Anreicherung, Expansion und Charakterisierung CD117-positiver hämatopoetischer Vorläuferzellen:
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1998
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|---|---|
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I.
EINLEITUNG
1
1.1
AUTOLOGE
KNOCHENMARKSTRANSPLANTATION
BEI
DER
AKUTEN
LYMPHATISCHEN
LEUKAEMIE
(ALL)
1
1.2
STEEL
LOCUS
UND
WHITE
SPOTTING
LOCUS
BEI
MAEUSEN
3
1.3
MOLEKULARE
GRUNDLAGEN
DER
SIGNALTRANSDUKTION
DURCH
DEN
C-KIT
REZEPTOR
4
1.4
SCF
-
LIGAND
DES
C-KIT-REZEPTORS
S
L.S
VORKOMMEN
UND
FUNKTION
DES
C-KIT-REZEPTORS
7
1.6
ROLLE
C-KIT-POSITIVER
ZELLEN
IN
DER
HAEMATOPOESE
9
1.6.1
MOEGLICHE
PERSPEKTIVEN
DER
NUTZUNG
C-KIT-POSITIVER
HAEMATOPOETISCHER
ZELLEN
9
1.6.2
CHARAKTERISIERUNG
C-KIT-POSITIVER
ZELLEN
MIT
DER
IMMUNFLUORESZENZZYTOMETRIE
10
1.6.3
CHARAKTERISIERUNG
DER
C-KIT-POSITIVEN
ZELLEN
DURCH
KOLONIEBILDUNG
12
1.6.4
FAEHIGKEIT
C-KIT-POSITIVER
ZELLEN
ZUR
HAEMATOPOETISCHEN
REKONSTITUTION
13
1.7
ROLLE
VON
C-KIT
UND
SCF
IN
DER
TUMORENTSTEHUNG
15
II.
AUFGABENSTELLUNG
17
IU.
MATERIAL
UND
METHODEN
19
3.1
ZELLEN
19
3.1.1
ZELLPRAEPARATION
19
3.1.2
ZELLSEPARATION
20
3.1.3
ZELLZAEHLUNG
20
3.2
MEDIEN
21
3.2.1
PBS
21
3.2.2
10%
NABELSCHNURPLASMA-MEDIUM
(10%
NSP-MEDIUM)
21
3.2.3
IMDM
(ISECOVE'S
MODIFIED
DULBECCO'S
MEDIUM)
22
3.2.4
METHYLCELLULOSE
22
3.2.5
1%-BSA-LOESUNG
22
II
3.3
ANREICHERUNG
DER
MNZ
NACH
C-KIT
23
3.4
EXPANSION
DER
NACH
C-KIT
ANGEREICHERTEN
ZELLEN
24
3.4.1
KULTURANSATZ
MIT
10%
NSP-MEDIUM
UND
WACHSTUMSFAKTOREN
24
3.4.2
INKUBATION
UND
WEITERE
ANALYSE
DER
EXPANDIERTEN
ZELLEN
27
3.4.3
BERECHNUNG
DES
EXPANSIONSFAKTORS
27
3.5
KOLONIEBILDUNGS-ASSAY
28
3.5.1
TESTANSATZ
UND
METHODE
28
3.5.2
AUSZAEHLUNG
DER
KOLONIEN
UND
AUSWERTUNG
30
3.5.2.1
BERECHNUNG
DES
ANTEILS
AN
VORLAEUFERZELLEN
30
3.S.2.2
BERECHNUNG
DER
GESAMT-KOLONIENANZAHL
PRO
KULTURANSATZ
30
3.5.2.3
BERECHNUNG
DES
EXPANSIONSFAKTORS
FUER
KOLONIEN
31
3.5.2.4
BERECHNUNG
DER
GESAMT-KOLONIENANZAHL
BEZOGEN
AUF
ALLE
ANGEREICHERTE
ZELLEN
31
3.6
ZYTOZENTRIFUGENPRAEPARATE
32
III
3.7
IMMUNFLUORESZENZ
UND
FLUSSZYTOMETRIE
33
3.7.1
FAERBUNG
DER
ANGEREICHERTEN
BZW.
