Verfügbarkeit: Der Basalapparat von Spermatozopsis similis (Chlorophyceae)

Der Basalapparat von Spermatozopsis similis (Chlorophyceae):

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Bibliographische Detailangaben
1. Verfasser:	Geimer, Stefan 1965- (VerfasserIn)
Format:	Abschlussarbeit Buch
Sprache:	German
Veröffentlicht:	1998
Schlagworte:	Proteine Spermatozopsis similis Basalkörper Strukturaufklärung Hochschulschrift
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adam_text	INHALTSVERZEICHNIS INHALTSVERZEICHNIS I VERZEICHNIS DER ABBILDUNGEN V VERZEICHNIS DER TABELLEN VI ABKUERZUNGSVERZEICHNIS VII I EINLEITUNG 1 DAS UNTERSUCHUNGSOBJEKT SPERMATOZOPSIS SIMILIS 10 II MATERIAL UND METHODEN 14 1 MATERIALIEN 14 1.1 CHEMIKALIEN UND BEZUGSQUELLEN 14 1.2 YYKITS " UND ENZYME 16 1.3 OLIGONUKLEOTIDE 17 2 ALGENSTAEMME UND KULTURBEDINGUNGEN 17 2 1 SPERMATOZOPSIS SIMILIS PREISIG ET MELKONI AN (1984) 17 2.2 WEITERE ORGANISMEN 19 3 PRAEPARATIVE METHODEN 19 3.1 ISOLIERUNG VON BASALAPPARATEN AUS SPERMATOZOPSIS SIMILIS 19 3.1.1 KONZENTRIERUNG DER ZELLEN 19 3.1.2 ANREICHERUNG VON BASALAPPARATEN DURCH DIFFERENTIELLE ZENTRIFUGATION 19 3 1.3 REINIGUNG VON BASALAPPARATEN DURCH SACCHAROSEDICHTEGRADIENTENZENTRI FUEGATION 21 3.2 DESINTEGRATION VON BASALAPPARATEN DURCH EINE BEHANDLUNG MIT DER YYFRENCH-PRESS" 22 3.3 ISOLIERUNG VON CYTOSKELETTEN AUS SPERMATOZOPSIS SIMILIS 22 3.4 REINIGUNG DER REKOMBINANTEN PROTEINE 23 3.4.1 ANREICHERUNG DER , JNCLUSION BODIES " 23 3.4.2 ANIONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE (MONOQ) 24 3.5 IN VIZRO-REKONSTITUIERUNG VON QUERGESTREIFTEN FASERN AUS DEM REKOMBI NANTEN PROTEIN 7/1 24 4 PROTEINBIOCHEMISCHE METHODEN 25 4.1 ELEKTROPHORETISCHE METHODEN 25 4.1.1 SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE(SDS-PAGE) 25 4 1.2 ELEKTROTRANSFER VON PROTEINEN (ELEKTROBLOTTEN) 27 4.1 3 ELEKTROELUTION 27 4.2 FAERBUNGEN 28 4.2.1 COOMASSIEFARBUNG FUER SDS-PAGE 28 4.2.2 PONCEAUFTRBUNG VON PVDF-MEMBRAN 28 1 _ _ . _ INHALTSVERZEICHNIS 4.2.3 AMIDOSCHWARZFAERBUNG VON PVDF-MEMBRAN 28 4.3 FAELLUNG VON PROTEINEN MIT ACETON 28 4.4 PROTEINBESTIMMUNG 29 4.5 DIALYSEN 29 4.5 1 DIALYSE IN DIALYSESCHLAEUCHEN 29 4.5.2 MIKRODIALYSE 29 5 MIKROSEQUENZIERUNGEN UND MASSENSPEKTROSKOPIE 30 5 1 N-TERMINALE MIKROSEQUENZIERUNG UND MASSENSPEKTROSKOPISCHE ANALYSE DER CARBOXYTERMINALEN PEPTIDE VON A-TUBULIN 30 5.2 MIKROSEQUENZIERUNGEN DES REKOMBINANTEN PROTEINS 