Produktion und Analytik von Plasmid-DNA für die Gentherapie:
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
.
1
1.1
ZIELE
DER
ARBEIT
.
2
2
THEORETISCHER
HINTERGRUND
.
.
3
2.1
PLASMIDE
.
3
2.1.1
PLASMID-REPLIKATION
UND-KOPIENZAHL
.
3
2.1.2
PLASMIDSTABILITAET
.
4
2.1.3
PLASMIDFORMEN
.
5
2.2
SOMATISCHE
GENTHERAPIE
UND
DNA-VAKZINIERUNG
.
8
2.2.1
EINSATZMOEGLICHKEITEN
DER
SOMATISCHEN
GENTHERAPTE
.
9
2.2.2
VEKTOREN
FUER
DIE
SOMATISCHE
GENTHERAPIE
.
11
2.2.3
DNA-VAKZINIERUNG
.
13
2.2
4
PRODUKTION
UND
QUALITAETSKONTROLLE
NICHT-VIRALER
VEKTOREN
.
14
2.3
TRENNUNG
VON
DNA
DURCH
KAPILLARGELELEKTROPHORESE
.
16
2.3.1
THEORETISCHE
GRUNDLAGEN
DER
KAPTLLARELEKTROPHORESE
(CE)
.
16
2.3.2
THEORIE
DER
KAPILLARGELELEKTROPHORESE
.
22
2.3.3
DNA-ANALYTIK
MIT
KAPILLARGELELEKTROPHORESE
.
25
2.4
HOCHZELLDICHTEKULTIVIERUNG
VON
ESCHERICHIA
COLI
.
28
2.4.1
DER
STOFFWECHSEL
VON
ESCHERICHIA
COLI
.
28
2.4
2
KULTIVIERUNG
VON
ESCHERICHIA
COLI
.
32
2.4
3
ZULAUFKULTIVIERUNGEN
.
35
3
MATERIAL
UND
METHODEN
.39
3.1
GERAETE
UND
CHEMIKALIEN
.
39
3.2
BAKTERIENSTAEMME
UND
PLASMIDE
.
39
3.3
KULTIVIERUNG
VON
BAKTERIEN
.
40
3.4
KULTIVIERUNG
IN
BIOREAKTOREN
.
43
3.5
ANALYTISCHE
METHODEN
.
49
3.6
ISOLIERUNG
UND
ANALYTIK
VON
PLASMID-DNA
.
52
4
ERGEBNISSE
UND
DISKUSSION
.59
4.1
ANALYSE
VON
PLASMIDFORMEN
MITTELS
KAPILLARGELELEKTROPHORESE
.
59
4.1.1
IDENTIFIZIERUNG
VON
PLASMIDFORMEN
MITTELS
ELEKTRONENMIKROSKOPISCHER
AUFNAHMEN
UND
AGAROSE
GELELEKTROPHORESE
.
59
4.1.2
ENTWICKLUNG
EINER
METHODE
ZUR
AUFTRENNUNG
VON
PLASMIDFORMEN
DURCH
KAPILLARGELELEKTROPHORESE
AM
BEISPIEL
PUC19
.
64
4.1.3
ZUORDNUNG
DER
PLASMIDFORMEN
ZU
DEN
KAPILLARGELELEKTROPHORESE-SIGNALEN
VON
PUC19-PLASMID-DNA
.
70
4.1.4
ENTWICKLUNG
EINER
METHODE
ZUR
AUFTRENNUNG
VON
PLASMIDFORMEN
MITTELS
KAPILLARGELELEKTROPHORESE
AM
BEISPIEL
PCMV-S2S
.
73
4.
1
.5
QUANTIFIZIERUNG
DER
VERSCHIEDENEN
PLASMIDFORMEN
MITTELS
KAPILLARGELELEKTROPHORESE
.
77
4.1.6
DETEKTION
ANDERER
NUKLEINSAEUREN
ALS
VERUNREINIGUNGEN
.
81
4.1.7
QUALITAETSKONTROLLE
VON
DNA-PROBEN
ANDERER
PLASMIDE
.
82
4.1.8
ANALYSE
VON
PLASMIDFORMEN
MITTELS
KAPILLARGELELEKTROPHORESE
BEI
VERWENDUNG
EINES
UV-DETEKTORS
.
85
4
1.9
VERGLEICH
VON
KAPILLAR
UND
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
ZUR
QUALITAETSKONTROLLE
VON
PLASMID-DNA
.
86
4.2
VERFAHREN
ZUR
PRODUKTION
VON
PLASMID-DNA
IM
BIOREAKTOR
.
88
4.2.1
SATZKULTIVIERUNGEN
IM
MASSSTAB
VON
120
L
.
91
4.2.2
SATZKULTIVIERUNGEN
IM
7
L-BIOREAKTOR
.
95
4.2.3
ENTWICKLUNG
EINER
ZULAUFSTRATEGIE
FUER
KULTIVIERUNGEN
IN
PMH/2-MEDIUM
IM
7
L-BIOREAKTOR
.
107
4.2.4
HOCHZELLDICHTEKULTIVIERUNGEN
IN
VERSCHIEDENEN
GLYCERIN-MEDIEN
ZUR
PRODUKTION
VON
PLASMID-DNA
.
121
4.2
5
VERGLEICH
DER
KULTIVIERUNGEN
IM
7
L-BIOREAKTOR
.
131
4
2.6
WEITERE
PO
2
-GEREGELTE
ZULAUFKULTIVIERUNGEN
IN
GLYCERIN-HEFE-(+)-MEDIUM
.
133
S
ZUSAMMENFASSUNG
.
.
.
140
6
LITERATURVERZEICHNIS.
.
.
143
7
ANHANG.
.
156 |
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