Funktionelle Charakterisierung der Kaliumkanal-a-Untereinheit AtKC1 aus Arabidopsis thaliana:
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1997
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
V
1
EINLEITUNG
1
1.1
TIERISCHE
SPANNUNGSABHAENG
I
GE
KALIUMKANAELE
5
1.1.1
AUSWAERTSREKTIFIZIERENDE
K*-KANAELE
5
1.1.2
EINWAERTSREKTIFIZIERENDE
K*-KANAELE
9
1.2
PFLANZLICHE
EINWAERTSREKTIFIZIERENDE
KALIUMKANAELE
10
1.3
ZIELSETZUNG
15
2
MATERIAL
UND
METHODEN
17
2.1
MATERIAL
17
2.1.1
PFLANZEN
17
2.1.2
HEFE
17
2.1.3
BAKTERIEN
17
2.1.4
VEKTOREN
17
2.1.5
ENZYME
18
2.1.6
CHEMIKALIEN
18
2.1.7
FILTER
UND
MEMBRANEN
20
2.1.8
FILMMATERIAL
20
2.1.9
GERAETE
20
2.1.10
DATENVERARBEITUNG
21
2.1.11
KULTURMEDIEN
21
2.1.11.1
BAKTERIENMEDIEN
21
2.1.11.2
HEFEMEDIEN
21
2.1.11.3
PFLANZENMEDIEN
22
2.1.12
ANTIBIOTIKA,
HORMONE,
STAMMLOESUNGEN
23
2.2
METHODEN
24
2.2.1
DNA
PRAEPARATIONEN
24
2.2.1.1
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
AUS
ESCHERICHIA
COLI
24
2.2.1.2
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
AUS
AGROBACTERIUM
TUMEFACIENS
24
2.2.1.3
ISOLIERUNG
VON
GENOMISCHER
PFLANZEN-DNA
FUER
SOUTHERN-BLOT
ANALYSEN
24
2.2.1.4
ISOLIERUNG
VON
GENOMISCHER
PFLANZEN-DNA
FUER
PCR
25
II
2.2.2
RNA
PRAEPARATIONEN
25
2.2.2.1
ISOLIERUNG
VON
GESAMT-RNA
25
2.2.2.2
ISOLIERUNG
VON
POLY(A)
+
-RNA
25
2.2.3
PROTEIN
PRAEPARATIONEN
26
2.2.3.1
PRAEPARATION
VON
PROTEINEN
AUS
ARABIDOPSIS
THALIANA
PFLANZEN
26
2.2.3.2
PRAEPARATION
VON
PROTEINEN
AUS
HEFEN
27
2.2.4
METHODEN
ZUR
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
27
2.2.4.1
BESTIMMUNG
DER
DNA-,
RNA
UND
OLIGONUKLEOTID-KONZENTRATION
27
2.2.4.2
BESTIMMUNG
DER
PROTEINKONZENTRATION
27
2.2.5
ENZYMATISCHE
REAKTIONEN
28
2.2.5.1
SPALTUNG
VON
DNA
MIT
RESTRIKTIONSENZYMEN
28
2.2.5.2
DEPHOSPHORYLIERUNG
VON
DNA
28
2.2.5.3
AUFFULLREAKTIONEN
28
2.2.5.4
LIGATION
VON
DNA-FRAGMENTEN
29
2.2.5.5
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA
29
2.2.5.6
DNA-SEQUENZIERUNG
29
2.2.5.7
POLYMERASEKETTENREAKTION
(PCR)
29
2.2.6
GELELEKTROPHORETISCHE
METHODEN
30
2.2.6.1
AUFTRENNUNG
VON
DNA
UND
ISOLIERUNG
VON
FRAGMENTEN
30
2.2.6.2
AUFTRENNUNG
VON
RNA
31
2.2.6.3
AUFTRENNUNG
VON
PROTEINEN
UND
COOMASSIE
FAERBUNG
31
2.2.7
BLOTTEN
VON
NUKLEINSAEUREN
UND
PROTEINEN
32
2.2.7.1
SOUTHERN-BLOT
32
