Reverse Transkriptase-Polymerasekettenreaktion und immunzytochemischer Nachweis minimal residualer Tumorzellen: eine vergleichende Untersuchung
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1999
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INHALTSVERZEICHNIS
V
ERZEICHNIS
DER
A
BKUERZUNGEN
04
I
.
E
INLEITUNG
06
1.1
MINIMAL
RESIDUALE
TUMORERKRANKUNG
-
IMMUNZYTOCHEMISCHE
UND
MOLEKULARE
NACHWEISVERFAHREN
06
1.2
ZIEL
DER
ARBEIT
13
1.3
ZUR
AUSWAHL
DER
HIER
UNTERSUCHTEN
MARKERGENE
14
1.3.1
HISTOGENETISCHE
DIFFERENZIERUNGSMARKER
14
1.3.2
TUMORASSOZIIERTE
MOLEKUELE
17
1.3.3
T
UMORABSTOSSUNGSANTIGENE
DER
MAGE-GEN-FAMILIE
18
2.
M
ATERIAL
UND
M
ETHODEN
21
2.1
MATERIAL
21
2.1.1
GERAETE
21
2.1.2
ENZYME
21
2.1.3
OLIGONUKLEOTIDE
21
2.1.4
REAGENTIEN
UND
HILFSMITTEL
23
2.1.5
PUFFERLOESUNGEN
UND
KULTURMEDIEN
25
2.1.6
ANTIKOERPER
UND
FAERBEREAGENTIEN
FUER
DIE
IMMUNZYTOCHEMIE
27
2.2
PROBEN
UND
PATIENTENKOLLEKTIVE
28
2.2.1
HERKUNFT
UND
GEWINNUNG
DES
KNOCHENMARKES
UND
BLUTES
28
2.2.2
PATIENTEN
MIT
PROSTATAKARZINOM
29
2.2.3
PATIENTEN
MIT
BRONCHIALKARZINOM
30
2.2.4
PATIENTEN
MIT
KOLOREKTALEM
KARZINOM
31
2.2.5
PATIENTEN
MIT
MAMMAKARZINOM
32
2.2.6
PATIENTEN
MIT
SARKOM
33
2.2.7
PATIENTEN
MIT
MALIGNEM
MELANOM
33
2.2.8
PATIENTEN
OHNE
MALIGNE
NEOPLASIE
(KONTROLLPATIENTEN)
33
INHALTSVERZEICHNIS
2
2.3
METHODEN
34
2.3.1
ZELLKULTUR
34
2.3.2
ISOLIERUNG
EINZELNER
ZELLEN
AUS
TUMORZELLINIEN
34
2.3.3
GEWINNUNG
MONONUKLEAERER
ZELLEN
35
2.3.4
ISOLIERUNG
VON
RNA
AUS
MONONUKLEAEREN
ZELLEN
35
2.3.5
ISOLIERUNG
UND
PRAEZIPITATION
VON
RNA
AUS
NATIVEM
BLUT
UND
KNOCHENMARK
36
2.3.6
ISOLIERUNG
VON
RNA
AUS
PRIMAERTUMOREN
37
2.3.7
REVERSE
TRANSKRIPTION
37
2.3.8
PCR-PROTOKOLL
37
2.3.9
WAHL
DER
PRIMER
39
2.3.9.1
ALLGEMEINE
REGELN
39
2.3
9.2
PRIMER
DER
CK
18-PCR
40
2.3.9.3
PRIMER
DER
MAGE-PCR
42
2.3.10
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
DER
OLIGONUKLEOTIDE
43
2.3.11
KONTAMINATIONEN
DER PCR
43
2.3.11.1
MOEGLICHE
URSACHEN
43
2.3.11.2
PRAEVENTION
UND
DEKONTAMINATION
44
2.3.12
KONTROLLE
DER
SPEZIFITAET
DER
PCR-PRODUKTE
44
2.3.13
KONTROLLEN
DER
AMPLIFIKATIONSBEDINGUNGEN
DER
RT-PCR
45
2.3.14
IMMUNZYTOCHEMIE
45
3
E
RGEBNISSE
47
3.1
EINFLUSS
ANALYTISCHER
FAKTOREN
AUF
DIE
NACHWEISQUALITAET
47
3.1.1
DEFINITION
DER
BEGRIFFE
SPEZIFITAET
UND
SENSITIVITAET
47
3.1.2
RNA-LSOLIERUNG
47
3.1.3
RT-PCR
AM
BEISPIEL
DER
PSA-PCR
48
3.2
SPEZIFITAET
DER
PCR-MARKER
51
3.2.1
HISTOGENETISCHE
DIFFERENZIERUNGS
UND
TUMORASSOZIIERTE
MARKER
51
3.2.2
TUMORABSTOSSUNGSANTIGENE
DER
MAGE-GEN-FAMILIE
53
3.3
SENSITIVITAET
DER
PCR-MARKER
55
3.3.1
EXPRESSION
DER
MAGE-GENE
AUF
ZELLINIEN
UND
PRIMAERTUMOREN
55
3.3.2
TUMORZELLVERDUENNUNGEN
IN
VITRO
58
INHALTSVERZEICHNIS
3
3.3.3
KNOCHENMARK
VON
KARZINOMPATIENTEN
-
ERGEBNIS
DER
RT-PCR
UND
KORRELATION
ZUR
IMMUNZYTOCHEMIE
59
3.3.3.1
PSA-RT-PCR
59
3.3.3.2
PIP-RT-PCR
62
3.3.3.3
1SA-RT-PCR
64
3.3.3.4
MAGE-RT-PCR
66
3.3.3.4.1
PROSTATAKARZINOM
66
3.3.3.4.2
BRONCHIALKARZINOM
72
3.3.3.4.3
MAMMAKARZINOM
74
3.3.3.4.4
SARKOM
75
3.3.3.4.5
MALIGNES
MELANOM
75
4
D
ISKUSSION
76
4.1
DER
EINSATZ
HISTOGENETISCHER
DIFFERENZIERUNGSMARKER
UND
TUMORASSOZIIERTER
MOLEKUELE
ALS
MARKER
FUER EINE
RT-PCR
ZUM
NACHWEIS
MINIMAL
RESIDUALER
TUMORLAST
UND
MOEGLICHE
LIMITIERUNG
(GRENZEN)
77
4.2
CANCER-TESTIS-ANTIGENE
-
EINE
NEUE
MARKERGENERATION
85
5
Z
USAMMENFASSUNG
95
6
PCR-ABBILDUNGEN
97
7
L
ITERATURVERZEICHNIS
NS
D
ANKSAGUNGEN
L
EBENSLAUF |
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