Bestimmung von Aflatoxinen in Pistazien:
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Berlin
BgVV
1998
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| adam_text | Inhaltsverzeichnis
Seite
1. Einleitung und Zielsetzung 9
1.1 Rechtslage 9
1.2 Problem der repräsentativen Probenahme 9
2. Pistazien und Aflatoxinanalytik 10
2.1 Pistazien 10
2.2 Aflatoxine 10
2.3 Aflatoxine in Pistazien 11
2.4 Stand der Analytik 12
2.4.1 Dünnschichtchromatographie (DC) 12
2.4.2 Immunoaffinitätssäule, mit anschließender Hochleistungsflüssigchromatographie
(HPLC), Nachsäulenderivatisierung und Fluoreszenzdetektion 12
2.4.2.1 Immunoaffinitätssäulen 12
2.4.2.2 HPLC mit Nachsäulenderivatisierung und Fluoreszenzdetektion 13
3. Experimenteller Teil 16
3.1 Untersuchung der Homogenisierungseigenschaften eines Fleischkutters
an 10 kg Pistazienproben 16
3.1.1 Analysenmethode zur Bestimmung der Aflatoxine B ,, B2, G^ und G2 in
10 kg Pistazienproben mittels Immunoaffinitätssäule, mit anschließender HPLC
und Nachsäulenderivatisierung 16
3.1.1.1 Prinzip der Methode 16
3.1.1.2 Reagenzien 16
3.1.1.3 Geräte 17
3.1.1.4 HPLC Betriebsbedingungen 18
3.1.1.5 Herstellung der Aflatoxin Standardlösungen 19
3.1.1.5.1 Stammlösungen 19
3.1.1.5.2 Verdünnte Stammlösungen 19
3.1.1.5.3 Arbeitsstandards 20
3.1.1.5.4 Gemischte Standardlösungen 20
3.1.1.6 Durchführung der Aflatoxinbestimmung 20
3.1.1.6.1 Probenahme 20
3.1.1.6.2 Zerkleinerung der Probe 21
3.1.1.6.3 Extraktion 21
3.1.1.6.4 Vortest zur Festlegung der Verdünnung des Rohextraktes 21
3.1.1.6.5 Immunoaffinitätschromatographische Reinigung des Rohextraktes 21
3.1.1.6.6 Identifizierung der Aflatoxine 22
3.1.1.6.7 Bestimmung der Aflatoxine 22
3.1.1.6.8 Kalibriergerade 23
3.1.1.7 Berechnung der Ergebnisse 23
3.1.1.8 Schematischer Ablauf der Aflatoxinbestimmung in Pistazien 24
3.1.1.9 Qualitative Absicherung der Analysenergebnisse 25
3.1.1.9.1 HPLCohne Nachsäulenderivatisierung 25
3.1.1.9.2 Amtliches Untersuchungsverfahren nach §35 LMBG 25
3.1.2 Reproduzierbarkeit der Analysenmethode 26
3.1.3 Nachweisgrenze der Analysenmethode 27
3.1.4 Untersuchungen am Fleischkutter 28
3.1.4.1 Beschreibung des Kutters 28
3.1.4.2 Veränderliche Parameter 28
3.1.4.3 Durchführung der Untersuchungen 29
3.1.4.3.1 Zerkleinerung der Probe 29
3.1.4.3.2 Probenahme 29
3.1.4.3.3 Probeneinwaage zur Bestimmung des Aflatoxin Gehaltes 29
3.1.4.3.4 Berechnung der Ergebnisse 30
3.1.4.4 Darstellung der Zerkleinerungseigenschaften des Fleischkutters 30
3.2 Methodenmodifizierung und weitere Untersuchungen 31
3.2.1 Modifizierung der Analysenmethode 31
3.2.1.1 Extraktionsmischung 31
3.2.1.2 Extraktionszeit 31
3.2.2 Haltbarkeit von Rohextrakten 31
3.2.3 Peak Quenching 31
3.2.4 Wiederfindung 32
j
4. Ergebnisse und Diskussion 33
4.1 Kalibrierung der Analysenmethode 33
4.1.1 Photometrische Vermessung der verdünnten Stammlösungen 33
4.1.2 Konzentrationen der gemischten Standardlösungen 33
4.1.3 Überprüfung der Elutionsreihenfolge 33
4.1.4 Eichgeraden 35
4.1.4.1 Aflatoxin B, 35
4.1.4.2 Aflatoxin B2 36
4.1.4.3 Aflatoxin G, 37
4.1.4.4 Aflatoxin G2 38
4.1.5 Einfluß einer Desaktivierung von Glasgeräten auf die Eichung 39
4.2 Reproduzierbarkeit der Analysenmethode 40
4.3 Untersuchungen am Fleischkutter 44
4.3.1 Probenahme 44
4.3.2 Untersuchungen an 10 kg Pistazien und 6,6 kg Eis, P = 13 kW 44
4.3.3 Untersuchungen an 10 kg Pistazien und 8,5 kg Eis 46
4.3.3.1 Untersuchungen mit P = 13 kW 46
4.3.3.2 Untersuchungen mit P = 16 kW 49
4.3.4 Untersuchungen an 10 kg Pistazien und 10 kg Eis 51
4.3.4.1 Untersuchungen mit P = 13 kW 51
4.3.4.2 Untersuchungen mit P = 16 kW 54
4.3.5 Konsequenzen für Routineuntersuchungen 56
4.4 Nachweisgrenze 57
4.5 Praktische Anwendung des Analysenverfahrens 59
4.5.1 Pistazien aus dem Berliner Handel 59
4.5.2 Untersuchungen am Gefechsel 62
4.5.3 Ausreißertest 62
4.5.4 Qualitative Absicherung der Analysenergebnisse 63
4.5.4.1 HPLC ohne Nachsäulenderivatisierung 63
4.5.4.2 Amtliches Untersuchungsverfahren nach § 35 LMBG . . . . .. . . . . .63
4.6 Methodenmodifizierung und weitere Untersuchungen 65
4.6.1 Modifizierung der Analysenmethode 65
4.6.1.1 Extraktionsmischung 65
4.6.1.2 Extraktionszeit 66
4.6.1.3 Vergleich zweier unterschiedlicher Extraktionsmethoden 68
4.6.2 Haltbarkeit von Rohextrakten 69
4.6.3 Peak Quenching 70
4.6.4 Wiederfindung 72
5. Zusammenfassung 74
6. Literatur 76
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