEXE
BEI
DER
REGULATION
DER
MITOSE?
16
1.7
CYCLIN
D
/
CDK4-KOMPLEXE
UND
DIE
REGULATION
DES
EINTRITTS
IN
DEN
ZELLZYKLUS
18
1.8
WIE
NCHTIG
IST
DAS
DERZEITIGE
MODELL
ZUR
ROLLE
DES
RB-SIGNALWEGS?
20
2.
ERGEBNISSE
23
2.1
CYCLIN
B
IST
FUER
DIE
MITOSE
NICHT
ESSENTIELL
23
2
1.1
IDENTIFIZIERUNG
VON
VIER
LETALEN
KOMPLEMENTATIONSGRUPPEN
IN
DER
GENOMISCHEN
CYCLIN
AE-REGION
25
2.1.2
KEINE
DER
GEFUNDENEN
KOMPLEMENTATIONSGRUPPEN
ENTSPRICHT
CYCLIN
B
26
2.1.3
CYCLIN
AE-MUTANTEN
SIND
HOMOZYGOT
LEBENSFAEHIG
29
ISOLIERUNG
VON
CYCLIN
AE-MUTANTEN
29
CYCLIN
B
WIRD
FUER
DIE
MITOSE
NICHT
BENOETIGT,
IST
ABER
ESSENTIELL
FUER
MAENNLICHE
UND
WEIBLICHE
FERTILITAET
30
HYPOMORPHE
CYCLIN
B-MUTANTEN
ZEIGEN
TEILASPEKTE
DES
NULLMUTANTEN-PHAENOTYPS
32
CYCLIN
B-TRANSKRIPTE
ZEIGEN
EIN
KOMPLEXES
SPLEISSMUSTER
32
2.2
CYCLIN
B3
ZEIGT
CHARAKTERISTIKA
MITOTISCHER
CYCHNE,
IST
ABER,
WIE
CYCLIN
B,
FUER
DIE
MITOSE
NICHT
ESSENTIELL
33
2.2.1
CYCLIN
B3:
EIN
NEUARTIGES,
EVOLUTIONAER
KONSERVIERTES
B-TYP-CYCHN
33
2.2.2
DIE
EXPRESSION
VON
CYCLIN
B3
WAEHREND
DER
ENTWICKLUNG
KORRELIERT
MIT
PROLIFERATION
34
2.2.3
CYCLIN
B3
ASSOZIIERT
MIT
CDKL
UND
ANTI-CYCLIN
B3-IMMUNPRAEZIPITATE
ZEIGEN
IN
VITRO
HISTON
HL-KINASE-AKTIVITAET
38
2.2.4
CYCLIN
B3
IM
ZELLZYKLUS:
CYCLIN
B3
AKKUMULIERT
IM
ZELLKERN
UND
WIRD
IM
VERLAUF
DER
MITOSE
VERAENDERT
UND
DEGRADIERT
39
2.2.5
EXPRESSION
EINES
TRANSGENS,
DAS
EINE
NICHT
DEGRADIERBARE
FORM
VON
CYCLIN
B3
KODIERT,
FUEHRT
ZU
EINEM
ZELLZYKLUS-BLOCK
IN
DER
SPAETEN
ANAPHASE
42
2.2.6
CYCLIN
B3
WIRD
WIE
CYCLIN
B
FUER
DIE
MITOSE
NICHT
BENOETIGT,
IST
ABER
ESSENTIELL
FUER
WEIBLICHE
FERTILITAET
46
2.3
CYCLIN
A,
B
UND
B3
KOOPERIEREN
BEI
DER
REGULATION
DER
MITOSE
46
2.3.1
DER
PHAENOTYP
VON
CYCLIN
B
/
CYCLIN
B3-DOPPELMUTANTEN:
CYCLIN
B
UND
CYCLIN
B3
HABEN
MITOTISCHE
FUNKTIONEN
47
2.3.2
DER
PHAENOTYP
VON
CYCLIN
A
/CYCLIN
B3-DOPPELMUTANTEN:
AUCH
CYCHN
A
UND
CYCLIN
B3
KOOPERIEREN
WAEHREND
DER
