Verbreitung und Aktivität des Transposons Restless in biotechnologisch relevanten Hyphenpilzen:
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| Format: | Thesis Book |
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Berlin [u.a.]
Cramer
1999
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| Series: | Bibliotheca mycologica
182 |
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INHALTSVERZEICHNIS
I.
EINFUEHRUNG
1
1.
EINLEITUNG
1
2.
TRANSPOSONEN
IN
HYPHENPILZEN
3
2.1
KLASSE
1
-ELEMENTE
4
2.2
KLASSE
2-ELEMENTE
5
2.2.1
ZCF/MARINER-ELEMENTE
5
2.2.2
FOTL/POGO-ELEMENTE
6
2.2.3
/Z^T-ELEMENTE
7
2.2.4
MITE-ELEMENTE
8
3.
EINFLUSS
VON
TRANSPOSONEN
AUF
DIE
STRUKTUR
UND
VARIABILITAET
VON
HYPHEN
PILZGENOMEN
8
3.1
SEQUENZVERAENDERUNGEN
NACH
EXZISIONEN
VON
DNA-TRANSPOSONEN
9
3.2
INSERTION
VON
TRANSPOSONEN
IN
TELOMER
UND
CENTROMERREGIONEN
11
4.
YYRIP
"
UND
YYMIP
"
:
MECHANISMEN
ZUR
INAKTIVIERUNG
VON
TRANSPOSONEN?
12
5.
ANWENDUNG
VON
TRANSPOSONEN
ALS
SPEZIFISCHE
MARKERSEQUENZEN
15
6.
ZUSAMMENFASSUNG
UND
AUSBLICK
16
II.
PROBLEMSTELLUNG
19
III.
MATERIAL
UND
METHODEN
23
1.
MATERIAL
23
1.1
STAEMME
23
1.2
PLASMIDE
24
1.3
OLIGONUKLEOTIDE
24
1.4
CHEMIKALIEN
25
1.5
ENZYME
25
1.6
NAEHRMEDIEN
26
1.7
HAEUFIG
VERWENDETE
PUFFER
26
2.
METHODEN
27
2.1
KULTURBEDINGUNGEN
27
2.2
ISOLIERUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
27
2.3
DNA-TRANSFORMATIONEN
28
2.4
SELEKTION
PUTATIVER
EXZISONSEREIGNISSE
IN
T.
FN/ZATUM-TRANSFORMANTEN
29
2.5
GELELEKTROPHORESE
29
2.6
SOUTHEM-BLOTS
UND
DNA/DNA-HYBRIDISIERUNGEN
29
2.7
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA
30
2.8
DNA-SEQUENZIERUNG
30
2.9
OLIGONUKLEOTID-SYNTHESE
30
2.10
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(PCR)
30
2.10.1
STANDARD-PCR-REAKTIONEN
30
2.10.2
RANDOM
AMPLIFIED
POLYMORPHIE
DNA
(RAPD)-PCR
31
REAKTIONEN
2.10.3
INVERSE
PCR-REAKTIONEN
31
2.10.4
ASYMMETRISCHE
PCR-REAKTIONEN
31
2.11
AUSWERTUNG
VON
NUKLEOTID
UND
AMINOSAEURESEQUENZEN
32
2.12
SICHERHEITSBESTIMMUNGEN
32
IV.
ERGEBNISSE
33
1.
MOLEKULARE
CHARAKTERISIERUNG
DER
UNTERSUCHTEN
STAEMME
33
1.1
RAPD-ANALYSEN
ZUR
UNTERSCHEIDUNG
MORPHOLOGISCH
33
EINHEITLICHER
STAEMME
1.2
SEQUENZVERGLEICHE
ZUR
PHYLOGENETISCHEN
ANALYSE
DER
36
VERSCHIEDENEN
STAEMME
1.2.1
SEQUENZANALYSE
DES
A-TUBULIN-GENS
36
1.2.2
SEQUENZANALYSE
DER
ITS
(INTERNAL
IRANSCRIBED
SPACER)
39
BEREICHE
DER
RDNA
2.
VERBREITUNG
DES
REST/ESS-TRANSPOSONS
44
2.1
SOUTHERN-HYBRIDISIERUNGEN
MIT
RESRZESS-SPEZIFISCHEN
SONDEN
44
2.2
ANALYSE
DER
UNVOLLSTAENDIGEN
KOPIE
RESTLESS-DL
IM
STAMM
B.
NIVEA
ATCC
42437
50
2.3
ANALYSE
DER
DAS
RESTLESS-DL
-ELEMENT
FLANKIERENDEN
DNA-SEQUENZEN
55
3.