7/1 UND EINES 38 KDA BASALAPPARATPROTEINS 30 6 ANTIKOERPER 31 6 1 GEWINNUNG DER ANTIGENE 31 6 2 IMMUNISIERUNGEN 31 7 IMMUNOLOGISCHE METHODEN 32 7.1 YYWESTEMBLOT " 32 7.2 INDIREKTE IMMUNFLUORESZENZ 32 7.2.1 EINFACHE INDIREKTE IMMUNFLUORESZENZ AN ISOLIERTEN CYTOSKELETTEN 32 7.2.2 INDIREKTE DOPPELIMMUNFLUORESZENZ AN ISOLIERTEN CYTOSKELETTEN 33 7.3 IMMUNOGOLDELEKTRONENMIKROSKOPIE 34 7 3.1 HERSTELLUNG VON PROTEIN A-GOLD 34 7.3.2 ,PREEMBEDDING" -TECHNIK 34 7.3.3 ,J*OSTEMBEDDING " -TECHNIK 35 8 ELEKTRONENMIKROSKOPIE 36 8 1 BEFILMUNG VON EM-NETZEN 36 8.2 ANFERTIGUNG VON YYWHOLE MOUNT " -PRAEPARATEN 36 8.3 ANFERTIGUNG VON PRAEPARATEN FUER ULTRADUENNSCHNITTE 36 8.3.1 FIXIERUNG DER UEBER DIFFERENTIELLE ZENTRIFUGATION ANGEREICHERTEN BASAL APPARATE 36 8.3.2 FIXIERUNG DER UEBER DICHTEGRADIENTENZENTRIFUGATION GEREINIGTEN BASAL APPARATE 37 8 3.3 EINBETTUNG VON CYTOSKELETTEN FUER DIE YYPOSTEMBEDDING " -TECHNIK 37 8.3.4 EPON-EINBETTUNG 38 8 4 ULTRAMIKROTOMIE 39 8.5 KONTRASTIERUNGEN 39 8 5.1 KONTRASTIERUNG NACH REYNOLDS (1963) 39 8.5.2 KONTRASTIERUNG NACH GOWEN ET AL. (1995) 39 8.6 ELEKTRONENMIKROSKOP UND FILMMATERIAL 40 9 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 40 9.1 GRUNDLEGENDE MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 40 INHALTSVERZEICHNIS 92 93 9.3.1 9 3.2 9.4 9.5 9.6 9.7 9.8 9.9 9.9 1 9.9.2 9.9.3 9.9.4 9.10 9 11 9.12 III 1 1.1 1.2 1.3 1.4 2 3 3.1 32 3 3 34 3.5 VEKTOREN, E. COLI STAEMME, ANZUCHT UND LAGERUNG 40 ISOLATION, REINIGUNG, FAELLUNG UND QUANTIFIZIERUNG VON NUKLEINSAEUREN 41 PLASMID-ISOLATIONEN AUS E. COLI 41 DNA-ISOLATION AUS SPERMATOZOPSIS SIMILIS MIT DEM DETERGENS CT AB 42 PHOTOMETRISCHE KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON NUKLEINSAEUREN 43 AGAROSE-GELELEKTROPHORESE 43 ENZYMATISCHE RESTRIKTION 43 SICHTUNG DER CDNA-BANK VON SPERMATOZOPSIS SIMILIS MIT DEM ANTI 95 KDA-ANTISERUM 44 PROTEINEXPRESSION DER ISOLIERTEN CDNA-KLONE 45 KLONIERUNG VON CDNA-FRAGMENTEN 45 VORBEREITUNG DER CDNA-FRAGMENTE UND DES VEKTORS 45 LIGATION 46 HERSTELLUNG KOMPETENTER E. COLI ZELLEN 46 TRANSFORMATION 47 YYSOUTHEM " -TRANSFER UND DNA-HYBRIDISIERUNG 47 SEQUENZIERUNG 48 COMPUTERGESTUETZTE SEQUENZANALYSEN 48 ERGEBNISSE 50 VORBEMERKUNGEN 50 ISOLIERUNG VON BASALAPPARATEN AUS SPERMATOZOPSIS SIMILIS PREISIG ET MELKONIAN 50 ANREICHERUNG VON BASALAPPARATEN UEBER DIFFERENTIELLE ZENTRIFUGATION 50 REINIGUNG VON BASALAPPARATEN UEBER SACCHAROSEDICHTEGRADIENTENZENTRIFU