Tumorpharmakologische und analytische Untersuchungen zur Optimierung neuer Zytostatika-beladener bioabbaubarer Implantate für die interstitielle Chemotherapie maligner Hirntumoren:
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| Format: | Thesis Book |
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1998
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TUMORPHARMAKOLOGISCHE UND ANALYTISCHE UNTERSUCHUNGEN ZUR OPTIMIERUNG
NEUER ZYTOSTATIKA-BELADENER BIOABBAUBARER IMPLANTATE FUER DIE
INTERSTITIELLE CHEMOTHERAPIE MALIGNER HIRNTUMOREN DISSERTATION ZUR
ERLANGUNG DES DOKTORGRADES DER NATURWISSENSCHAFTEN (DR. RER. NAT.) DER
NATURWISSENSCHAFTLICHEN FAKULTAET IV -CHEMIE UND PHARMAZIE- DER
UNIVERSITAET REGENSBURG VORGELEGT VON PETER ALTENSCHOEPFER AUS ORTENBURG
1998 INHALTSVERZEICHNIS 1 EINLEITUNG 1 1.1 PRIMAERE TUMOREN DES ZENTRALEN
NERVENSYSTEMS 1 1.1.1 KLASSIFIZIERUNG 2 1.1.2 PROGNOSE 2 1.1.3
BESONDERHEITEN MALIGNER HIRNTUMOREN 2 1.1.4 STANDARDTHERAPIE MALIGNER
HIRNTUMOREN 3 1.1.5 NEUE THERAPIEANSAETZE 4 1.2 DIE LOKALE INTERSTITIELLE
CHEMOTHERAPIE MIT ZYTOSTATIKA-HALTIGEN IMPLANTATEN 4 1.3 ADJUVANTE
INTERSTITIELLE THERAPIE MIT HYALURONIDASE 8 2 PROBLEMSTELLUNG 9 3
ERGEBNISSE UND DISKUSSION 11 3.1 ETABLIERUNG UND CHARAKTERISIERUNG
MENSCHLICHER HIRNTUMORZELLINIEN 11 3.1.1 DAS SEED-STOCK-KONZEPT 11 3.1.2
ETABLIERUNG UND CHARAKTERISIERUNG DER ZELLINIEN IN VITRO 12 3.1.2.1
ETABLIERUNG UND IN-VITRO-MORPHOLOGIE DER ZELLINIE U-87 MG 12 3.1.2.2
ETABLIERUNG UND IN-VITRO-MORPHOLOGIE DER ZELLINIE U-118 MG 13 3.1.2.3
ETABLIERUNG UND IN-VITRO-MORPHOLOGIE DER ZELLINIE U-373 MG 14 3.1.2.4
KARYOLOGIE DER HIRNTUMORZELLINIEN . . 15 3.1.2.5 WACHSTUMSVERHALTEN UND
VERDOPPLUNGSZEITEN DER HIRNTUMORZELLINIEN 19 3.1.2.6 VERSUCHE ZUR
ETABLIERUNG WEITERER HUMANER HIRNTUMORZELLINIEN 22 3.1.3 ETABLIERUNG UND
CHARAKTERISIERUNG DER ZELLINIEN IN VIVO 24 3.1.3.1 ETABLIERUNG,
IN-VIVO-MORPHOLOGIE UND WACHSTUMSVERHALTEN DER ZELLINIE U-87 MG IN
NMRI(NU/NU) MAEUSEN 24 3.1.3.2 ETABLIERUNG, IN-VIVO-MORPHOLOGIE UND
WACHSTUMSVERHALTEN DER ZELLINIE U-118 MG IN NMRI(NU/NU) MAEUSEN 28
3.1.3.3 ETABLIERUNG, IN-VIVO-MORPHOLOGIE UND WACHSTUMSVERHALTEN DER
ZELLINIE U-373 MG IN NMRI(NU/NU) MAEUSEN . 31 3.2 AUSWAHL DER ZYTOSTATIKA
FUER DIE INTERSTITIELLE CHEMOTHERAPIE 34 3.2.1 CHEMOSENSITIVITAETSTEST
VERSCHIEDENER ZYTOSTATIKA AN HUMANEN HIRNTUMORZELLINIEN 35 3.2.1.1