VERSUCHE
ZUR
ETABLIERUNG
EINES
YYTRANSPOSON
TAGGING
"
-SYSTEMS
MIT
DEM
RES/ZEXS-ELEMENT
60
3.1
HERSTELLUNG
TRANSGENER
PILZSTAEMME
ZUR
ANALYSE
DER
AKTIVITAET
DER
REST/ESS-KOPIE
IN
DEM
VEKTOR
PFW128
60
3.2
PHAENOTYPISCHE
DETEKTION
PUTATIVER
EXZISIONSEREIGNISSE
DURCH
SELEKTION
AUF
PHLEOMYCINRESISTENZ
BEI
AUSGEWAEHLTEN
T.
INFLATUM-
TRANSFORMANTEN
63
3.3
MOLEKULARE
ANALYSE
PHLEOMYCIN-RESISTENTER
SPORENISOLATE
67
3.3.1
NACHWEIS
VERAENDERTER
HYBRIDISIERUNGSMUSTER
NACH
PUTATIVEN
EXZISIONSEREIGNISSEN
67
3.3.2
NACHWEIS
VON
EXZISIONSEREIGNISSEN
DURCH
PCR
UND
SEQUENZANALYSE
DER
EXZISIONSORTE
70
V.
DISKUSSION
73
1.
DIE
UNTERSUCHTEN
PILZSTAEMME
DER
GATTUNGEN
TOLYPOCLADIUM
UND
BEAUVERIA
STELLEN
EINE
SEHR
ENG
VERWANDTE
GRUPPE
DAR
73
1.1
DIE
RAPD-PCR
ERMOEGLICHT
EINE
UNTERSCHEIDUNG
DER
BEI
SEQUENZANALYSEN
NAHEZU
IDENTISCHEN
T.
INFLATUM-GRUPPE
74
1.2
ANHAND
VON
INTRONSEQUENZEN
AUS
DEM
A-TUBULIN-GEN
KANN
DIE
T.
INFLATUM-GRUPPE
VON
ANDEREN
TOLYPOCLADIUM-/SXTEN
ABGEGRENZT
WERDEN
75
1.3
DIE
SEQUENZANALYSEN
DER
ITS-BEREICHE
DER
RDNA
BESTAETIGEN
DIE
TAXONOMISCHE
EINORDNUNG
DER
T.
INFLATUM-GRUPPE
IN
DIE
GATTUNG
TOLYPOCLADIUM
78
1.4
DAS
REST/ESS-TRANSPOSON
WEIST
INNERHALB
DER
T.
INFLATUM-
GRUPPE
EINE
DISKONTINUIERLICHE
VERBREITUNG
AUF
81
2.
ZWEI
PILZSTAEMME
BESITZEN
AEESZZESS-KOPIEN
MIT
DELETIONEN
DES
5
'-BEREICHS
84
2.1
DAS
5
'-DELETIERTE
ELEMENT
RESTLESS-DL
WEIST
EINE
HOHE
SEQUENZDIVERGENZ
IM
VERGLEICH
ZU
INTAKTEN
RESTLESS-KOPIEN
AUF
86
2.2
DIE
FLANKIERENDEN
SEQUENZEN
AM
INSERTIONSORT
DES
RESTLESS-DL
TRANSPOSONS
WEISEN
CHARAKTERISTISCHE
KENNZEICHEN
PILZLICHER
HAT
ELEMENTE
AUF
89
2.3
DER
INSERTIONSORT
DES
ELEMENTS
RESTLESS-DL
ENTSPRICHT
EINER
KOMPLEXEN
ANORDNUNG
INEINANDER-INSERIERTER
EIT-ELEMENTE
91
3.
DIE
KLONIERT
VORLIEGENDE
RESZZESS-KOPIE
WEIST
IN
T.
INFLATUM-STAEMMEN
TRANSPOSITIONSAKTIVITAET
AUF
94
3.1
DER
VEKTOR
PFW128
ERMOEGLICHT
DIE
PHAENOTYPISCHE
DETEKTION
VON
EXZISIONSEREIGNISSEN
DES
Z?E.S7ZESS-TRANSPOSONS
94
3.2
PUTATIVE
REINSERTIONEN
DER
EXZISIERTEN
RESTLESS-KOPIEN
KONNTEN
IM
STAMM
TI2
DETEKTIERT
WERDEN
97
3.3
DIE
EXZISIONSRATEN
IN
DEN
REZIPIENTENSTAEMMEN
TIL,
TI2
UND
TI3
ZEIGEN
VERMUTLICH
KEINE
SIGNIFIKANTEN
UNTERSCHIEDE
98
3.4
EXZISIONEN
DER
KLONIERTEN
RESTLESS-KOPIE
SIND
RELATIV
SELTEN
99
3.5
DIE
EXZISION
DES
AEE.SZZEM-TRANSPOSONS
AUS
DER
PLASMIDSEQUENZ
DES
VEKTORS
PFW128
ERZEUGT
ZWEI
VERSCHIEDENE
YYFOOTPRINT
"
-
SEQUENZMUSTER
100
VI.
ZUSAMMENFASSUNG
106
VII.
LITERATUR
109
VIII.
ANHANG
124 |
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