Charakterisierung und Expressionsanalyse des TWISTED DWARF-Gens aus Arabidopsis thaliana:
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1998
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
1
2
MATERIAL
UND
METHODEN
14
2.1
MEDIEN
UND
LOESUNGEN
14
2.1.1
PFLANZENMEDIEN
UND
LOESUNGEN
14
2.1.2
BAKTERIENMEDIEN
15
2.2
BEZUGSQUELLEN
FUER
VERWENDETE
CHEMIKALIEN,
ENZYME,
RADIOISOTOPE
UND
MATERIALIEN
16
2.3
BIOLOGISCHES
MATERIAL
18
2.4
PLASMIDE
UND
COSMIDE
18
2.5
OLIGONUKLEOTIDE
19
2.5.1
TTKD-SPEZIFISCHE
OLIGONUKLEOTIDE
19
2.5.2
ACTIN2-SPEZISSSCHE
OLIGONUKLEOTIDE
19
2.5.3
7-SPEZIFISCHE
OLIGONUKLEOTIDE:
19
2.5.4
GLS-SPEZIFISCHES
OLIGONUKLEOTID
20
2.5.5
GFP-SPEZIFISCHE
OLIGONUKLEOTIDE
20
2.5.6
CAMV
JJS
'
-SPEZIFISCHES
OLIGONUKLEOTID
20
2.6
PFLANZENMATERIAL
20
2.7
MIKROBIOLOGISCHE
METHODEN
20
2.7.1
HERSTELLUNG
KOMPETENTER
.CO/I-ZELLEN
20
2.7.2
TRANSFORMATION
KOMPETENTER
.CO/I-ZELLEN
21
2.7.3
HERSTELLUNG
KOMPETENTER
AGROBAKTERIEN-ZELLEN
21
2.7.4
TRANSFORMATION
VON
AGROBAKTERIEN
21
2.8
ALLGEMEINE
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
21
2.8.1
PRAEPARATION
VON
PLASMID
UND
COSMID-DNA
22
2.8.2
PRAEPARATION
VON
DNA
AUS
AGROBAKTERIUM
TUMEFACIENS
22
INHALTSVERZEICHNIS
2.8.3
PRAEPARATION
GENOMISCHER
DNA
AUS
ARABIDOPSIS
23
2.8.4
SOUTHEMBLOT-EXPERIMENTE
MIT
GENOMISCHER
DNA
AUS
ARABIDOPSIS
23
2.8.5
HYBRIDISIERUNG
VON
MEMBRAN-GEBUNDENER
DNA
24
2.8.6
MARKIERUNG
VON
DNA-SONDEN
DURCH
DEN
EINBAU
RADIOAKTIVER
NUKLEOTIDE
24
2.8.7
PRAEPARATION
VON
GESAMT-RNA
AUS
ARABIDOPSIS
24
2.8.8
5'-RAPID
AMPLIFIKATION
OF
CDNA
ENDS
(5'RACE)
24
2.8.9
RT-PCR
24
2.8.9.1
DIE
REVERSE
TRANSKRIPTION
VON
POLYA
+
-RNA
25
2.8.9.2
AMPLIFIKATION
DER
EINZELSTRAENGIGEN
CDNAS
MIT
GENSPEZIFISCHEN
PRIMERN
26
2.8.10
AUFREINIGUNG
VON
PCR-PRODUKTEN
UND
DNA-FRAGMENTEN
AUS
DEM
AGAROSEGEL
28
2.8.11
PROTEINEXTRAKTION
AUS
PFLANZENMATERIAL
28
2.8.12
DENATURIERENDE
POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
29
2.8.13
PROTEINTRANSFER
AUF
EINE
NITROZELLULOSEMEMBRAN
(NC)
MITTELS
HALBTROCKENEM
ELEKTROBLOTVERFAEHREN
30
2.8.14
PONCEAU-S
FAERBUNG
IMMOBILISIERTER
PROTEINE
30
2.8.15
IMMUNOLOGISCHER
NACHWEIS
VON
MEMBRANGEBUNDENEN
PROTEINEN
31
2.8.16
STERILISATION
VON
