Vollständige Primärstruktur des humanen Kollagen-Typ-XIV (Undulin) und funktionelle Charakterisierung seines Promotors:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1998
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| Beschreibung: | Berlin, Freie Univ., Diss., 1998 |
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
.
1
1.1
BEDEUTUNG
DER
EXTRAZELLULAEREN
MATRIX.
1
14
KOLLAGENE.L
1.2.1
FIBRILLENBILDENDE
KOLLAGENE
.
2
1.2.2
NETZWERKBILDENDE
KOLLAGENE
.
4
1.2.3
DAS
PERLENKETTENARTIGE
MIKROFILAMENTE
BILDENDE
KOLLAGEN
TYP
VI
.
5
1
2.4
ANKERFIBRILLEN:
KOLLAGEN
TYP
VII.
.
5
1.2.5
TRANSMEMBRANARE
KOLLAGENE:
TYPXIII
UNDXVII.
.
6
1.2.6
MULTIPLEXINE:
KOLLAGENTYPXVUNDXVIII
.
6
1.2.
7
FIBRILLENASSOZIIERTE
KOLLAGENE
MIT
UNTERBROCHENER
TRIPELHELIX
(FACIT
KOLLAGENE)
.
7
1.3
UNDULIN
_
13
1.4
REGULATION
DER
GENTRANSKRIPTION
UND
-EXPRESSION
.
.
14
1.4
1
TRANSKRIPTION
DURCH
DIE
RNA-POLYMERASE
II.
.
17
1
4.2
TRANSKRIPTIONSREGULATION
DURCH
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
.
19
1.4.3
TRANSKRIPTIONELLE
REGULATION
VON
UNDULIN
.
21
1.5
AUFGABENSTELLUNG
-
.
-------------------------
.
-------------------------------
.
------
22
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
23
2.1
MATERIAL
23
2.1.1
GERAETE
.
23
212
ENZYME
.
23
2.1.3
DNA-BANKEN
.
24
2
1.4
CHEMIKALIEN
UND
CHEMIKALIENSYSTEME
.
24
2.1.5
PLASMIDE
.
25
2.1
6
BAKTERIENSTAEMME
.
25
2.1.7
ZELLINIEN
.
26
2.1.8
ZELLKULTURMEDIEN
UND
ZUSAETZE
.
26
2.1.9
PLASTIKARTIKEL.
.
26
2.1.10
LOESUNGEN
UND
PUFFER
.
27
2.1.11
OLIGONUKLEOTIDE
.
27
2.1.12
DATENBANK-ZUGRIFISNUMMERN.
.
31
2.1.13
RNA
UND
DNA-STANDARDS
.31
2.1.14
SONSTIGES
MATERIAL
.
31
2.2
METHODEN
32
2
2.1
RNA-PRAEPARATION
AUS
GEWEBE
ODER
KULTIVIERTEN
ZELLEN
.
32
2.2
2
PRAPARATION
VON
MRNA
.
33
22
3
REVERSE
TRANSKRIPTION
VON
RNA
(CDNA-SYNTHESE)
.
34
2.2
4
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(PPLYMERASE-CHAIN-REACTION,
PCR)
.
35
22
5
"GENE-WALKING"
MIT
DER
PCR
.
40
2.2.6
DNA-SEQUENZIERUNG
.
40
2
2
7
IDENTIFIZIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
IN
DNA-BANKEN
UND
IHRE
ISOLIERUNG
.
43
2
2
8
PHAGEN-DNA-PRAEPARATION
.
45
2.2.9
PLASMIDPRAPARATIONEN
.
46
2.2.9
NUKLEINSAEUREHYBRIDISIERUNGEN.
.
46
2.2.10
ZELLKULTUR
.
49
2.2
11
DARSTELLUNG
DER
REPORTERGENKONSTRUKTE
.
50
2
2.12
TRANSIENTE
TRANSFEKTION
EUKARYOTISCHER
ZELLEN
.
52
2.2.13
REPORTERGENAKTIVITAETSMESSUNGEN
.
53
2.2
14
"GELSHIFT"-EXPERIMENTE
(EMSA)
.
53
2.2.15
KEMPROTEINPRAEPARATION
.
54
2.2.16
EDV
.
55
3.
ERGEBNISSE
.
56
3.1
VOLLSTAENDIGE
PRIMAERSTRUKTUR
DES
HUMANEN
KOLLAGEN
TYP
XIV
(UNDULIN)
.
