Pharmakologische und zellbiologische Charakterisierung der Rezeptoren für Angiotensin und Endothelin in circumventrikulären Organen der Ratte:
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INHALTSVERZEICHNIS
I
INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1.1.
CIREUMVENTRIKULAERE
ORGANE
1
1.1.1.
MORPHOLOGIE
DES
SUBFOMICALORGANS
(SFO)
4
1.1.2.
MORPHOLOGIE
DES
ORGANUM
VASCULOSUM
8
LAMINAE
TERMINALIS
(OVLT)
1.1.3.
FUNKTIONELLE
BEDEUTUNG
VON
SFO
UND
OVLT
9
1.2.
ENDOTHELIN(E)
(ET1
/
ET3)
:
12
1.3.
ANGIOTENSIN
(AH)
14
1.4.
ZIELE
DER
ARBEIT
16
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
2.1. MATERIAL
18
2.1.1.
GERAETE
18
2.1.2.
VERBRAUCHSMATERIAL
19
2.1.3.
CHEMIKALIEN
20
2.1.4.
PUFFER
22
2.2.
VERSUCHSTIERE
25
2.3.
MESSMETHODEN
26
2.3.1.
RADIOJODINIERUNG
PEPTIDERGER
BOTENSTOFFE
26
A)
ALLGEMEINE
METHODE
26
B)
RADIOJODINIERUNG
VON
ENDOTHELIN-1
UND
AH
26
2.3.2.
KOMPETITIVE
VERDRAENGUNGSSTUDIEN:
CHARAKTERISIERUNG
27
MEMBRANINTRINSISCHER
REZEPTORSUBTYPEN
A)
ALLGEMEINE
METHODE
27
B)
MEMBRANPRAEPARATION
DES
RATTENGEHIMS
28
C)
BESTIMMUNG
VON
ET
1
-REZEPTORSUBTYPEN
29
IM
RATTENGEHIM
2.3.3.
REZEPTORAUTORADIOGRAPHIE
30
A)
ALLGEMEINE
METHODE
30
INHALTSVERZEICHNIS
II
B)
GEWEBEVORBEREITUNG
UND
DURCHFUEHRUNG_
31
DER
AUTORADIOGRAPHIE
C)
AUSWERTUNG
DER
ROENTGENFILME
_
33
D)
GEGENFAERBUNG
NACH
KLUEVER-BARRERA
_
34
2.3.4.
NEUROGLIALE PRIMAERKULTUR
SENSORISCHER
CIRCUMVEN
:
_
35
TRIKULAERER
ORGANE
DER
LAMINA
TERMINALIS
DES
RATTENGEHIMS
A)
ALLGEMEINE
METHODE_
35
B)
KULTURMEDIEN
UND
-LOESUNGEN_
36
C) MONTAGE
UND
BESCHICHTUNG
DER
KULTURKAMMEM_36
D)
ZELLISOLIERUNG
_
37
2.3.5.
MESSUNG
INTRAZELLULAERER
CALCIUMKONZENTRATIONEN
_
39
A)
ALLGEMEINE
METHODE_
39
B)
BESTIMMUNG DER
DISSOZIATIONSKONSTANTEN
VON
_
41
FURA-2
FUER
CALCIUM
IN
VITRO
C)
MESSTECHNIK
_
44
D)
BELADUNG
DER
ZELLEN
MIT
FURA-2AM
UND
AUFBAU_44
DER
MESSKAMMER
E)
VERSUCHSANSAETZE
_
48
2.3.6.
IMMUNCYTOCHEMIE
A)
ALLGEMEINE
METHODE_
50
B)
IMMUNCYTOCHEMIE
IN
DER
ZELLKULTUR
_
51
C)
IMMUNCYTOCHEMIE
AN
GEWEBESCHNITTEN_
52
D)
AUSWEITUNG
DER
IMMUNCYTOCHEMIE_
54
3.
ERGEBNISSE
3.1.
DAS CVO-INTRINSISCHE
ENDOTHELINSYSTEM
_
55
3.1.1.
ETL/ET3-SPEZIFISCHE
IMMUNCYTOCHEMIE
IM
_
55
RATTENGEHIM
3.1.2.
RADIOJODINIERUNG
VON
ENDOTHELIN-1
(ET1)
_
63
3.1.3.
