Untersuchungen zur Rolle Eosinophilen-chemotaktischer Polypeptide bei chronisch polypöser Sinusitis:
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Aachen
Shaker
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Danksagung
Abkürzungsverzeichnis
1 Einleitung 1
1.1 Zelluläres Infiltrat bei der chronisch polypdsen Sinusitis 1
1.2 Chemotaxis von Eosinophilen 2
1.3 Eosinophilen chemotaktische Faktoren 3
1.4 Der Eosinophile 4
1.5 Chronisch polypöse Sinusitis 6
1.6 Fragestellung und Ziele der Arbeit 7
2 Methoden 8
2.1 Reagenzien und Materialien 8
2.2 Isolierung Eo chemotaktischer Mediatoren aus Extrakten von
Nasenpolypen 8
2.2.1 Patienten 8
2.2.2 Isolierungsmethoden 8
2.2.3 Affinitätstrennung heparinbindender Proteine 9
2.3 Hochleistungs Flüssigkeits Chromatographie (HPLC) von
Peptiden 9
2.4 Boyden Kammer Verfahren 10
2.5 Isolierung eosinophiler Granulozyten 11
2.6 Zellkulturen 12
2.6.1 Kultivierung 12
2.6.2 Stimulation der Zellkulturen 13
2.7 Northern Blot Experimente 14
2.8 RANTES mRNA Detektion 15
2.8.1 Herstellung der RANTES cDNA Sonde mittels PCR 15
2.8.2 Überprüfung der Markierungseffiziens der cDNA Sonde 16
2.8.3 Hybridisierung und Chemilumineszenz 17
2.9 RNA Isolierung 18
2.9.1 Isolierung der RNA aus Zellkulturen 18
2.9.2 In vivo Präparation von RNA aus Gewebeproben 18
2.10 Messung des RANTES Gehalts mittels ELISA 19
2.10.1 Gewebe 19
2.10.2 Überstand der Zellkulturen 19
2.10.3 RANTES Doppelsandwich ELISA 19
2.11 Statistische Auswertung 20
3 Ergebnisse 21
3.1 Untersuchung Eo chemotaktischer Polypetide aus Nasenpolypen 21
3.1.1 Isolierung der Proteinfraktionen 21
3.1.2 Charakterisierung Eo chemotaktischer Polypeptide 24
3.2 Untersuchung der RANTES Genexpression in RNA Extrakten
aus Nasenpolypen und primären Zellkulturen respiratorischer
Schleimhautzellen 29
3.2.1 Isolierung von RNA 29
3.2.2 RANTES Genexpression 31
3.3 Untersuchungen zur Sekretion des RANTES Proteins 45
3.3.1 RANTES Protein Gehalt in Gewebe 45
3.3.2 RANTES Protein Gehalt in Überständen kultivierter
Fibroblasten aus den oberen Luftwegen 45
4 Diskussion 52
4.1 Kritik der Methodik 53
4.2 Funktionen der Eosinophilen 55
4.3 Eosinophilen aktivierende Mediatoren bei chronisch polypöser
Sinusitis 5g
4.4 Eo Chemotaxine in Nasenpolypen 59
4.5 Die pathogenetische Bedeutung von RANTES bei der chronisch
polypösen Sinusitis 64
4.6 Therapieansätze und Ausblick 66
5 Zusammenfassung (,%
6 Literatur 71
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