Isolierung und Charakterisierung eines Basalmembran-assoziierten Heparansulfat-Proteoglykans aus der humanen Niere:
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1998
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
I.
EINLEITUNG
1
1.
PROTEOGLYKANE
1
1.1.
UEBERBLICK
1
1.2.
GLYKOSAMINOGLYKANE
1
1.2.1.
HYALURONAN
3
1.2.2.
HEPARANSULFAT
UND
HEPARIN
3
1.2.3.
CHONDROITINSULFAT
UND
DERMATANSULFAT
6
1.2.4.
KERATANSULFAT
6
1.3.
CORE-PROTEINE
9
2.
PROTEOGLYKANE
IN
DER
NIERE
15
2.1.
MORPHOLOGIE
UND
FUNKTION
DER
NIERE
15
2.2.
HISTOLOGISCHER
UND
ULTRASTRUKTURELLER
AUFBAU
DES
GLOMERULUMS
17
2.3.
FILTRATIONSEIGENSCHAFTEN
DES
GLOMERULUMS
21
2.4.
UEBERSICHT
UEBER
DIE
PROTEOGLYKANE
IN
DER
HUMANEN
NIERE
22
2.5.
BEDEUTUNG
DES
HEPARANSULFAT-PROTEOGLYKANS
FUER
DIE
FILTEREIGEN
SCHAFTEN
DES
GLOMERULUMS
24
2.6.
PATHOBIOCHEMISCHE
VERAENDERUNGEN
IN
DER
ULTRASTRUKTUR
DER
GLOMERULAEREN
BASALMEMBRAN
BEI
VERSCHIEDENEN
NEPHROPATHIEN
26
II.
ZIEL
DER
VORLIEGENDEN
ARBEIT
28
HL
MATERIAL
UND
METHODEN
29
3.1.
CHEMIKALIEN
29
3.1.1.
ZUSAMMENSETZUNG
DER
PUFFER
UND
MEDIEN
30
3.2.
ANALYTISCHE
METHODEN
UND
GERAETE
31
3.3.
METHODEN
32
3.3.1.
NIEREN-PRAEPARATION
32
3.3.2.
EXTRAKTION
DER
PROTEOGLYKANE
32
3.3.3.
CHROMATOGRAPHISCHE
TRENNUNG
DER
PROTEOGLYKANE
DER
NIERE
33
3.3.3.I.
GELCHROMATOGRAPHIE
AN
SEPHADEX
G-25
33
3.3.3.2.
ANIONEN-AUSTAUSCHER-CHROMATOGRAPHIE
AN
SEPHAROSE
Q
FAST
FLOW
33
33.3.3.
CHROMATOGRAPHIE
AN
HYDROXYLAPATIT
BIO-GEL
HTP
34
33.3.4.
GELCHROMATOGRAPHIE
AN
TSK
G
4000
35
3.3.4.
BIOCHEMISCHE
UND
IMMUNCHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DER
PROTEOGLYKANE
35
3.3.4.I.
NACHWEIS
VON
PROTEOGLYKANEN
DURCH
REAKTION
MIT
DIMETHYL
METHYLENBLAU
35
3.3.4.2.
DERIVATISIERUNG
DER
PROTEOGLYKANE
MIT
BIOTIN
35
3.3.4.3.
ENZYMATISCHER
ABBAU
VON
GLYKOSAMINOGLYKANEN
VOR
UND
NACH
DERIVATISIERUNG
DER
CORE-PROTEINE
MIT
BIOTIN
36
3.3.4.4.
SDS-POLYACRYLAMID-GEL-ELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
36
3.3.4.4.I.
SILBERFAERBUNG
VON
POLYACRYLAMID-GELEN
37
3.3.4.4.2.
DIFFUSIONS-BLOT
NACH
SDS-PAGE
38
3.3.4.4.3.
WESTERN-BLOT
NACH
SDS-PAGE
39
3.3.4.4.4.
NACHWEIS
BIOTIN-MARKIERTER
PROTEINE
BZW.
PROTEOGLYKANE
MIT
PEROXIDASE-KONJUGIERTEM
AVIDIN
39
3.3.4.4.5.
IMMUNCHEMISCHER
NACHWEIS
VON
PROTEOGLYKANEN
40
3.3.4.5.
ENZYM-IMMUNO-ASSAY
41
3.3.4.5.I.
DERIVATISIERUNG
VON
ANTIKOERPERN
MIT
BIOTIN
41
3.3.4.5.2.
NACHWEIS
VON
PROTEOGLYKANEN
IM
SLOT-BLOT-ENZYM-IMMUNO-ASSAY
42
IV.
ERGEBNISSE
4.1.
ISOLIERUNG
UND
REINIGUNG
DER
PROTEOGLYKANE
43
4.1.1.
EXTRAKTION
DER
PROTEOGLYKANE
43
4.1.2.
CHROMATOGRAPHISCHE
TRENNUNG
DER
PROTEOGLYKANE
DES
NIEREN-EXTRAKTES
43
4.1.2.1.
ANIONENAUSTAUSCHER-CHROMATOGRAPHIE
AN
SEPHAROSE
Q
FF
43
4.1.2.2.
HYDROXYLAPATIT-CHROMATOGRAPHIE
46
4.2.
CHARAKTERISIERUNG
DES
HEPARANSULFAT-PROTEOGLYKANS
47
4.2.1.
GELCHROMATOGRAPHIE
AN
TS
K
G
4000
47
4.2.2.
BESTIMMUNG
DER
RELATIVEN
MOLEKULARGEWICHTE
DES
CORE-PROTEINS
UND
DER
GLYKOSAMINOGLYKANKETTEN
DES
HEPARANSULFAT-PROTEOGLYKANS
DURCH
SDS-PAGE
52
4.2.3.
IMMUNCHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DES
GEREINIGTEN
HEPARANSULFAT-PROTEOGLYKANS
52
4.2.4.
AMINOSAEURE
UND
HEXOSAMIN-ANALYSE
DES
GEREINIGTEN
HEPARANSULFAT-PROTEOGLYKANS
55
4.2.5.
SDS-PAGE
UND
WESTERNBLOT
DER
AUS
NIERE
UND
URIN
ISOLIERTEN
KLEINEN
BASALMEMBRAN-ASSOZIIERTEN
HEPARANSULFAT-PROTEOGLYKANE
56
V.
DISKUSSION
58
5.1.
BIOCHEMISCHE
UND
IMMUNCHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DES
KLEINEN,
BASALMEMBRAN-ASSOZIIERTEN
HEPARANSULFAT-PROTEOGLYKANS
AUS
DER
HUMANEN
NIERE
59
5.1.1.
ISOLIERUNG
UND
REINIGUNG
DES
KLEINEN,
BASALMEMBRAN-ASSOZIIERTEN
HEPARANSULFAT-PROTEOGLYKANS
AUS
DER
HUMANEN
NIERE
59
5.1.2.
BIOCHEMISCHE
UND
IMMUNCHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DES
KLEINEN,
BASALMEMBRAN-ASSOZIIERTEN
HEPARANSULFAT-PROTEOGLYKANS
AUS
DER
HUMANEN
NIERE
60
VI.
ZUSAMMENFASSUNG
63
VII.
LITERATURVERZEICHNIS
65 |
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