KOMPETITIVE
MEMBRANBINDUNGSSTUDIEN
FUER
[
125
I]ET1
_
64
IM
GEHIRN
DER
RATTE
3.1.4.
ANALYTISCHE
REZEPTORAUTORADIOGRAPHIE
FUER
[
125
I]ET1
_
65
IM
RATTENGEHIM
3.1.5.
ANALYTISCHE
REZEPTORAUTORADIOGRAPHIE
FUER
[
125
I]ET
1
_
73
IN
NIERE
UND
AORTA
3.2.
DIE
NEUROGLIALE
CVO-SPEZIFISCHE
PRIMAERKULTUR
_
77
3.3.
ENDOTHELIN-INDUZIERTE
SIGNALTRANSDUKTION
IN
_
85
ASTROZYTEN
DER
PRIMAERKULTUR
AUS
SFO
UND
OVLT
INHALTSVERZEICHNIS
III
3.3.1.
ET1/ET3
-INDUZIERTE
CALCIUMSIGNALE
85
3.3.2.
ET
A
UND ET
B
REZEPTORSUBTYP-VERMITTELTE
86
CALCIUMSIGNALE
3.4.
DAS
CVO-INTRINSISCHE
ANGIOTENSIN
H
(ALL)
SYSTEM_94
DER
RATTE
3.4.1.
[
I25
I]ALL-SPEZIFISCHE
BINDUNGSSTELLEN
IM
NEONATALEN
94
RATTENGEHIM
3.4.2.
ALL-SPEZIFISCHE
IMMUNREAKTIVITAET
IN
DER
CVO
97
PRIMAERKULTUR
3.5.
AH
UND
AL-INDUZIERTE
CALCIUMSIGNALE
IN
NEURONEN
100
UND
ASTROZYTEN
3.5.1.
ATI
UND AT
2
REZEPTOR-VERMITTELTE
CALCIUMSIGNALE_102
3.5.2.
AL-INDUZIERTE
CALCIUMSIGNALE
104
3.6.
ALL
/
ETL-UND
ET3-INDUZIERTE
CALCIUMSIGNALE
106
4.
DISKUSSION
4.1.
ENDOTHELINEXPRESSION
IN
ASTROZYTEN
DES
RATTENGEHIMS
110
4.2.
ENDOTHELIN
REZEPTOREN
114
4.2.1.
REZEPTOREN
FUER
ENDOTHELIN
1
UND
ENDOTHELIN-3
114
IM
RATTENGEHIM
4.2.2.
ENDOTHELIN-SPEZIFISCHE
REZEPTORSUBTYPEN
115
IM
RATTENGEHIM
4.3.
CHARAKTERISIERUNG
DER
SFO
UND
OVLT
PRIMAERKULTUR
118
4.4.
GENERIERUNG
VON
CALCIUMSIGNALEN
IN
ASTROZYTEN
120
4.4.1.
ENDOTHELIN-INDUZIERTE
CALCIUMSTROEME
IN
ASTROZYTEN
120
4.4.2.
CALCIUMVERTEILUNG
UND
HOMOEOSTASE
IN
GLIAZELLEN
123
4.4.3.
CALCIUMFREISETZUNG
AUS
INTRAZELLULAEREN
SPEICHERN
124
4.5.
NEURON-GLIA
INTERAKTIONEN
126
4.6.
ANGIOTENSIN
H-SPEZIFISCHE
BINDUNGSSTELLEN
IM
128
IM
RATTENGEHIM
INHALTSVERZEICHNIS
IV
4.7. AH-INDUZIERTE
MECHANISMEN
DER
INTRAZELLULAEREN
130
SIGNALTRANSDUKTION
IN
SENSORISCHEN
CVOS
DER
LAMINA
TERMINALIS
4.8.
DAS
NEUROGLIALE
ANGIOTENSIN-SYSTEM
SENSORISCHER
134
CVOS
4.9.
INTERAKTIONEN
VON
ENDOTHELIN
UND
ANGIOTENSIN
II
136
5.
ZUSAMMENFASSUNG
139
6.
LITERATUR
_
141 |
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| title_short | Pharmakologische und zellbiologische Charakterisierung der Rezeptoren für Angiotensin und Endothelin in circumventrikulären Organen der Ratte |
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