GATION 51 VERGLEICH DER PROTEINZUSAMMENSETZUNG VON UEBER DIFFERENTIELLE ZENTRI FUGATION BZW. UEBER SACCHAROSEDICHTEGRADIENTENZENTRIFUEGATION GEWONNENEN BASALAPPARATPRAEPARATIONEN 56 VERSUCHE ZUR CHARAKTERISIERUNG EINIGER BASALAPPARATSPEZIFISCHER PROTEINE 57 POSTTRANSLATIONALE MODIFIKATIONEN DES A-TUBULINS AUS BASALAPPA RATEN VON SPERMATOZIOPSIS SIMILIS 61 CHARAKTERISIERUNG VON ZWEI NEUEN BASALAPPARATPROTEINEN 64 DER ANTI-95 KDA-ANTIKOERPER 64 SICHTUNG EINER CDNA-BANK VON SPERMATOZOPSIS SIMILIS MIT DEM ANTI 95 KDA-ANTIKOERPER 64 YYSOUTHEM " -ANALYSE DER KODIERENDEN REGIONEN DER KLONE 7/1 UND B8 65 REINIGUNG DER REKOMBINANTEN EXPRESSIONSPROTEINE 7/1 UND B8 68 HERSTELLUNG VON ANTIKOERPERN GEGEN DIE REKOMBINANTEN PROTEINE 7/1, B8 UND ANDERE 68 IV INHALTSVERZEICHNIS 3.6 YYWESTEMBLOT " -ANALYSE DER ANTISEREN ANTI-7/1 UND ANTI-B8 69 3 6 SEQUENZANALYSE DES KLONS 7/1 76 3 7 LOKALISIERUNG DES PROTEINS 7/1 DURCH INDIREKTE IMMUNFLUORESZENZ UND IMMUNOGOLDELEKTRONENMIKROSKOPIE 82 3 8 IN WIRO-REASSEMBLIERUNG DES REKOMBINANTEN PROTEINS 7/1 86 3.9 SEQUENZANALYSE DES KLONS B8 88 3.10 LOKALISIERUNG DES PROTEINS B8 DURCH INDIREKTE IMMUNFLUORESZENZ UND IMMUNOGOLDELEKTRONENMIKROSKOPIE 94 4 DIE ULTRASTRUKTUR DES BASALAPPARATES VON SPERMATOZOPSIS SIMILIS 98 VORBEMERKUNGEN 98 4.1 ZUR NOMENKLATUR DER ELEMENTE DES BASALAPPARATES 98 4.2 DIE ANTIPARALLELE UND PARALLELE KONFIGURATION DER BASALKOERPER DES BASAL APPARATES VON 5. SIMILIS 99 4.3 DIE BASALKOERPER 100 4.4 CENTRIN UND SF-ASSEMBLIN-HALTIGE STRUKTUREN 101 4 4.1 DIE DISTALE VERBINDUNGSFIBRILLE 101 4.4.2 DIE SYSTEM-I-FIBRILLEN 102 4.5 VERBINDUNGEN ZWISCHEN DEN BASALKOERPEM UND DEN MIKROTUBULAEREN GEISSELWURZELN 103 4.5.1 DIE LINKEN FIBRILLEN (SF-FIBRILLEN) 103 4.5.2 DIE RECHTEN FIBRILLEN (DF-FIBRILLEN) 104 4.6 DIE PROXIMALEN PLATTEN 104 IV DISKUSSION 124 ISOLIERUNG VON BASALAPPARATEN AUS SPERMATOZOPSIS SIMILIS 124 DIE PROTEINZUSAMMENSETZUNG ISOLIERTER BASALAPPARATE AUS SPERMATOZOPSIS SIMILIS 125 DIE POSTTRANSLATIONALEN MODIFIKATIONEN DES A-TUBULINS AUS DEM BASALAPPARAT VON S. SIMILIS 128 CHARAKTERISIERUNG VON ZWEI NEUEN BASALAPPARATPROTEINEN 129 DIE LOKALISATION DES 95 KDA-PROTEINS 132 DIE LOKALISATION DES 90 KDA-PROTEINS 137 DIE LJLTRASTRUKTUR DES BASALAPPARATES VON SPERMATOZOPSIS SIMILIS 138 V ZUSAMMENFASSUNG 144 AUSBLICK 145 VI LITERATURVERZEICHNIS 147 VII ANHANG 162
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