2.2.7.2
NORTHERN-BLOT
32
2.2.7.3
WESTERN-BLOT
32
2.2.8
NACHWEIS
FILTERGEBUNDENER
SIGNALE
32
2.2.8.1
SOUTHERN-BLOT
HYBRIDISIERUNG
32
2.2.8.2
NORTHERN-BLOT
HYBRIDISIERUNG
33
2.2.8.3
IMMUNFAERBUNG
FILTERGEBUNDENER
PROTEINE
33
2.2.9
TRANSFORMATIONSMETHODEN
33
2.2.9.1
BAKTERIEN
33
2.2.9.1.1
PRAEPARATION
ELEKTROKOMPETENTER
ESCHERICHIA
COLI
ZELLEN
33
2.2.9.1.2
PRAEPARATION
ELEKTROKOMPETENTER
AGROBACTERIUM
TUMEFACIENS
ZELLEN
34
2.2.9.1.3
BAKTERIENTRANSFORMATION
34
2.2.9.2
HEFE
34
2.2.9.2.1
PRAEPARATION
KOMPETENTER
SACCHAROMYCES
CEREVISIAE
ZELLEN
34
2.2.9.2.2
HEFETRANSFORMATION
34
2.2.9.3
PFLANZEN
35
2.2.9.3.1
ANZUCHT
VON
ARABIDOPSIS
THALIANA
PFLANZEN
FUER
DIE
TRANSFORMATION
35
2.2.9.3.2
PFLANZENTRANSFORMATION
35
2.2.10
KULTIVIERUNG
VON
ARABIDOPSIS
THALIANA
PFLANZEN
35
2.2.10.1
OBERFLAECHENSTERILISATION
VON
SAMEN
35
2.2.10.2
HERSTELLUNG
VON
WURZELKULTUREN
35
2.2.10.3
SEGREGATIONSANALYSEN
36
2.2.11
GUS-ANALYSEN
36
2.2.11.1
QUALITATIVE
BESTIMMUNG
DER
GUS-AKTIVITAET
36
2.2.11.2
QUANTITATIVE
BESTIMMUNG
DER
GUS-AKTIVITAET
36
2.2.11.3
INDUKTIONSEXPERIMENTE
37
2.2.12
SETNIDUENNSCHNITTE
38
2.2.13
IMMUNCYTOCHEMIE
38
2.2.13.1
HERSTELLUNG
EINES
POLYKLONALEN
ANTI-ATKCL
ANTIKOERPERS
38
2.2.13.2
IMMUNCYTOCHEMIE
AN
WURZELN
39
2.2.13.3
IMMUNCYTOCHEMIE
AN
PROTOPLASTEN
40
2.2.14
HERSTELLUNG
DES
BINAEREN
PFLANZENVEKTORS
PVKH-35S-PAL
41
2.2.15
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
KALIUMAUFNAHME
42
3
ERGEBNISSE
43
3.1
LOKALISATION
DER
ATKCL
EXPRESSION
DURCH
GUS-STUDIEN
43
3.1.1
ISOLIERUNG
DES
ATKCL
PROMOTORS
44
3.1.2
HERSTELLUNG
DES
PATKCL-GUS
KONSTRUKTS
46
3.1.3
TRANSFORMATION
IN
ARABIDOPSIS
THALIANA
47
3.1.4
QUALITATIVE
GUS-ANALYSEN
47
3.1.5
IDENTIFIZIERUNG
HOMOZYGOTER
PFLANZEN
49
3.1.6
CHARAKTERISIERUNG
DER
HOMOZYGOTEN
PATKCL-GVS
PFLANZEN
50
3.1.6.1
SOUTHERN-BLOT
ANALYSEN
50
3.1.6.2
GUS-ANALYSEN
51
3.1.6.3
INDUKTIONSVERSUCHE
53
3.2
IMMUNFLUORESZENZMARKIERUNG
DES
ATKCL
56
3.2.1
HERSTELLUNG
EINES
POLYKLONALEN
ANTI-ATKCL
ANTIKOERPERS
56
3.2.2
LOKALISATION
DES
ATKCL
IN
DER
PLASMAMEMBRAN
58
3.3
HETEROLOGE
EXPRESSION
IN
XENOPUS
LAEVIS
OOZYTEN
59
3.4
HOMOLOGE
EXPRESSION
IN
ARABIDOPSIS
THALIANA
60
3.4.1
HERSTELLUNG
VON
SENSE/ANTISENSE
VEKTORKONSTRUKTEN
60
3.4.2
TRANSFORMATION
IN
ARABIDOPSIS
THALIANA
61
3.4.3
CHARAKTERISIERUNG
DER
