DNA- und RNA-Amplifizierungstechniken zum Nachweis von Coxiella burnetii und FSME-Virus:
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1998
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INHALT
INHALTSVERZEICHNIS
I
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
IV
1
EINLEITUNG
1
2
LITERATURUEBERSICHT
2
2.1
COXIELLA
BUMETII
2
2.1.1
TAXONOMIE
2
2.1.2
MIKROBIELLE
EIGENSCHAFTEN
2
2.1.3
VORKOMMEN
VON
COXIELLA
BUMETII
IN
DER
NATUR
4
2.1.4
COXIELLOSEN
UND
Q-FIEBER
5
2.1.5
NACHWEIS
VON
COXIELLA
BUMETII
IN
ZECKEN
8
2.2
FSME-VIRUS
11
2.2.1
TAXONOMIE
UND
GENOMISCHE
STRUKTUR
11
2.2.2
EPIDEMIOLOGIE
12
2.2.3
KLINISCHES
BILD
DER
FSME
BEI
MENSCH
UND
TIER
13
2.2.4
NACHWEIS
VON
FSME-VIRUS
IN
ZECKEN
14
3
MATERIAL
UND
METHODEN
16
3.1
PROBENMATERIAL
16
3.1.1
ZECKEN
16
3.1.2
PROBENMATERIAL
VON
HAUS-UND
VERSUCHSTIEREN
16
3.2
NACHWEIS
VON
COXIELLA
BUMETII
17
3.2.1
REAGENZIEN
UND
LOESUNGEN
17
3.2.2
PRAEPARATION
UND
AUFBEREITUNG
VON
ZECKEN
18
3.2.3
AUFBEREITUNG
VON
NACHGEBURTEN
UND
SCHEIDENSEKRET
19
3.2.4
HAEMOLYMPHTEST
20
3.2.5
ANZUECHTUNG
VON
RICKETTSIEN
IM
EMBRYONIERTEN
HUEHNEREI
20
3.2.6
POLYMERASE-KETTENREAKTION
21
3.2.6.1
TRANSPOSON-PCR
ZUM
NACHWEIS
VON
COXIELLA
BUMETII
21
3.2.6.2
OPTIMIERUNG
DER
PCR-BEDINGUNGEN
UND
PCR-PROTOKOLL
22
INHALT
3.2.63
BESTIMMUNG
DER
ANALYTISCHEN
SENSITIVITAET
DER
PCR
23
3.2.6.4
NACHWEIS
DER
PCR-PRODUKTE
MITTELS
AGAROSE-GEI-ELEKTROPHORESE
24
3.2.7
DNA-SEQUENZIERUNG
VON
AMPLIFIKATEN
AUS
DERTRANSPOSON-PCR
24
3.3
NACHWEIS
VON
FSME-VIRUS
25
3.3.1
REAGENZIEN
UND
LOESUNGEN
25
3.3.2
VERMEHRUNG
UND
REINIGUNG
VON
LANGATVIRUS
26
3.3.3
AUFBEREITUNG
DER
ZECKEN
FUER
DEN
EINSATZ
IN
DIE
FSME-VIRUS-PCR
26
3.3.4
AUFBEREITUNG
DER
PARAFFINSCHNITTE
27
3.3.5
POLYMERASE-KETTENREAKTION
27
3.3.5.1
FSME-VIRUS-PCR
27
33.5.2
OPTIMIERUNG
DER
PCR-BEDINGUNGEN
UND
PCR-PROTOKOLL
28
3.3.53
BESTIMMUNG
DER
ANALYTISCHEN
SENSITIVITAET
DER
FSME-VIRUS-PCR
30
33.5.4
NACHWEIS
DER
PCR-PRODUKTE
MITTELS
AGAROSE-GEL-ELEKTROPHORESE
30
3.3.6
KLONIERUNG
UND
SEQUENZIERUNG
VON
PCR-PRODUKTEN
31
3.4
WEITERE
REAGENZIEN
UND
CHEMIKALIEN
32
3.5
GERAETE
32
3.6
COMPUTERPROGRAMME
32
4
ERGEBNISSE
33
4.1
NACHWEIS
VON
COXIELLA
BUMETII
33
4.1.1
HAEMOLYMPHTEST
33
4.1.2
UNTERSUCHUNG
VON
ZECKEN
IM
EMBRYONIERTEN
HUEHNEREI
33
4.1.3
POLYMERASE-KETTENREAKTION
33
4.13.1
OPTIMIERUNG
DER
PCR-BEDINGUNGEN
33
4.13.2
BESTIMMUNG
DER
ANALYTISCHEN
SENSITIVITAET
DER
TRANSPOSON-PCR
34
4.13.3
TRANSPOSON-PCR
ZUM
NACHWEIS
VON
COXIELLA
BUMETII
IN
ZECKEN
34
4.13.4
TRANSPOSON-PCR
ZUM
NACHWEIS
VON
COXIELLA
BUMETII
IN
NACHGEBURTEN
34
4.13.5
TRANSPOSON-PCR
ZUM
NACHWEIS
VON
COXIELLA
BUMETII
IN
SCHEIDENSEKRETEN
35
4.1.4
DNA-SEQUENZIERUNG
VON
PRODUKTEN
DER
TRANSPOSON-PCR
UND
ANALYSE
DER
SEQUENZDATEN
35
N
INHALT
4.2
NACHWEIS
VON
FSME-VIRUS
35
4.2.1
POLYMERASE-KETTENREAKTION
35
4.2.1.1
OPTIMIERUNG
DER
PCR-BEDINGUNGEN
35
4.2.1.2
BESTIMMUNG
DER
ANALYTISCHEN
SENSITIVITAET
DER
FSME-VIRUS-PCR
36
4.2.1.3
FSME-VIRUS-PCR
ZUR
UNTERSUCHUNG
VON
ZECKEN
36
4.2.1.4
FSME-VIRUS-PCR
ZUR
UNTERSUCHUNG
VON
VIRUSHALTIGEM
MAEUSEGEHIM
36
4.2.2
DNA-SEQUENZIERUNG
VON
PRODUKTEN
DER
FSME-VIRUS-PCR
UND
ANALYSE
DER
SEQUENZDATEN
37
5
DISKUSSION
38
6
TABELLEN
47
7
ABBILDUNGEN
52
8
ZUSAMMENFASSUNG
66
9
SUMMARY
68
10
LITERATURVERZEICHNIS
70
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