Etablierung transgener Tiermodelle für Untersuchungen zur normalen Funktion des PrP-Proteins und zur Natur der Speziesbarriere bei transmissiblen spongiformen Enzephalopathien:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Göttingen
Cuvillier
1998
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| Ausgabe: | 1. Aufl. |
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Zugl.: Göttingen, Univ., Diss., 1998 |
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INHALTSVERZEICHNIS
I
INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
ABKUERZUNGEN
IV
1.
EINLEITUNG
1
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
9
2.1.
ORGANISMEN
UND
VEKTOREN
9
2.2.
ZELLANZUCHT
11
2.2.1.
NAEHRMEDIEN
UND
MEDIENZUSAETZE
11
2.2.2.
STANUNHALTUNG
VON
E.
CO/I-KULTUREN
UND
PHAGEN
12
2.2.3.
ANZUCHTBEDINGUNGEN
12
2.2.4.
ANZUCHT
VON
X-PHAGEN
AUF
BAKTERIENZELLRASEN
13
2.3.
STANDARDTECHNIKEN
FUER
DAS
ARBEITEN
MIT
DNA
14
2.3.1.
BEHANDLUNG
VON
GERAETEN
UND
LOESUNGEN
14
2.3.2.
REINIGUNG
UND
KONZENTRIERUNG
VON
DNA
14
2.3.2.1.
PHENOL-CHLOROFORM-EXTRAKTION
14
2.3.2.2.
FAELLUNG
VON
DNA
14
2.3.2.3.
AUFTEINIGUNG
VON
DNA
FUER
DIE
MIKROINJEKTION
15
2.3.3.
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
15
2.3.4.
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
15
2.3.5.
ISOLIERUNG
VON
DNA
16
2.3.5.1.
ISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN AUS
AGAROSEGELEN
16
2.3.5.2.
PLASMID-MINI-PRAEPARATION
AUS
E.
COLI
17
2.3.5.3.
PLASMID-PRAEPARATION
AUS
E.
COLI
17
2.3.5.4.
COSMID-PRAEPARATION
AUS
E.
COLI
18
2.3.5.5.
PRAEPARATION
VON
X-DNA
AUS
FLUESSIGKULTUREN
19
2.3.5.6.
ISOLIERUNG
CHROMOSOMALER
DNA
AUS
MAUSSCHWANZ
20
BIOPSIEN
N
I
NHALTSVERZEICHNIS
2.3.5.7.
ISOLIERUNG
CHROMOSOMALER
DNA
AUS
EMBRYONALEN
21
STAMMZELLEN
2.4.
ENZYMATISCHE
MODIFIKATION
VON
DNA
21
2.4.1.
SPALTUNG
VON
DNA
DURCH
RESTRIKTIONSENDONUKLEASEN
21
2.4.2.
HERSTELLUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
MIT
STUMPFEN
ENDEN
22
2.4.2.1.
AUFFULLEN
VON
5'-UEBERHAENGEN
MIT
'KLENOW'-FRAGMENT
22
2.4.2.2.
ABBAU
VON
EINZELSTRANG-UEBERHAENGEN
MIT
SL-NUKLEASE
23
2.4.3.
DEPHOSPHORYLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
23
2.4.4.
LIGATION
VON
DNA-FRAGMENTEN
24
2.4.5.
PCR
24
2.5.
DNA-SEQUENZIERUNG
25
2.5.1.
'CYCLE-SEQUENCING'-REAKTIONEN
25
2.5.2.
SEQUENZIERGELE
UND
ELEKTROPHORESEBEDINGUNGEN
26
2.5.3.
ANALYSE
VON
SEQUENZDATEN
27
2.6.
TRANSFORMATION
28
2.6.1.
TRANSFORMATION
VON
.
COLI
MIT
PLASMID-DNA
28
2.6.2.
TRANSFORMATION
VON
E.
COLI
MIT
COSMID-DNA
28
2.6.2.1.
ZN-VIRRO-VERPACKUNGSREAKTION
28
2.6.2.2.
TRANSFORMATION
29
2.7.
DNA-HYBRIDISIERUNG
29
2.7.1.
UEBERTRAGUNG
VON
DNA
AUF
NYLON-MEMBRANEN
29
2.7.1.1.