ARABIDOPSIS-SAMEN
32
2.8.17
EXPERIMENTE
ZUM
WURZELGRAVITROPISMUS
UND
DER
WIRKUNG
ERHOEHTER
ETHYLENKONZENTRATION
32
2.8.18
ANZUCHT
VON
ARABIDOPSIS-KEIMLINGEN
AUF
VERSCHIEDENEN
PHYTOHORMONEN,
DEREN
INHIBITOREN
ODER
UNTER
HITZESCHOCK
IN
STERILKULTUREN
34
2.8.19
TRANSFORMATION
VON
ARABIDOPSIS-WILDTYP-PFLANZEN
UND
AWF-MUTANTEN
MITTELS
VAKUUMINFILTRATION
VON
AGROBAKTERIEN
34
2.8.19.1
ANZUCHT
DER
PFLANZEN
FUER
DIE
INFILTRATION
34
2.8.19.2
ANZUCHT
DER
AGROBAKTERIEN
FUER
DIE
INFILTRATION
35
2.8.19.3
VAKUUMINFILTRATION
DER
INFORESZENZEN
MIT
DER
AGROBAKTERIEN-SUSPENSION
35
2.8.19.4
ERNTE
DER
SAMEN
DER
GENERATION
T
O
UND
SELEKTION
DER
TRANSGENEN
PFLANZEN
IN
DER
GENERATION
TI
35
2.8.19.5
NACHWEIS
DER
SS-GLUKURONIDASE
(GUS)
-EXPRESSION
36
2.8.20
DETEKTION
DER
GFP-FLUORESZENZ
IN
TRANSGENEN
PFLANZEN
37
IV
INHALTSVERZEICHNIS
2.8.21
MIKROSKOPISCHE
UNTERSUCHUNG
VON
ARABIDOPSISWURZELN
38
3
ERGEBNISSE
39
3.1
DIE
MORPHOLOGIE
DER
TWISTED
DWARF-MUTANTE
39
3.1.1
DER
TWISTED
DWARFP^CAENOLYP
39
3.1.2
DIE
REDUKTION
DER
GESAMTGROESSE
DER
FWD-MUTANTE
IST
AUF
EINE
VERRINGERTE
ZELLSTRECKUNG
ZURUECKZUFUHREN
42
3.1.3
DIE
MIKROSKOPISCHE
UNTERSUCHUNG
VON
WURZELN
DER
RW-MUTANTE
ZEIGT
EINE
UNGEWOEHNLICHE
ANORDNUNG
DER
ZELLEN
43
3.2
MOLEKULARBIOLOGISCHE
UNTERSUCHUNGEN
DES
TWD
GENS
47
3.2.1
DIE
STRUKTUR
DES
TWD-GENS
UND
DES
ZWD-PROMOTORBEREICHS
47
3.2.2
DIE
UNTERSUCHUNG
VERSCHIEDENER
TWD
ALLELE
49
3.2.3
BESTIMMUNG
DES
5'-ENDES
DER
TTPD-CDNA
MITTELS
RACE
53
3.2.4
DAS
TWD-PROTEIN
ZEIGT
AEHNLICHKEIT
ZU
IMMUNOPHILINEN
56
3.2.5
EXPRESSION
DES
TWD-GENS
IN
FWD-MUTANTEN
UND
WILDTYP-PFLANZEN
60
3.2.6
DIE
EXPRESSION
DES
TWD-GENS
IN
VERSCHIEDENEN
PFLANZENORGANEN
UND
ENTWICKLUNGSSTADIEN
62
3.2.7
DER
EINFLUSS
VON
PHYTOHORMONEN
UND
HITZESCHOCK
AUF
DIE
EXPRESSION
DES
TWD
GENS
63
3.2.8
ANALYSE
DES
7WD-PROMOTORS
ANHAND
VON
REPORTERGENEN
65
3.2.8.1
FUSION
DES
TTFD-PROMOTORS
MIT
DEM
GEN
FUER
DIE
SS-GLUKURONIDASE
AUS
E.COLI
66
3.2.8.1.1
KONSTRUKTE
FUER
DIE
TRANSFORMATION
VON
WILDTYP-PFLANZEN
66
3.2.8.1.2
PCR-ANALYSE
TRANSGENER
GUS-LINIEN
67
3.2.8.1.3
DIE
EXPRESSION
DES
SS-GLUKURONIDASE-GENS
UNTER
KONTROLLE
DES
TWD
PROMOTORS
70
3.2.8.2
FUSION
DES
77FD-PROMOTORS
MIT
DEM
GFP-GEN
73
3.2.8.2.