56
3.1
1
VERVOLLSTAENDIGUNG
DER
PROTEINKODIERENDEN
CDNA-SEQUENZ
AM
5
'-TERMINUS
.
56
3
1.2
AMINOTERMINALE
PRIMAERSTRUKTUR VON
UNDULIN
.
59
3.1.3
ERWEITERTE
5
'
-UNTRANSLATIERTE
REGION
(5'UTR)
VON
UNDULIN
.
61
3.1.4
TRANSKRIPTIONSSTART
.
62
3.1.5
CDNA-ERWEITERUNG
AM
3
'-TERMINUS
DURCH
RT-PCR
MIT
DEGENERIERTEM
3
'-PRIMER
.
63
3
1.6
ISOLIERUNG
VON
3
'-TERMINALER
CDNA-SEQUENZ
AUS
EINER
CDNA-BANK
.
65
3.1.
7
NUTZUNG
EINES
ALTERNATIVEN
POLYADENYLIERUNGSSIGNALS
.
71
318
ALTERNATIVES
SPLEISSEN
AM
C-TERMINUS
.
71
3
1
9
AUTHENTIZITAET
DER
BEIDEN
UNDULIN/KOLLAGEN
TYP
XIV
CDNA-SEQUENZEN
.
74
3.1.10
VERGLEICH
DER
PRIMAERSTRUKTUREN VON
UNDULIN
UND
KOLLAGEN
TYP
XIV.
.
76
3.2
DER
HUMANE
KOLLAGEN
TYP
XIV-PROMOTOR.
M
.
.
.
81
3
21
SOUTHERNBLOT
MIT
HUMANGENOMISCHER
DNA
UND
EINER
5
'
UTR-SPEZIFISCHEN
SONDE
.
81
3.2.2
ISOLIERUNG
UND
PRIMAERSTRUKTURELLE
CHARAKTERISIERUNG
DES
5
'-FLANKIERENDEN
BEREICHES
DES
KOLLAGEN
TYP
XIV-GENS
82
3.2
3
FUNKTIONELLER
NACHWEIS
DES
KOLLAGEN
TYP
XLV-PROMOTORS
.
90
3.2.4
SEQUENZANALYSE
.
92
3.2.5
BEDEUTUNG
DER
POTENTIELLEN
SPL-BINDUNGSSTEILENFOER
DIE
TRANSKRIPTION
.
94
3.2.6
DIE
TATA-BOX
.
101
3.2.7
"ENHANCER
"
.
103
3.2.8
ZELLTYPSPEZIFITAET
DES
HUMANEN
KOLLAGEN
TYP
XLV-PROMOTORS
.
104
4.
DISKUSSION
.
106
4.1
VOLLSTAENDIGE
PRIMFIRSTRUKTUR
DES
HUMANEN
KOLLAGEN
TYP
XIV
(UNDULIN)
.
106
4.1.1
AUTHENTIZITAET
DER
CDNA-SEQUENZEN
.
106
41.2
N-TERMINALE
PRIMAERSTRUKTUR
.
108
4.1.3
C-TERMINALE
PRIMAERSTRUKTUR
.
112
4.2
TRANSKRIPTIONELLE
REGULATION
DER
KOLLAGEN
TYP
XIV-EXPRESSLON.
115
4.2.1
ISOLIERUNG
DES
KOLLAGEN
TYP
XLV-PROMOTORS
.
115
4
2.2
BASALE
PROMOTORELEMENTE
UND
TRANSKRIPTIONSSTART
.
115
42
3
REPORTERGENAKTIVITAT
ALS
INDIREKTES
MASS
FIIR
DIE
TRANSKRIPTIONSAKTIVITAET
EINES
PROMOTORS
.
117
4.2.4
FUNKTIONELLE
CHARAKTERISIERUNG
DES
HUMANEN
KOLLAGEN
TYP
XLV-PROMOTORS.
.
118
4.2.5
VERGLEICH
MIT
DEN
PROMOTOREN
ANDERER
KOLLAGEN-GENE
.
122
4.2.6
PROMOTORMODELL.
.
124
4
2.7
ZELLTYPSPEZIFITAET.
.
125
4.3
POTENTIELLE
ZIELE
ZUKUENFTIGER
UNTERSUCHUNGEN
.
126
5.
ZUSAMMENFASSUNG.
129
6.
ABKUERZUNGEN
.
131
7.
LITERATURVERZEICHNIS
.
133 |
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