HOMOZYGOTEN
ATKCISENSE-PFLANZEN
62
3.4.3.1
NORTHERN-BLOT
ANALYSEN
62
3.4.3.2
SOUTHERN-BLOT
ANALYSEN
62
3.4.3.3
WESTEM-BLOT
ANALYSEN
UND
IMMUNCYTOCHEMISCHE
UNTERSUCHUNGEN
64
3.4.4
CHARAKTERISIERUNG
DER
HOMOZYGOTEN
ATKCLANTISENSE-PFLANZEN
65
3.4.4.1
NORTHERN-BLOT
ANALYSEN
65
3.4.4.2
SOUTHERN-BLOT
ANALYSEN
66
III
3.4.4.3
CHARAKTERISIERUNG
DES
PHAENOTYPS
67
3.4.4.3.1
KULTURBEDINGUNGEN
67
3.4.4.3.2
GEWAECHSHAUSBEDINGUNGEN
67
3.4.4.3.3
STENGELQUERSCHNITTE
69
3.4.4.4
KALIUMAUFNAHMESTUDIEN
70
3.5
CHARAKTERISIERUNG
EINER
EN-INSERTIONSMUTANTE
74
3.5.1
LOKALISATION
DER
INSERTION
75
3.5.2
SEGREGATIONSANALYSEN
76
3.5.3
SOUTHERN-BLOT
ANALYSEN
77
3.5.3.1
BESTIMMUNG
DER
ANZAHL
DER
EN-INSERTIONEN
77
3.5.3.2
PHAENOTYPSEGREGATION
79
3.5.4
NORTHERN-BLOT
ANALYSEN
81
3.5.5
CHARAKTERISIERUNG
DER
PFLANZE
EN-NR.
7
82
4
DISKUSSION
85
4.1
LOKALISATION
DER
ATKCL
EXPRESSION
85
4.2
FUNKTION
DES
ATKCL
89
4.2.1
HETEROLOGE
EXPRESSION
IN
XENOPUS
LAEVIS
OOZYTEN
89
4.2.2
LOKALISATION
UND
REGULIERUNG
DER
ATKCL
EXPRESSION
91
4.2.3
HOMOLOGE
EXPRESSION
IN
ARABIDOPSIS
THALIANA
95
4.2.3.1
HOMOZYGOTE
ATKCL
SENSE-PFLANZEN
95
4.2.3.2
HOMOZYGOTE
ATKCLANTISENSE-PFLANZEN
95
4.3
EN-INSERTIONSMUTANTE
98
4.4
PERSPEKTIVEN
101
5
ZUSAMMENFASSUNG
103
6
ANHANG
105
7
LITERATUR
111
IV |
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| spelling | Reintanz, Birgit 1969- Verfasser (DE-588)120695189 aut Funktionelle Charakterisierung der Kaliumkanal-a-Untereinheit AtKC1 aus Arabidopsis thaliana vorgelegt von Birgit Reintanz Funktionelle Charakterisierung der Kaliumkanal-alpha-Untereinheit AtKC1 aus Arabidopsis thaliana 1997 VII, 120 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Köln, Univ., Diss., 1997 Untereinheit (DE-588)4335882-2 gnd rswk-swf Struktur-Aktivitäts-Beziehung (DE-588)4183784-8 gnd rswk-swf Kaliumkanal (DE-588)4258505-3 gnd rswk-swf Ackerschmalwand (DE-588)4141299-0 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Ackerschmalwand (DE-588)4141299-0 s Kaliumkanal (DE-588)4258505-3 s Untereinheit (DE-588)4335882-2 s Struktur-Aktivitäts-Beziehung (DE-588)4183784-8 s DE-604 DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=008401161&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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