MITOSE
50
2.3.3
IN
CYCHN-TRIPELMUTANTEN
ERFOLGT
KEIN
EINTRITT
IN
DIE
MITOSE
MEHR
52
2.3.4
EMBRYONALE
ENDOREDUPLIKATION
FINDET
IN
CYCLIN-TRIPELMUTANTEN
NOCH
STATT
52
2.4
CYCHN
B3
IST
ESSENTIELL
FUER
DIE
WEIBLICHE
MEIOSE
54
2.4.1
DIE
OOCYTEN
HOMOZYGOT
CYCLIN
B3-MUTANTER
FLIEGEN
ZEIGEN
EINEN
PERMANENTEN
ZELLZYKLUS-BLOCK
IN
DER
MEIOSE
54
2.4.2
DIE
ESSENTIELLE
FUNKTION
VON
CYCLIN
B3
FUER
DIE
WEIBLICHE
MEIOSE
GEHT
NICHT
AUF
FEHLENDE
EXPRESSION
VON
CYCLIN
B
ZURUECK
56
2.4.3
IN
GRANZONE
UND
CORTER-MUTANTEN
WIRD
CYCLIN
B3
UNVERAENDERT
EXPRIMIERT
58
2.4.4
DER
MEIOTISCHE
ARREST
IN
CYCLIN
B5-MUTANTEN
IST
NICHT
DURCH
EIN
GENERELLES
AUSBLEIBEN
DER
MIT
DER
EI-AKTIVIERUNG
VERBUNDENEN
TRANSLATIONSAKTIVIERUNG
VERURSACHT
59
2.5
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
FUNKTION
VON
CYCLIN
D
UND
CDK4/6
59
2.5.1
DER
N-TERMINUS
VON
DROSOPHILA-CYCVM
D
IST
LAENGER
ALS
BISHER
ANGENOMMEN
UND
ENTHAELT
EIN
KONSERVIERTES
RB-BINDUNGSMOTIV
59
2.5.2
DIE
EXPRESSION
VON
CYCLIN
D
IM
DROSOPHILA-EMBRYO
KORRELIERT
NICHT
MIT
PROLIFERATION
ODER
S-PHASE
62
2.5.3
EKTOPISCHE
EXPRESSION
VON
CYCLIN
D
UND
CDK4/6
IN
EINER
GL-PHASE
FUHRT
NICHT
ZUR
INDUKTION
VON
EKTOPISCHEN
S-PHASEN
ODER
PROLIFERATION
63
2.5.4
CDK4/6
IST
KEIN
ESSENTIELLES
GEN
65
DIE
IDENTIFIZIERUNG
VON
CYCLIN
D-DEFIZIENZEN
66
DIE
ISOLIERUNG
VON
CTFT4/6-MUTANTEN
66
C FT4/6-NULLMUTANTEN
SIND
LEBENSFAEHIG
67
CJ4/6-MUTANTEN
ZEIGEN
MIT
HOHER
PENETRANZ
EINEN
MATEMALEN
PHAENOTYP
68
3.
DISKUSSION
71
DIE
MITOTISCHEN
CYCLINE
A,
B
UND
B3:
FUNKTIONELLE
AUFSPALTUNG
VERSUS
FUNKTIONELLE
REDUNDANZ
71
3.1
CYCLIN
B
IST
FUER
DIE
MITOSE
NICHT
ESSENTIELL
71
3.2
CYCLIN
B3
IST
MITGLIED
EINER
NEUEN,
EVOLUTIONAER
KONSERVIERTEN
B-TYP-CYCLIN-FAMILIE
72
3.3
CYCLIN
B3
HAT
MITOTISCHE
FUNKTIONEN
74
3.4
AUCH
CYCLIN
A
UND
CYCLIN
B3
ERFUELLEN
PARTIELL
UEBERLAPPENDE
FUNKTIONEN
76
3.5
WARUM
WERDEN
REDUNDANTE
CYCLIN-GENE
EVOLUTIONAER
KONSERVIERT?
