Primäre und kryokonservierte Hepatozyten von Mensch und Ratte zur Bestimmung der Genotoxizität von Chemikalien: eine vergleichende Studie
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1
1.1.
DIE
LEBER
ALS
HAUPTMETABOLISIERUNGSORGAN
1
1.2.
VERWENDUNG
VON
HEPATOZYTEN
3
1.2.1.
VERWENDUNG
VON
HUMANEN
HEPATOZYTEN
4
1.3.
VITALITAETSBESTIMMUNGEN
BEI
LEBERZELLEN
5
1.4.
AUSSAGEN
ZUR
PROBLEMATIK
DER
KRYOKONSERVIERUNG
5
1.5.
TOXIKOLOGISCHE
ASPEKTE
7
1.5.1,
GENETISCHE
ENDPUNKTE
7
1.5.2.
TESTSYSTEME
9
1.5.2.1.
DNA-REPARATURSYNTHESE
11
1.5.3.
WERTUNG
DES
UDS-TEST
14
1.5.4.
VERWENDETE
SUBSTANZEN
15
1.6.
FRAGESTELLUNG
23
2.
MATERIAL UND
METHODEN
25
2.1.
GEWINNUNG
VON
PRIMAEREN
MENSCHLICHEN
HEPATOZYTEN
25
2.2.
GEWINNUNG
VON
PRIMAEREN
RATTENHEPATOZYTEN
27
2.3.
KRYOKONSERVIERUNG
30
2.4.
TRYPANBLAU-EXKLUSIONSTEST
31
2.5.
ALBUMINSYNTHESE
32
2.5.1.
METHODE
A
32
2.5.2.
METHODE
B
35
2.6.
LDH-FREISETZUNG
36
2.6.1.
METHODE
A
36
2.6.2.
METHODE
B
37
2.7.
ECOD-BESTIMMUNG
38
2.8.
EROD-BESTIMMUNG
41
2.9.
TESTOSTERONMETABOLISMUS
43
2.9.1.
DURCHFUEHRUNG
BEI
PRIMAEREN
ZELLEN
44
2.9.2.
DURCHFUEHRUNG
BEI
KRYOKONSERVIERTEN
ZELLEN
45
2
9.3.
SPALTUNG
VON
PHASE
II-METABOLITEN
45
2.9.4.
DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE
(DC)-LAUF
UND
AUTORADIOGRAPHIE
46
2.10.
PROTEINBESTIMMUNG
NACH
BRADFORD
47
2.11.
DNA-BESTIMMUNG
NACH
LABARCA
48
2.12.
WILLIAMS-ODER
UDS-TEST
49
3.
ERGEBNISSE
54
3.1.
BESCHREIBUNG
DER
MORPHOLOGIE
VON
HUMANEN
UND
RATTENHEPATOZYTEN
54
3.2.
KRYOKONSERVIERUNG
55
3.3.
VITALITAETSKRITERIEN
58
3.3.1.
ALBUMINSYNTHESE
58
3.3.2.
LDH-FREISETZUNG
64
3.4.
ENZYMBESTIMMUNGEN
71
3.4.1.
ECOD-AKTIVITAET
72
3.4.2.
EROD-AKTIVITAET
77
3.4.3.
TESTOSTERONMETABOLISMUS
82
3.5.
GENOTOXIZITAET
95
3.5.1.
UDS-TEST
96
4.
DISKUSSION
113
4.1.
KRYOKONSERVIERUNG
UND
VITALITAET
VON
HEPATOZYTEN
114
4.1.1.
KRYOKONSERVIERUNG
114
4.1.2.
TRYPANBLAU-TEST
116
4.1.3.
ALBUMINSYNTHESE
117
4.1.4.
LDH-FREISETZUNG
118
4.2.
ENZYMBESTIMMUNGEN
119
4.2.1.
ECOD-
UND
EROD-BESTINUNUNG
119
4.2.2.
TESTOSTERONMETABOLISMUS
121
4.3.
GENOTOXIZITAET
124
4
4
ALLGEMEINE
SCHLUSSFOLGERUNGEN
128
5.1.
ZUSAMMENFASSUNG
131
5.2.
SUMMARY
133
6.
ANHANG
135
61
UDS-ERGEBNISSE
135
6.1.1.
UDS-ERGEBNISSE
VON
PRIMAEREN
RATTENHEPATOZYTEN
135
6.1.2.
UDS-ERGEBNISSE
VON
PRIMAEREN
HUMANEN
HEPATOZYTEN
138
6.13.
UDS-ERGEBNISSE
VON
KRYOKONSERVIERTEN
RATTENHEPATOZYTEN
141
6.1.4.
UDS-ERGEBNISSE
VON
KRYOKONSERVIERTEN
HUMANEN
HEPATOZYTEN
145
6.2.
HINWEISE
AUF
BESONDERE
GEFAHREN
UND
SICHERHEITSRATSCHLAEGE
149
6.2.1.
VERWENDETE
SUBSTANZEN
IN
KOMBINATION
MIT
R
UND
S-SAETZEN
149
6.2.2.
HINWEISE
AUF
BESONDERE
GEFAHREN
(R-SAETZE)
150
6.2.3.
KOMBINATION
DER
R-SAETZE
151
6
2.4.
SICHERHEITSRATSCHLAEGE
(S-SAETZE)
151
6.2.5.
KOMBINATION
DER
S-SAETZE
152
7.
LITERATURVERZEICHNIS
153 |
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