Die Borna-Virus-Infektion bei der Katze: molekularbiologische Charakterisierung des felinen Borna-Virus
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1.
EINLEITUNG
.
7
2.
PROBLEMSTELLUNG
.
23
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
24
3.1.
GEWEBE
.
3.2.
BLUTPROBEN
.
3.3.
NACHWEIS
VON
BDV-SPEZIFISCHEN
ANTIKOERPERN
IM
PLASMA
.
3.3.1.
PLASMAGEWINNUNG
.
3.3.2.
IMMUNFLUORESZENZTEST
MIT
DOPPELMARKIERUNG
(IFT)
.
3.4.
NACHWEIS
VON
BDV-SPEZIFISCHER
RNA
IN
ZELLEN
UND
GEWEBEN
.
3.4.1.
BDV-INFIZIERTE
KONTROLLZELLEN
.
3.4.2.
ISOLIERUNG
VON
MONONUKLEAEREN
ZELLEN
DES
PERI
PHEREN
BLUTES
(PBMCS)
.
3.4.3.
RNA-EXTRAKTION
.
3.4.4.
RNA-GELELEKTROPHORESE
.
3.4.5.
REVERSE
TRANSKRIPTION
(RT)
.
3.4.6.
POLYMERASE
KETTENREAKTION
(PCR),
"NESTED"-PCR
.
3.4.7.
DNA-GELELEKTROPHORESE
.
3.5.
KLONIERUNG
BDV-SPEZIFISCHER
NUKLEINSAEURE
.
3.5.1.
ELUTION
.
3.5.2.
LIGATION
.
3.5.3.
PRAEPARATION
KOMPETENTER
E.
COLI
NACH
HANAHAN
.
3.5.4.
TRANSFORMATION
.
3.5.5.
MINI-PRAEPARATION
.
3.5.6.
RESTRIKTIONSENZYMANALYSE
(REA)
.
3.5.7.
GLYCEROLDAUERKULTUREN
.
3.5.8.
MIDI-PRAEPARATION
.
3.6.
DIDESOXY-DNA-SEQUENZIERUNG
NACH
SANGER
.
3.6.1.
DENATURIERUNG
VON
DOPPELSTRANG-TEMPLATES
.
3.6.2.
SEQUENZREAKTION
.
3.6.3.
POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
.
3.6.4.
ANALYSE
DER
SEQUENZDATEN
.
4.
ERGEBNISSE
.
4.1.
CHARAKTERISIERUNG
DES
FELINEN
BDV
.
4.1.1.
AMPLIFIKATION
VON
TEILABSCHNITTEN
DES
FELINEN
BDV-GENOMS
.
4.1.2.
KLONIERUNG
DER
AMPLIFIKATE
.
4.1.3.
STRUKTURELLE
ANALYSE
DES
FELINEN
BDV-GENOMS
.
4.2.
VERBREITUNG
VON
BDV-INFEKTIONEN
IN
KATZEN
POPULATIONEN
IN
DEUTSCHLAND
.
4.2.1.
UNTERSUCHUNG
VON
GEWEBEPROBEN
AUF
BDV-SPEZIFISCHE
RNA
.
4.2.2.
UNTERSUCHUNG
VON
VOLLBLUTPROBEN
AUF
BDV-SPEZIFISCHE
RNA
UND
ANTIKOERPER
.
4.2.2.1.
NACHWEIS
BDV-SPEZIFISCHER
ANTIKOERPER
.
4.2.2.2.
NACHWEIS
BDV-SPEZIFISCHER
RNA
.
4.3.
ENTWICKLUNG
EINER
METHODE
FUER
DIE
BDV-ROUTINEDIAGNOSTIK
.
5.
DISKUSSION
.
6.
ZUSAMMENFASSUNG/SUMMARY
.
7.
LITERATURVERZEICHNIS
.
$
$
SS
8
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S
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