Zuordnung von Eisen-Schwefel-Zentren in der protonenpumpenden NADH:Ubichinon Oxidoreduktase aus Escherichia coli:
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
ZUSAMMENFASSUNG
1
2.
EINLEITUNG
3
2.1
DAS
AEROBE
ELEKTRONENTRANSPORTSYSTEM
VON
ESCHERICHIA
COLI
3
2.2
DIE
PROTONENPUMPENDE
NADH:LLBICHINON
OXIDOREDUKTASE
AUS
E.
COLI
5
2.3
DIE
EISEN-SCHWEFEL-ZENTREN
DES
KOMPLEX
I
AUS
E.
COLI
12
2.4
ZIEL
DER
ARBEIT
17
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
19
3.1
VERWENDETE
E.
CO//-STAEMME
19
3.2
ANZUCHT
VON
E.
COLI
20
3.3
HERSTELLUNG
VON
PLASMAMEMBRANEN
20
3.4
ZUCKERGRADIENTENZENTRIFUGATION
ZUR
UNTERSUCHUNG
DER
STABILITAET
DES
KOMPLEX
I
21
3.5
HERSTELLUNG
VON
INVERTIERTEN
MEMBRANVESIKELN
21
3.6
ISOLIERUNG
DES
KOMPLEX
I
22
3.7
REKONSTITUTION
DES
ISOLIERTEN
KOMPLEX
I
IN
PHOSPHOLIPIDMEMBRANEN
23
3.8
ENZYMKINETISCHE
MESSUNGEN
23
3.9
FLUORESZENZSPEKTROSKOPISCHE
BESTIMMUNG
VON
PROTONENGRADIENTEN
24
3.10
ESR-SPEKTROSKOPIE
25
3.11
UV-VIS-SPEKTROSKOPIE
25
3.12
VERSCHIEDENE
ANALYTISCHE
METHODEN
26
3.13
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
28
4.
ERGEBNISSE
29
4.1
DER
KOMPLEX
I-GEHALT
VERSCHIEDENER
E.
CO//-STAEMME
29
4.2
EXTRAKTION
DES
KOMPLEX
I
AUS
DER
PLASMAMEMBRAN
30
4.3
ISOLIERUNG
DES
WILDTYP-KOMPLEX
I
AUS
E.
COLI
34
4.4
EIGENSCHAFTEN
DES
WILDTYP-KOMPLEX
I
IN
DODECYLMALTOSID
40
4.5
ISOLIERUNG
DES
KOMPLEX
I
AUS
NUOB
UND
NUOL-PUNKTMUTANTEN
42
4.6
ELEKTRONENTRANSPORTAKTIVITAETEN
DES
KOMPLEX
I
AUS
NUOB
UND
NUOL-PUNKTMUTANTEN 44
4.7
ESR-SPEKTROSKOPISCHE
EIGENSCHAFTEN
DES
KOMPLEX
I
AUS
DEM
WILDTYP
UND
AUS
NUOB
UND
NUOL-PUNKTMUTANTEN 46
4.8
FLUORESZENZSPEKTROSKOPISCHE
BESTIMMUNG
VON
PROTONENGRADIENTEN
AN
MEMBRANVESIKELN
VON
NUOB
UND
NUOL-MUTANTEN 49
4.9
CHARAKTERISIERUNG
VERSCHIEDENER
REDOXZUSTAENDE
DES
KOMPLEX
I
AUS
E.
COLI
DURCH
UV-VIS-DIFFERENZSPEKTROSKOPIE
UND
ESR-SPEKTROSKOPIE
53
4.10
ELEKTRONENMIKROSKOPISCHE
DARSTELLUNG
DES
KOMPLEX
I
AUS
E.
COLI
57
5.
DISKUSSION
60
5.1
DER
GEEIGNETE
AUSGANGSSTAMM
FUER
DIE
ISOLIERUNG
DES
KOMPLEX
I
60
5.2
ISOLIERUNG
UND
EIGENSCHAFTEN
DES
KOMPLEX
I
IN
DODECYLMALTOSID
61
5.3
DAS
FES-ZENTRUM
N-2
IST
AUF
DER
UNTEREINHEIT
NUOB
LOKALISIERT
62
5.4
KATALYTISCHE
AKTIVITAET
DES
KOMPLEX
I
AUS
DEN
NUOB
UND
NUOL-MUTANTEN
64
5.5
EINE
UNBEKANNTE
REDOXGRUPPE
IM
E.
COLI
KOMPLEX
I
66
5.6
DIE
NIEDRIGAUFGELOESTE
DREIDIMENSIONALE
STRUKTUR
DES
E.
COLI
KOMPLEX
I
67
6.
LITERATUR
69 |
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