CHEMOSENSITIVITAETSTEST VERSCHIEDENER ZYTOSTATIKA IN DAUERINKUBATION 35
3.2.1.2 WEITERE CHEMOSENSITIVITAETSTESTS AN DER HUMANEN HIRNTUMORZELLINIE
U-87 MG 38 3.2.2 NEUROTOXIZITAETSTEST DER ZYTOSTATIKA IM MAEUSEGEHIRN 44
3.3 CHARAKTERISIERUNG UND ANALYTIK DER VERWENDETEN ZYTOSTATIKA 46 3.3.1
ACLARUBICIN (ACLACINOMYCIN A) 46 3.3.1.1 CHEMISCHE EIGENSCHAFTEN UND
PHARMAKOLOGISCHES PROFIL 46 3.3.1.2 STABILITAET VON ACLARUBICIN 49
3.3.1.2.1 HYDROLYSE UND ZERSETZUNG VON ACLARUBICIN 49 3.3.1.2.2
ADSORPTION VON ACLARUBICIN AN VERSCHIEDENE MATERIALIEN 50 3.3.1.2.3
STABILITAET VON ACLARUBICIN GEGENUEBER ULTRASCHALL 52 3.3.1.3 ENTWICKLUNG
UND VALIDIERUNG EINER HPLC-METHODE FUER DIE QUANTITATIVE BESTIMMUNG VON
ACLARUBICIN 52 3.3.1.3.1 DETEKTION VON ACLARUBICIN 53 3.3.1.3.1.1
UV/VIS-SPEKTROSKOPISCHE DETEKTION 53 3.3.1.3.1.2 FLUORIMETRISCHE
DETEKTION 54 3.3.1.3.2 WAHL EINES GEEIGNETEN INTERNEN STANDARDS 56
3.3.1.3.3 ENTWICKLUNG EINER GRADIENTENELUTIONSMETHODE ZUR
CHROMATOGRAPHISCHEN TRENNUNG VON ACLARUBICIN UND ACLACINOMYCIN B 57
3.3.1.3.4 VALIDIERUNG DER HPLC-METHODE 58 3.3.1.3.5 CHARAKTERISIERUNG
DER HPLC-METHODE 62 3.3.1.3.6 ENTWICKLUNG EINES EXTRAKTIONSVERFAHRENS
ZUR QUANTITATIVEN BESTIMMUNG V, VON ACLARUBICIN AUS BIOLOGISCHEM
MATERIAL 63 3.3.1.3.7 BESTIMMUNG DER RECOVERY 65 3.3.2 METHOTREXAT (MTX)
67 3.3.2.1 CHEMISCHE EIGENSCHAFTEN UND PHARMAKOLOGISCHES PROFIL 67
3.3.2.2 ENTWICKLUNG UND VALIDIERUNG EINER HPLC-METHODE FUER DIE
QUANTITATIVE BESTIMMUNG VON METHOTREXAT 69 3.3.2.2.1 DETEKTION VON
METHOTREXAT 70 3.3.2.2.2 WAHL EINES GEEIGNETEN INTERNEN STANDARDS 71
3.3.2.2.3 ENTWICKLUNG EINER ISOKRATISCHEN HPLC-METHODE ZUR
CHROMATOGRAPHISCHEN TRENNUNG VON METHOTREXAT UND 4-AMINOACETOPHENON 72
3.3.2.2.4 VALIDIERUNG DER HPLC-METHODE 73 3.3.2.2.5 CHARAKTERISIERUNG
DER HPLC-METHODE 76 3.3.2.2.6 ENTWICKLUNG EINES EXTRAKTIONSVERFAHRENS
ZUR QUANTITATIVEN BESTIMMUNG VON METHOTREXAT AUS BIOLOGISCHEM MATERIAL
77 3.3.2.2.7 BESTIMMUNG DER RECOVERY 78 3.3.3 CARBOPLATIN 80 3.3.3.1
CHEMISCHE EIGENSCHAFTEN UND PHARMAKOLOGISCHES PROFIL 80 3.3.3.2
QUANTITATIVE BESTIMMUNG VON CARBOPLATIN MIT DER
ATOMABSORPTIONSSPEKTROSKOPIE 82 3.3.3.2.1 PRINZIP DER
ATOMABSORPTIONSSPEKTROSKOPIE 82 3.3.3.2.2 BESTIMMUNG VON PLATIN IN
PROBEN AUS BIOLOGISCHEN MATERIALIEN 84 3.3.3.2.3 RECOVERY DER EINZELNEN
METHODEN ZUR PLATINBESTIMMUNG 87 3.3.4 BCNU (CARMUSTIN) 88 3.3.4.1
CHEMISCHE EIGENSCHAFTEN UND PHARMAKOLOGISCHES PROFIL 88 3.3.4.2