77
3.6
DIE
BEDEUTUNG
DER
CYCLIN-DEGRADATION
FUER
DIE
REGULATION
DES
AUSTRITTS
AUS
DER
MITOSE
79
3.7
DER
PHAENOTYP
DER
CYC/M-TRIPEL-MUTANTE
IMITIERT
DEN
PHAENOTYP
DER
CYCLIN
A
/AE-DOPPEL-MUTANTE
80
3.8
DIE
MITOTISCHEN
CYCLINE
UND
DIE
REGULATION
DER
S-PHASE
81
3
9
DIE
BEDEUTUNG
VON
CYCLIN
B3
FUER
DIE
WEIBLICHE
MEIOSE
84
3.10
HYPOTHESEN
ZUM
ZUSAMMENSPIEL
DER
DREI
MITOTISCHEN
CYCLINE
85
ZUR
FUNKTION
VON
CYCLIN
D
UND
CDK4/6
IN
DROSOPHILA
88
3
11
CDK4/6
IST
KEIN
ESSENTIELLES
GEN
88
3.12
ZUM
PHAENOTYP
VON
CDW/6-MUTANTEN
90
3.13
WAS
IST
DIE
FUNKTION
VON
CYCLIN
D
UND
CDK4/6
IN
DROSOPHILA?
92
4.
MATERIAL
UND
METHODEN
97
4.1
DROSOPHILA-STAEMME
97
4.2
FLIEGENZUCHT
UND
GRUNDLEGENDE
GENETISCHE
METHODEN
103
4.3
KLONIERUNG
MUTANTER
ALLELE
103
4.4
PRAEPARATION
GENOMISCHER
FLIEGEN-DNA
103
4.5
PLASMID
RESCUE
104
4.6
NORTHERN
BLOTTING
104
4.7
ISOLIERUNG
VON
CYCLIN
D-CDNAS
105
4.8
SEQUENZIERUNG
108
4.9
IDENTIFIZIERUNG
VON
CYCLIN
D-DEFIZIENZEN
108
4.10
ZUR
KONSTRUKTION
EINZELNER
TRANSGENE
109
4.11
KARTIERUNG
VON
GENOMISCHEN
REGIONEN
110
STRUKTUR
DES
CYCLIN
R-GENS
110
STRUKTUR
DES
CYCLIN
2?5-GENS
110
STRUKTUR
DES
CDK4/6-GENS
110
4.12
EMBRYONEN-EXTRAKTE
FUER
WESTERN
BLOTS
111
4.13
HERSTELLUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
VON
ANTI-CYCLIN
B-ANTIKOERPEM
111
4.14
PROTEIN-GELE
UND
WESTERN
BLOTS
112
4.15
IMMUNPRAEZIPITATIONEN
112
4.16
HL-KINASE
ASSAYS
113
4.17
KOLLEKTION
UND
FIXIERUNG
VON
EMBRYONEN
113
4.18
IMMUNFLUORESZENZ-EXPERIMENTE
113
4.19
BRDU-PULSMARKIERUNG
VON
S-PHASEN
IN
DROSOPHILA-EMBRYONEN
114
4.20
IN
SITU
HYBRIDISIERUNGEN
AN
FLIEGENEMBRYONEN
115
4.21
DURCHFUEHRUNG
DER
EMS-MUTAGENESE
ZUR
ISOLIERUNG
VON
LETAL-MUTATIONEN
UEBER
DER
DEFIZIENZ
DF(2R)59AB
115
4.22
ERZEUGUNG
UNPRAEZISER
P-ELEMENT-EXZISIONEN
116
ISOLIERUNG
VON
CYCLIN
SS-MUTANTEN
116
ISOLIERUNG
VON
CYCLIN
B3-MUTANTEN
117
ISOLIERUNG
VON
CDW/6-MUTANTEN
118
4.23
ERZEUGUNG
TRANSGENER
FLIEGENSTAEMME
119
4.24
HITZESCHOCK-INDUZIERTE
GENEXPRESSION
119
4.25
PRAEPARATION
VON
OVARIEN
UND
ISOLIERUNG
VON
OOCYTEN
120
4
26
HERSTELLUNG
VON
PROTEIN-EXTRAKTEN
AUS
VERSCHIEDENEN
MITOSE-STADIEN
120
4.27
HERSTELLUNG
VON
PROTEIN-EXTRAKTEN
AUS
VERSCHIEDENEN
STADIEN
DER
OOCYTEN-ENTWICKLUNG
121
LITERATUR
123 |
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