Morphologisch-funktionelle Studie zur Korrelation zellbiologischer Prozesse in embryonalen Zellzyklen am Beispiel eines Spiralierkeims (Ophryotrocha puerilis, Polychaeta):
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1997
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1
EINLEITUNG
_
1
2
MATERIAL
UND
METHODEN
_
7
2.1
TIERE
_
7
2.2
PRAEPARATION
UNREIFER
OOCYTEN
-
.
-
.
-
.
.8
2.3
ANALYSE
LEBENDER
KEIME
.
8
2.4
FLUORESZENZMIKROSKOPIE
.
8
2.4.1
ALDEHYD-FIXIERUNG
VON
KEIMEN
FUER
DIE
FLUORESZENZMIKROSKOPIE
.
9
2.4.2
ALKOHOL-FIXIERUNG
VON
KEIMEN
FUER
DIE
IMMUNCYTOLOGIE
.
9
2.4.3
MARKIERUNG
VON
CHROMATIN
MIT
DAPI
.
10
2.4.4
MARKIERUNG
VON
MIKROFILAMENTEN
MIT
PHALLOIDIN-TRITC
.
10
2.4.5
MARKIERUNG
VON
KEMHUELLEN
MIT
WGA-FITC
.
10
2.4.6
AUFBEREITUNG
VON
FIXIERTEN
KEIMEN
FUER
DIE
IMMUNCYTOLOGIE
.
10
2.4.7
BLOCKIERUNG
UNSPEZIFISCHER
BINDESTELLEN
.
11
2.4.8
MARKIERUNG
MIT
PRIMAEREN
ANTIKOERPERN
.
11
2.4.9
MARKIERUNG
MIT
SEKUNDAEREN
ANTIKOERPERN
.
12
2.4.10
KONTROLLEN
FUER
DIE
IMMUNCYTOLOGIE
.
12
2.4.11
BESTIMMUNG
DER
KEMPHASEN
LEBENDER
OPHRYOTROCHA-'K.EIME
MITTELS
DAPI
SCHNELLTEST
.
12
2.5
NACHWEIS
VON
PROPHASEHUELLEN
BEI
POLYCHAETEN,
GASTROPODEN,
ISOPODEN
UND
ECHINODERMEN
.
12
2.6
INHIBITOREN
.
13
2.6.1
HEMMUNG
DER
PROPHASEHUELLEN-BILDUNG
MIT
CYTOCHALASIN
B
BZW.
LATRUNCULIN
B
.
13
2.6.2
HEMMUNG
DER
SPINDELAPPARAT-BILDUNG
MIT
NOCODAZOL
.
15
2.6.3
HEMMUNG
DER
REPLIKATION
MIT
APHIDICOLIN
.
15
2.7
ETABLIERUNG
EINES
CYTOPLASMA-EXTRAKTIONSVERFAHRENS
ALS
BEDINGUNG
FUER
EINE
ULTRASTRUKTURELLE
DARSTELLUNG
VON
PROPHASEHUELLEN
.
17
2.7.1
ALLGEMEINES
EXTRAKTIONSVERFAHREN
.
17
2.7.2
PUFFER
UND
PH-WERT
.
18
2.7.3
SALZE
.
18
2.7.4
OSMOLARITAETEN
.
19
2.7.5
DETERGENZIEN
.
19
2.7.6
MIKROFILAMENT-STABILISATOREN
.
19
2.7.7
FIXIERUNG
.
20
2.8
ETABLIERUNG
EINES
ELEKRONENMIKROSKOPIE-VERFAHRENS
ZUR
DARSTELLUNG
VON
PROPHASEHUEUEN
.
21
2.8.1
PUFFERSYSTEME
.
21
2.8.2
EXTRAKTIONSVERFAHREN
.
22
2.8.3
MIKROFILAMENT-STABILISATOREN
.
22
2.8.4
KALIUMHEXACYANOFERRAT
(KAFFEFCN)]).
23
2.8.5
FIXIERUNG
FUER
DIE
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
.
23
2.8.6
KONTRASTIERUNG
.
23
2.8.7
DEHYDRIERUNG,
EINBETTUNG,
SCHNEIDEN
UND
ANALYSE
DER
KEIME
.
24
2.8.8
TABELLARISCHE
AUFZAEHLUNG
DER
ELEKTRONENMIKROSKOPIE-VERFAEHREN
AUS
DEM
ABBILDUNGS-TEIL
.
26
3
ERGEBNISSE
.
28
3.1
NACHWEIS
VON
PROPHASEHUEUEN
IN
SAEMTLICHEN
BLASTOMEREN
VON
OPHRYOTROCHA
PUERILIS
KEIMEN
FUER
DIE
DAUER
DER
FURCHUNG
.
28
3.2
VORKOMMEN
VON
PROPHASEHUEUEN
BEI
FRUEHEN
SPIRALIER-,
ARTHROPODEN
UND
ECHINODERMEN-KEIMEN
.