1
KONSTRUKTE
FUER
DIE
TRANSFORMATION
VON
WILDTYP-PFLANZEN
73
3.2.8.2.2
PCR-ANALYSE
DER
TRANSGENEN
GFP-LINIEN
74
3.2.8.2.3
FLUORESZENZ-DETEKTION
IN
7WD::GFP-LINIEN
MITTELS
FLUORESZENZ
MIKROSKOP
UND
KONFOKALEM
LASERMIKROSKOP
76
V
INHALTSVERZEICHNIS
3.2.9
KOMPLEMENTATION
VON
RW-MUTANTEN
82
3.2.9.1
KONSTRUKTE
ZUR
KOMPLEMENTATION
VON
RW-MUTANTEN
82
3.2.9.2
SOUTHEMBLOT-ANALYSE
DER
KOMPLEMENTIERTEN
PFLANZEN
85
3.2.9.3
PHAENOTYP
DER
KOMPLEMENTIERTEN
TW-PFLANZEN
88
3.2.10
EXPRESSION
DES
TTLD-GENS
IN
ANTISENSE
ORIENTIERUNG
IN
A.
THALIANA
91
3.2.10.1
KONSTRUKTE
ZUR
EXPRESSION
VON
ANTISENSE-RNA
IN
TRANSGENEN
PFLANZEN
91
3.2.10.2
SOUTHEMBLOT-ANALYSE
DER
ANTISENSE
LINIEN
92
3.2.10.3
PHAENOTYP
DER
LINIEN,
DIE
DAS
ANTISENSE-KONSTRUKT
TRAGEN
92
3.2.11
UEBEREXPRESSION
EINES
MIT
DEM
HA
1
-EPITOP
MARKIERTEN
TWD-PROTEINS
IN
ARABIDOPSIS
WILDTYP-PFLANZEN
93
3.2.11.1
KONSTRUKT
ZUR
EPITOP-MARKIERUNG
DES
TWD-PROTEINS
93
3.2.11.2
SOUTHEMBLOT-ANALYSE
DER
TRANSGENEN
HA
1-TWD-PFLANZEN
94
3.2.11.3
IMMUNDETEKTION
DES
HA
1
-EPITOP-MARKIERTEN
TWD-PROTEINS
IN
EXTRAKTEN
TRANSGENER
LINIEN
95
3.2.11.4
PHAENOTYPISCHE
UNTERSUCHUNG
DER
HA-TWD-PROTEIN
UEBEREXPRIMIERENDEN
LINIEN
99
3.3
PHYSIOLOGIE
DER
WURZEL
VON
TWD-MUTANTEN
100
3.3.1
DER
EINFLUSS
VON
ETHYLEN
AUF
DEN
GRAVITROPISMUS
VON
WURZELN
DER
TW-MUTANTE
100
3.3.2
DIE
SENSITIVITAET
DER
/W-WURZELN
AUF
2,4-D,
ETHYLEN
UND
DESSEN
INHIBITOREN
104
4
DISKUSSION
109
5
ZUSAMMENFASSUNG
131
6
LITERATUR
135
VI |
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| spelling | Saal, Beate 1966- Verfasser (DE-588)121165620 aut Charakterisierung und Expressionsanalyse des TWISTED DWARF-Gens aus Arabidopsis thaliana vorgelegt von Beate Saal 1998 IX, 156, IV S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Köln, Univ., Diss., 1999 Wachstumshemmung (DE-588)4136401-6 gnd rswk-swf Zwergmutante (DE-588)4358017-8 gnd rswk-swf Wurzel (DE-588)4136391-7 gnd rswk-swf Ackerschmalwand (DE-588)4141299-0 gnd rswk-swf Genexpression (DE-588)4020136-3 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Ackerschmalwand (DE-588)4141299-0 s Zwergmutante (DE-588)4358017-8 s Wurzel (DE-588)4136391-7 s Wachstumshemmung (DE-588)4136401-6 s Genexpression (DE-588)4020136-3 s DE-604 DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=008627792&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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