Immuncytochemische Untersuchung des Verteilungsmusters spannungsabhängiger K+-Kanäle im ZNS der Ratte:
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1998
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGEN
1
1.
EINLEITUNG
1
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
7
2.1
HERKUNFT
DER
VERWENDETEN
CHEMIKALIEN
UND
MATERIALIEN
7
12.
LOESUNGEN
UND
MEDIEN
10
23
METHODEN
DER
DNA-KLONIERUNG
13
2.3.1
PRAEPARATION
VON
KLONIERUNGSVEKTOREN
13
2.3.2
AUFFUELLREAKTION
YYKLEBRIGER
"
ENDEN
13
2.3.3
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
13
2.3.4
ISOLIERUNG
DER
ELEKTROPHORETISCH
AUFGETRENNTEN
DNA-FRAGMENTE
14
2.3.5
LIGATION
14
2.3.6
TRANSFORMATION
15
2.3.7
SEQUENZIERUNG
DOPPELSTRAENGIGER
DNA
15
2.3.8
POLYMERASE-KETTEN-REAKTION
(PCR)
16
2.3.9
ISOLIERUNG
VON
DNA
17
2.3.9.1
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
AUS
2
ML
BAKTERIENKULTUREN
17
2.3.9.2
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
AUS
50
ML
BAKTERIENKULTUREN
18
2.4
METHODEN
DER
PROTEINCHEMIE
20
2.4.1
INDUKTION
DER
EXPRESSION
VON
FUSIONSPROTEINEN
IN
E.
COLI
2.4.2
ERMITTLUNG
DES
LOESLICHVERHALTENS
VON
HIS-FUSIONSPROTEINEN
2.4.3
AUFSCHLUSS
VON
HIS-FUSIONSPROTEINEN
21
2.4.4
ISOLIERUNG
UND
REINIGUNG
VON
HIS-FUSIONSPROTEINEN
UEBER
EINE
NICKELSAEULE
22
2.4.5
AUFSCHLUSS
UND
ISOLIERUNG
VON
GST-FUSIONSPROTEINEN
(PRAEPARATIVE
SDS-PAGE
UND
ELEKTROELUTION)
23
2.4.6
ANALYTISCHE
SDS-PAGE
24
2.4.6.1
ANALYTISCHE
TRICIN
SDS-PAGE
25
2.4.7
BESTIMMUNG
DER
PROTEINKONZENTRATION
UEBER
DEN
BCA-TEST
25
2.5
IMMUNOLOGISCHE
METHODEN
26
2.5.1
GEWINNUNG
POLYKLONALER
ANTISEREN
26
2.5.2
ELISA
26
2.5.2.1
KOMPETETIVER
ELISA
27
2.5.3.1
ELIMINATION
KREUZREAGIERENDER
ANTIKOERPER
27
2.5.3.2
AFFINITAETSREINIGUNG
28
2.5.4
WESTEMANALYSEN
28
2.5.4.1
UEBERTRAGUNG
VON
ELEKTROPHORETISCH
AUFGETRENNTEN
PROTEINEN
AUF
EINE
NITROCELLULOSEMEMBRAN
28
2.5.4.2
ANTIKOERPERINKUBATIONEN
PGAR
UND
APGAR
29
2.5.4.3
FAERBEREAKTION
VON
PGAR
MIT
DIAMINOBENZIDIN
30
2.5.4.4
FAERBEREAKTION
VON
PGAR
MIT
DEM
ECL
WESTERN
BLOTTING
SYSTEM
30
2.5.4.5
FAERBEREAKTION
VON
APGAR
MIT
NBT
UND
BCIP
31
2.5.5
ISOLIERUNG
VON
PROTEINEN
AUS
GEHIMMEMBRANEN
31
2.5.6
VORBEREITUNGEN
ZUR
IMMUNCYTOCHEMIE
32
2.5.7
IMMUNCYTOCHEMIE
32
3.
ERGEBNISSE
34
3.1
VERVOLLSTAENDIGUNG
DER
ANTISEREN
FUER
DIE
KV3
(RAW)-FAMILIE
34
3.1.1
ALTERNATIV
GESPLEISSTE
VARIANTEN
BEI
KV3.2
34
3.1.2
KONSTRUKTION
DER
EXPRESSIONSPLASMIDE
C-RL-PET
UND
C
T
2
P
ET
36
3.1.3
KONSTRUKTION
DER
EXPRESSIONSPLASMIDE
NYL-PET
UND
N-RL-PGEX
37
3.1.4
INDUKTION
UND
AUFSCHLUSS
VON
N
T
L-HIS-FUSIONSPROTEIN
38
3.1.5
INDUKTION
UND
AUFSCHLUSS
VON
N
T
1-GST-FUSIONSPROTEIN
40
3.1.6
IMMUNISIERUNG
UND
GEWINNUNG
VON
ANTIKOERPERN
41
3.1.7
CHARAKTERISIERUNG
DER
ANTISEREN
41
3.1.8
REINIGUNG
DER
ANTI-KV3.2-NI-ROHSEREN
44
3.1.9
IMMUNOLOGISCHER
NACHWEIS
VON
KV3.1,
KV3.2
UND
KV3.4
IM
ZNS
DER
RATTE
MITTELS
WESTEM-BLOT-ANALYSEN
46
3.2
IMMUNCYTOCHEMISCHE
DARSTELLUNG
DER
KV3
FAMILIE
IM
ZNS
DER
RATTE
49
33
VORKOMMEN
IM
TELENCEPHALON
52
3.3.1
DER
BULBUS
OLFACTORIUS
52
3.3.2
DER
NEOCORTEX
55
3.3.3
DIE
HIPPOCAMPUSFORMATION
57
3.3.4
DAS
SEPTUM
63
3.3.5
DIE
BASALGANGLIEN
64
3.4
VORKOMMEN
IM
DIENCEPHALON
67
3.4.1
DER
EPITHALAMUS
67
3.4.2
DER
THALAMUS
DORSALIS
68
3.4.3
DER
HYPOTHALAMUS
UND
DAS
CORPUS
MAMMILLARE
73
33
VORKOMMEN
IM
MESENCEPHALON
74
3.5.1
DIE
LAMINA
TECTI
74
3.5.2
DER
NUCLEUS
RUBER
77
3.5.3
DIE
SUBSTANTIA
NIGRA
79
3.6
VORKOMMEN
IM
RHOMBENCEPHALON
81
3.6.1
DAS
CEREBELLUM
81
3.6.2
DIE
MEDULIA
OBLONGATA
UND
PONS
84
3.7
VORKOMMEN
IM
RUECKENMARK
86
3.8
TABELLARISCHE
UEBERSICHT
UEBER
DAS
VERTEILUNGSMUSTER
VON
KV3.1,
KV3.2
UND
KV3.4
IM
ZNS
DER
RATTE
89
4.
DISKUSSION
92
5.
ZUSAMMENFASSUNG
104
6.
LITERATURVERZEICHNIS
105
7.
ANHANG
117
LEBENSLAUF
118 |
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