30
3.3
ZEITLICHE
UND
RAEUMUCHE
KORRELATION
DYNAMISCHER
PROZESSE
AN
KERNHUELLE,
PROPHASEHUELLE
UND
SPINDELAPPARAT
WAEHREND
DER
PROPHASE
.
32
3.3.1
DYNAMISCHE
MIKROTUBULI-MUSTER
IM
VERLAUF
EINES
ZELLZYKLUS
NACH
LEBENDBEOBACHTUNG
VON
ZYGOTEN
UND
2-ZELLSTADIEN
IM
DIFFERENZIALINTERFERENZKONTRAST
.
32
3.3.2
PROPHASEHUEUEN
SIND
RAEUMLICH
MIT
KEMHTTLLEN
UND
SPINDELAPPARATEN
ASSOZIIERT,
IHRE
ENTSTEHUNG
MIT
DER
BILDUNG
VON
SPINDELAPPARATEN
UND
IHR
ZERFALL
MIT
DEM
KEMZUSAMMENBRUCH
ZEITLICH
KORRELIERT
.
32
3.4
NACHWEIS
F-AKTIN-ASSOZIIERENDER
PROTEINE
ZUR
BESTIMMUNG
DER
STRUKTUR
UND
FUNKTION
VON
PROPHASEHUEUEN
.34
3.5
HEMMUNG
DER
PROPHASEHUELLEN-BUDUNG
ZUR
ANALYSE
IHRER
FUNKTION
FUER
ZELLZYKLUS,
FURCHUNG
UND
EMBRYOGENESE
.
41
3.5.1
VOLLSTAENDIGE
HEMMUNG
DER
PROPHASEHUEUEN-BILDUNG
.
41
3.5.2
WIRKUNG
EINER
GEHEMMTEN
PROPHASEHUELLEN-BILDUNG
AUF
ZELLZYKLUS-EREIGNISSE
.
42
3.5.3
WIRKUNG
EINER
GEHEMMTEN
PROPHASEHUELLEN-BILDUNG
AUF
FURCHUNGSMUSTER
UND
EMBRYOGENESE
.
42
3.5.4
REVERSIBLE
HEMMUNG
DER
CYTOKINESE
UND
INDUKTION
VON
FURCHEN
.
44
3.6
PROPHASEHUEUEN-NACHWEIS
IN
PROPHASE
I
DER
MEIOSE
UNREIFER
OOCYTEN
.
48
3.7
BEDINGUNGEN
FUER
DIE
BUDUNG
VON
PROPHASEHUEUEN
.
49
3.7.1
WIRKUNG
EINER
GEHEMMTEN
SPINDELAPPARAT-BILDUNG
AUF
BILDUNG
UND
ZERFALL
VON
PROPHASEHUELLEN
.
49
3.7.2
WIRKUNG
EINER
GEHEMMTEN
REPLIKATION
AUF
BILDUNG
UND
ZERFALL
VON
PROPHASEHUELLEN
50
3.7.3
DIREKTE
UND
INDIREKTE
WIRKUNG
VON
APHIDICOLIN
AUF
DIE
MITOSE
.
50
3.7.4
WIRKUNG
EINER
GEHEMMTEN
REPLIKATION
AUF
DEN
FOLGENDEN
ZELLZYKLUS
.
51
3.8
ETABLIERUNG
EINES
CYTOPLASMA-EXTRAKTIONSVERFAHRENS
ALS
VORAUSSETZUNG
ZUR
ULTRASTRUKTURELLEN
DARSTELLUNG
VON
PROPHASEHUELLEN
.53
3.8.1
EXTRAKTIONSMEDIUM
.
53
3.8.2
PUFFER
UND
PH-WERT
.
53
3.8.3
SALZE
.
54
3.8.4
DETERGENZIEN
.
54
3.8.5
OSMOLARITAET
.
55
3.8.6
MIKROFILAMENT-STABILISATOREN
.
56
3.8.7
ALDEHYD-FIXIERUNG
EXTRAHIERTER
KEIME
.
56
3.8.8
ZUSAMMENFASSUNG
DER
ERGEBNISSE
AUS
DEN
CYTOPLASMA-EXTRAKTIONSVERSUCHEN
.
57
3.9
ETABLIERUNG
EINES
ELEKTRONENMIKROSOPIE-VERFAHRENS
ZUR
ULTRASTRUKTURELLEN
DARSTELLUNG
VON
PROPHASEHUELLEN
.
58
3.9.1
PUFFER
.
58
3.9.2
OSMOLARITAET
.
59
3.9.3
CYTOPLASMA-EXTRAKTION
UND
DETERGENZIEN
.
59
3.9.4
MIKROFILAMENT-STABILISATOREN
.
60
3.9.5
FIXIERVERFAHREN
.