'SOUTHERN
BLOTS'
29
2.7.1.2.
'COLONY-'
UND
'PLAQUE-LIFTS'
30
2.7.2.
MARKIERUNG
VON
DNA-SONDEN
MIT
DIGOXIGENIN-LL-DUTP
31
2.7.2.1.
'RANDOM
PRIME
LABELING'
31
2.7.2.2.
'PCR-LABELING'
32
2.7.2.3.
UEBERPRUEFEN
DER
MARKIERUNGSEFFIZIENZ
33
2.7.3.
HYBRIDISIERUNG
33
2.7.4.
DETEKTION
34
2.7.4.1.
CHEMILUMINISZENZ-DETEKTION
34
I
NHALTSVERZEICHNIS
IN
2.7.4.2.
COLORIMETRISCHE
DETEKTION
MIT
NBT/BCIP
35
2.7.5.
WIEDERVERWENDUNG
VON
MEMBRANEN
35
2.8.
'WESTERN
BLOTS'
36
2.8.1.
PRAEPARATION
VON
GEWEBEHOMOGENATEN
36
2.8.2.
PROTEINKONZENTRATIONSBESTIMMUNG
36
2.8.3.
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
37
2.8.4.
UEBERTRAGUNG
VON
PROTEINEN
AUF
PVDF-MEMBRANEN
38
2.8.5.
IMMUNOLOGISCHE
DETEKTION
39
2.8.5.1.
ANTIKOERPER
39
2.8.5.2.
CHEMILUMINISZENZ-DETEKTION
40
2.8.5.3.
COLORIMETRISCHE
DETEKTION
MIT
NBT/BCIP
41
2.9.
CHEMIKALIEN
UND
ENZYME
41
3.
EXPERIMENTE
UND
ERGEBNISSE
43
3.1.
ETABLIERUNG
TRANSGENER
MAUSLINIEN,
DIE
MINK-PRP
UNTER
DER
KONTROLLE
DES
43
HAMSTER-PRP-GENPROMOTORS
EXPRIMIEREN
3.1.1.
KONSTRUKTION
DES
TRANSGEN-VEKTORS
43
3.1.2.
HERSTELLUNG
TRANSGENER
MAEUSE
DURCH
GENOMISCHE
INSERTION
46
VON
COSMINK
3.1.3.
ERMITTLUNG
DER
KOPIENZAHL
DES
TRANSGENS
UND
SELEKTION
48
HOMOZYGOT
TRANSGENER
MAEUSE
3.1.4.
NACHWEIS
DER
MINK-PRP-EXPRESSION
50
3.1.5.
CHARAKTERISIERUNG
DER
MINK-PRP-EXPRESSION
52
3.1.5.1.
QUANTIFIZIERUNG
DER
MINK-PRP-SYNTHESELEISTUNG
52
3.1.5.2.
MINK-PRP-EXPRESSIONSMUSTERINMK45-MAEUSEN
53
3.2.
HERSTELLUNG
REKOMBINANTER
EMBRYONALER
STAMMZELLEN
MIT
ZOXP-FLANKIERTEM
56
PM-P-GEA
3.2.1.
ISOLIERUNG
EINES
GENOMISCHEN
PM-P-KLONS
AUS
EINER
X-PHAGEN
56
GENBANK
3.2.2.
KONSTRUKTION
DES
'TARGETING'-VEKTORS
60
3.2.2.1.
KLONIERUNG
VON
PLOX
2
60
IV
INHALTSVERZEICHNIS
3.2.2.2.
KONSTRUKTION
VON
PMOLOX-TKN
62
3.2.2.3.
KONSTRUKTION
VON
PMORECL
64
3.2.3.
HERSTELLUNG
UND
ANALYSE
VON
REKOMBINANTEN
ES-ZELLKLONEN
67
4.
DISKUSSION
70
4.1.
MINK-PRP-EXPRIMIERENDE
TRANSGENE
MAEUSE
70
4.2.
REKOMBINANTE
ES-ZELLEN
MIT
FOXP-FLANKIERTEM
PM-P-GEN
74
5.
ZUSAMMENFASSUNG
78
6.
LITERATUR
79 |
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