ENTWICKLUNG UND VALIDIERUNG EINER HPLC-METHODE ZUR QUANTITATIVEN
BESTIMMUNG VON BCNU 90 3.3.4.2.1 DETEKTION VON BCNU 91 3.3.4.2.2 WAHL
EINES GEEIGNETEN INTERNEN STANDARDS 92 3.3.4.2.3 ENTWICKLUNG EINES
ISOKRATISCHEN TRENNUNGSVERFAHRENS 92 3.3.4.2.4 VALIDIERUNG DER
HPLC-METHODE 93 3.3.4.2.5 CHARAKTERISIERUNG DER HPLC-METHODE 96
3.3.4.2.6 GRENZEN DER HPLC-METHODE 97 3.4 IMMUNHISTOCHEMISCHE
UNTERSUCHUNGEN 98 3.4.1 PRINZIP DER IMMUNPEROXIDASEFAERBUNG MITTELS DER
AVIDIN-BIOTIN-METHODE 98 3.4.2 FAERBUNG DES SAUREN GLIALEN FASERPROTEINS
(GFAP) 99 3.4.3 FAERBUNG DES P-GLYKOPROTEIN 170 102 3.4.4 FAERBUNG DES VON
WILLEBRAND-FAKTORS 104 3.4.5 FAERBUNG DES LAMININS 105 3.5
IN-VITRO-BESTIMMUNG DER ZYTOSTATIKAFREISETZUNG AUS IMPLANTATEN 108 3.5.1
FREISETZUNG IN ELLIOTTS B-LOESUNG (LIQUORAEQUIVALENT) 108 3.5.1.1
FREISETZUNG VON ACLARUBICIN AUS CPP/SA-LMPLANTATEN 108 3.5.1.2
FREISETZUNG VON METHOTREXAT AUS CPP/SA-LMPLANTATEN 110 3.5.1.3
FREISETZUNG VON CARBOPLATIN AUS CPP/SA-LMPLANTATEN 111 3.5.1.4
CHEMOSENSITIVITAETSTEST MIT FREIGESETZTEN ZYTOSTATIKA AN DER HUMANEN
HIRNTUMORZELLINIE U-87 MG 112 3.5.2 FREISETZUNG DER ZYTOSTATIKA AUS
IMPLANTATEN DIREKT IM ZELLKULTUREXPERIMENT 115 3.5.2.1 WACHSTUMSKURVEN
DER HUMANEN HIRNTUMORZELLINIEN IN LINBROS 116 3.5.2.2
ARZNEISTOFFFREISETZUNG UND WIRKUNG VON ACLARUBICIN-BELADENEN
CPP/SA-LMPLANTATEN 117 3.5.2.3 ARZNEISTOFFFREISETZUNG UND WIRKUNG VON
METHOTREXAT-BELADENEN CPP/SA-LMPLANTATEN 123 3.5.2.4
ARZNEISTOFFFREISETZUNG UND WIRKUNG VON CARBOPLATIN-BELADENEN
CPP/SA-LMPLANTATEN 127 3.5.2.5 WIRKUNG VON BCNU-BELADENEN
CPP/SA-LMPLANTATEN 131 3.6 IN-VIVO-BESTIMMUNG DER ZYTOSTATIKAFREISETZUNG
AUS IMPLANTATEN 134 3.6.1 KONTROLLE DES EROSIONSVERHALTENS DER
IMPLANTATE IM MAEUSEGEHIRN MIT DER RASTERELEKTRONENMIKROSKOPIE (REM) ,
134 3.6.2 FREISETZUNG UND VERTEILUNG DER ZYTOSTATIKA IM MAEUSEGEHIRN 139
5.7.3.2 ADSORPTION VON ACLARUBICIN AN STERILFILTER 189 5.8 ANALYTIK VON
METHOTREXAT 191 5.8.1 ALLGEMEINE BETRIEBSBEDINGUNGEN DER HPLC-METHODE
191 5.8.1.1 STATIONAERE PHASE 191 5.8.1.2 MOBILE PHASE 191 5.8.1.3
KALIBRIERUNG DER HPLC 191 5.8.1.4 VORBEREITUNG DER PROBEN AUS
GEWEBEMATERIAL 193 5.8.1.5 VORBEREITUNG DER PROBEN AUS PLASMA ' 193
5.8.1.6 BESTIMMUNG DES MOLAREN DEKADISCHEN EXTINKTIONSKOEFFIZIENTEN 194
5.8.1.6.1 ABSORPTIONSSPEKTREN 194 5.9 ANALYTIK VON CARBOPLATIN 196 5.9.1
ALLGEMEINE BETRIEBSBEDINGUNGEN DER ATOMABSORPTIONSSPEKTROSKOPIE 196