60
3.9.6
KALIUMHEXACYANOFERRAT
(KJ[FE(CN)6])
.
61
3.9.7
BLOCK-KONTRASTIERUNG
.
61
3.9.8
ZUSAMMENFASSUNG
DER
ERGEBNISSE
AUS
DEN
FIXIERVERSUCHEN
FUER
DIE
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
.
62
3.10
NACHWEIS
VON
PROPHASEHUELLEN
IM
TRANSMISSIONSELEKTRONENMIKROSKOP
.
65
3.10.1
ULTRASTRUKTUR
DES
MIKROFILAMENTHALTIGEN
ZELLCORTEX
NACH
VERSCHIEDENEN
TRANSMISSIONSELEKTRONENMIKROSKOPIE-VERFAHREN
ALS
ANHALTSPUNKT
FUER
DIE
MORPHOLOGIE
CYTOPLASMATISCHER
MIKROFILAMENTE
.
65
3.10.2
NACHWEIS
VON
PROPHASEHUELLEN
IN
EXTRAHIERTEN
KEIMEN
.
65
3.10.3
KONTROLLEN
MIT
EXTRAHIERTEN
KEIMEN
.
67
3.10.4
NACHWEIS
VON
PROPHASEHUELLEN
IN
NICHTEXTRAHIERTEN
KEIMEN
.
67
3.10.5
KONTROLLEN
MIT
NICHTEXTRAHIERTEN
KEIMEN
IN
INTERPHASE
.
68
3.11
WEITERE
TRANSMISSIONSELEKTRONENMIKROSKOPIE-ERGEBNISSE.71
3.11.1
MORPHOLOGIE
DES
OOCYTEN-CORTEX
VOR
UND
NACH
DER
BEFRUCHTUNG
.
71
3.11.2
ULTRASTRUKTUR
EXTRAHIERTER
POLKOERPER
.
71
4
DISKUSSION
73
4.1
FURCHUNGSMUSTER
VON
OPHRYOTROCHA
PUERI/IS-KEIMEN
BIS
ZUM
43-ZELLSTADIUM
.
73
4.2
PROPHASEHUELLEN
.
73
4.2.1
AUFTRETEN
VON
PROPHASEHUELLEN
.
73
4.2.2
BILDUNG
UND
LOKALISATION
VON
PROPHASEHUELLEN
.
76
4.2.3
ZERFALL
VON
PROPHASEHUELLEN
.
77
4.2.4
BEDEUTUNG
VON
PROPHASEHUELLEN
FUER
ZELL
UND
ENTWICKLUNGSEREIGNISSE
.
78
4.2.5
URSACHE
EINER
PROPHASEHUELLEN-BILDUNG
.
80
4.2.6
MODELL
ZUM
MECHANISMUS
DER
PROPHASEHUELLEN-ENTSTEHUNG
.
81
4.3
KONTROLLPUNKTE
IN
EMBRYONALEN
ZELLZYKLEN
VON
OPHRYOTROCHA
PUERILIS
-BLASTOMEREN84
4.4
MECHANISMEN
DER
FURCHUNG
.
87
4.4.1
INDUKTION
VON
FURCHEN
.
87
4.4.2
KONTRAKTION
VON
FURCHEN
.
88
4.4.3
MODELL
ZUM
MECHANISMUS
DES
UNTERSCHIEDLICHEN
KONTRAKTIONSVERLAUFS
VON
CYTOKINESE
UND
POLLAPPEN-FURCHE
BEI
SPIRALIETN
.
88
4.5
BEDEUTUNG
DES
MIKROFILAMENTHALTIGEN
CORTEX
FUER
MITOSEN
IN
OPHRYOTROCHA
PUERILIS
BLASTOMEREN
.
89
4.6
ALPHA-SPECTRIN
IN
DER
FRUEHENTWICKLUNG
VON
OPHRYOTROCHA
PUERILIS-KEIMEN
.
91
4.7
WGA-BINDENDE
MEMBRANDOMAENEN
IM
CYTOPLASMA
VON
OPHRYOTROCHA
PUERILIS
BLASTOMEREN
.
92
4.8
VERLAUF
DER
METAPHASE
I
IN
OPHRYOTROCHA
PUERILIS-OOCYTEN
.
93
4.9
ETABLIERUNG
EINER
METHODE
ZUR
ULTRASTRUKTURELLEN
DARSTELLUNG
VON
PROPHASEHUELLEN
IN
OPHRYOTROCHA
PUERIZIS-BLASTOMEREN
.
93
4.10
BEFRUCHTUNGSBEDINGTE
EREIGNISSE
AN
DER
OOCYTENPERIPHERIE
BEI
OPHRYOTROCHA
PUERILIS
.95
5
ZUSAMMENFASSUNG
.
97
5.1
PROPHASEHUELLEN
.
97
5.2
WEITERE
ERGEBNISSE
.
98
6
LITERATURVERZEICHNIS
.
99 |
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