EXPANDIERTEN
ZELLEN
MIT
MONOKLONALEN
ANTIKOERPERN
33
3.7.2
FUER
DIE
IMMUNFLUORESZENZ
VERWENDETE
ANTIKOERPERKOMBINATIONEN
36
3.7.3
MESSUNG
DER
IMMUNFLUORESZENZ
MIT
DEM
FACSCAN-FLUSSZYTOMETER
38
3.7.4
AUSWERTUNG
DER
FLUSSZYTOMETRIE-ERGEBNISSE
39
IV.ERGEBNISSE
42
4.1
ANREICHERUNG
C-KIT
POSITIVER
ZELLEN
42
4.2
EXPANSION
DER
C-KIT-ANGEREICHERTEN
ZELLEN
IN
ZELLKULTUR
48
4.2.1
EXPANSION
MIT
DEM
WACHSTUMSFAKTOREN-STANDARDANSATZ
48
4.2.2
VERGLEICH
DER
EXPANSION
VON
NABELSCHNURBLUT
MIT
VERSCHIEDENEN
WACHSTUMSFAKTORKOMBINATIONEN
50
4.3
EXPANSION
DER
KOLONIEBILDENDEN
ZELLEN
52
4.3.1
KOLONIEBILDUNG
DER
NACH
DEM
STANDARDANSATZ
EXPANDIERTEN
ZELLEN
MIT
SCF,
IL-3,
IL-6,
EPO
UND
GM-CSF
52
IV
4.3.2
VERGLEICH
DER
KOLONIEBILDUNG
UNTER
EINFLUSS
VERSCHIEDENER
WACHSTUMSFAKTORKOMBINATIONEN
NACH
KULTUREXPANSION
UNTER
STANDARDBEDINGUNGEN
57
4.3.3
VERGLEICH
DER
MIT
DEN
ALTERNATIVANSAETZEN
EXPANDIERTEN
NABELSCHNURBLUTZELLEN
BEZUEGLICH
DER
KOLONIEEXPANSION
60
4.4
ZELLMORPHOLOGIE
62
4.5
FACS-ANALYSE
DER
EXPANDIERTEN
ZELLEN
65
V.DISKUSSION
76
5.1
WIEVIELE
C-KIT-POSITIVE
ZELLEN
ERHAELT
MAN
PRO
ANREICHERUNG
UND
WELCHE
REINHEIT
BESITZEN
SIE?
76
5.2
UM
WELCHEN
FAKTOR
KONNTEN
DIE
ANGEREICHERTEN
ZELLEN
UNTER
VERSCHIEDENEN
WACHSTUMSFAKTORKOMBINATIONEN
EXPANDIERT
WERDEN?
WELCHE
EIGENSCHAFTEN
HABEN
DIE
EXPANDIERTEN
ZELLEN?
78
5.3
ANTEIL
DER
KOLONIENBILDENDEN
ZELLEN
UNTER
DEN
NACH
C-KIT
ANGEREICHERTEN
ZELLEN
UND
EINFLUSS
VERSCHIEDENER
WACHSTUMSFAKTORKOMBINATIONEN
MIT
UND
OHNE
SCF
AUF
DIE
KOLONIEBILDUNG
81
V
5.4
INWIEFERN
UNTERSCHEIDEN
SICH
DIE
IN
NABELSCHNURBLUT,
KNOCHENMARK
UND
LEUKAPHERESEBLUT
NACH
C-KIT
ANGEREICHERTEN
ZELLEN?
82
5.5
BEDEUTUNG
DER
ERGEBNISSE
FUER
DIE
PRAXIS
84
ZUSAMMENFASSUNG
86
LITERATUR
87
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
97
VI |
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