5.9.1.1 DAS OFENPROGRAMM 196 5.9.1.2 ALTERUNG DER GRAPHITROHRE 196
5.9.1.3 KALIBRIERUNG DER AAS 198 5.9.2 VORBEREITUNG DER PROBEN AUS
BIOLOGISCHEM MATERIAL 199 5.9.2.1 VORBEREITUNG DER GEWEBEPROBEN ZUR
ERMITTLUNG DES FREIEN CARBOPLATIN 199 5.9.2.2 VORBEREITUNG DER
GEWEBEPROBEN ZUR ERMITTLUNG DES GESAMTPLATINGEHALTES 199 5.9.2.3
VORBEREITUNG DER BLUTPLASMAPROBEN 199 5.10 ANALYTIK VON BCNU (CARMUSTIN)
200 5.10.1 ALLGEMEINE BETRIEBSBEDINGUNGEN DER HPLC-METHODE 200 5.10.1.1
STATIONAERE PHASE 200 5.10.1.2 MOBILE PHASE 200 5.10.1.3 KALIBRIERUNG DER
HPLC 200 5.10.1.4 BESTIMMUNG DES MOLAREN DEKADISCHEN
EXTINKTIONSKOEFFIZIENTEN 201 5.10.1.4.1 ABSORPTIONSSPEKTREN 201 5.11
IN-VITRO-FREISETZUNG DER ZYTOSTATIKA AUS DEN IMPLANTATEN 204 5.11.1
ARZNEISTOFFFREISETZUNG AUS IMPLANTATEN IN ELLIOTT'S B 204 5.11.2 TESTUNG
DER FREIGESETZTEN ZYTOSTATIKA AN DER ZELLINIE U-87 MG 205 5.11.3
FREISETZUNG DER ZYTOSTATIKA AUS IMPLANTATEN IN DER ZELLKULTUR 206
5.11.3.1 BESTIMMUNG DER ZELLMASSE MIT DEM KRISTALLVIOLETT-ASSAY 206
5.11.3.2 BESTIMMUNG DER ZYTOSTATIKAKONZENTRATIONEN IM MEDIUM 207 5.12
VERSUCHE MIT NMRI(NU/NU) NACKTMAEUSEN 209 5.12.1 HALTUNG DER
VERSUCHSTIERE 209 5.12.2 SUBKUTANE INJEKTION VON HUMANEN HIRNTUMORZELLEN
IN MAEUSE 209 5.12.3 STAMMERHALTUNG DER TUMOREN AUF NACKTMAEUSEN 209
5.12.4 INTRAZEREBRALE APPLIKATION VON HIRNTUMORZELLINIEN 5.12.5
INTRAZEREBRALE APPLIKATION VON IMPLANTATEN 5.12.6 INTRAZEREBRALE
APPLIKATION VON ZYTOSTATIKALOESUNGEN 5.12.7 THERAPIEVERSUCHE AM
SUBKUTANEN TUMORMODELL 5.12.7.1 THERAPIE MIT INTRAPERITONEAL
APPLIZIERTEN ZYTOSTATIKA 5.12.7.2 THERAPIE MIT SUBKUTAN APPLIZIERTEN
IMPLANTATEN 5.12.8 VERSUCHE AM INTRAZEREBRALEN TUMORMODELL 5.12.8.1
TOXIKOLOGISCHE UND PHARMAKOLOGISCHE PRUEFUNG INTRAZEREBRAL APPLIZIERTER
IMPLANTATE 213 5.12.9 KONTROLLE DES EROSIONSVERHALTENS DER IMPLANTATE IM
MAEUSEGEHIRN MITTELS DER RASTERELEKTRONENMIKROSKOPIE (REM) 5.12.9.1
EROSION DER IMPLANTATE IM MAEUSEGEHIRN 5.12.9.2 VORBEREITUNG DER
IMPLANTATE FUER DIE REM 5.12.9.3 DURCHFUEHRUNG DER
RASTERELEKTRONENMIKROSKOPIE (REM) 5.12.10 BESTIMMUNG DER FREISETZUNG UND
VERTEILUNG DER ZYTOSTATIKA AUS IMPLANTATEN IM GEHIRN VON NMRI(NU/NU)
MAEUSEN 5.12.10.1 ENTNAHME DES HERZBLUTES DER NACKTMAEUSE 5.12.10.2
ENTNAHME DER GEHIRNE UND DER IMPLANTATE AUS NACKTMAEUSEN 5.12.10.3
SCHNEIDEN DER GEHIRNE 6 ANHANG 7 LITERATURVERZEICHNIS VII |
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