Identifizierung zellulärer Liganden der transformierenden E6-Proteine humaner Papillomviren:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1998
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INHALTSVERZEICHNIS
I
INHALTSVERZEICHNIS
L
ZUSAMMENFASSUNG
.
1
II.
EINLEITUNG
.
2
HI.
MATERIAL
.
9
1.
EUKARYONTE
ZELLEN
.
9
2.
BAKTERIEN
.
9
3.
HEFEN
.
9
4.
NUKLEINSAEUREN
.
9
4.1
SYNTHETISCH
HERGESTELLTE
OLIGONUKLEOTIDE
.
9
4.2
REKOMBINANTE
PLASMIDE
.
10
4.3
SONSTIGE
NUKLEINSAEUREN
.
12
5.
GROESSENMARKER
FUER
ELEKTROPHORESEN
.
12
6.
ENZYME
.
12
7.
REAGENZIEN
.
13
8.
MEDIEN
.
13
8.1
MEDIEN
FUER
DIE
ZELLKULTUR
.
13
8.2
MEDIEN
FUER
DIE
BAKTERIENKULTUR
.
13
8.3
MEDIEN
FUER
DIE
HEFEKULTUR
.
13
9.
ANTISEREN
UND
ANTIKOERPER
.
14
IV.
METHODEN
.
15
1.
ZELLKULTUR
.
15
1.1
KULTIVIERUNG
VON
EUKARYONTEN
ZELLEN
.
15
1.2
EINFRIEREN
UND
AUFTAUEN
VON
ZELLEN
.
15
1.3
TRANSFEKTION
EUKARYONTER
ZELLEN
.
15
2.
BAKTERIENKULTUR
.
16
2.1
KULTUREN
FUER
PLASMIDISOLIERUNG
.
16
2.2
HERSTELLUNG
UND
TRANSFORMATION
KOMPETENTER
BAKTERIEN
.
16
3.
HEFEKULTUR
.
16
3.1
ANZUCHT
UND
TRANSFORMATION
VON
HEFEZELLEN
.
16
3.2
FILTER-
UND
UEBERSCHICHTUNGSTEST
.
17
3.3
ONPG
UND
CRPG-TEST
.
17
4.
DNA-METHODEN
.
18
4.1
STANDARDMETHODEN
.
18
4.2
POLYMERASE-KETTEN-REAKTION
(PCR)
.
18
4.3
DNA
SEQUENZIERUNG
.
19
5.
PROTEIN-METHODEN
.
19
5.1
STANDARDMETHODEN
.
19
5.2
ZELLAUFSCHUSS
ZUM
PROTEINNACHWEIS
.
19
5.2.1
PROTEINEXTRAKT
AUS
HEFEZELLEN
.
19
5.2.2
PROTEINEXTRAKT
AUS
SAEUGERZELLEN
.
19
5.3
CAT-EXPRESSIONSANALYSE
.
20
6.
METHODEN
ZUR
UNTERSUCHUNG
VON
PROTEIN-PROTEIN-INTERAKTIONEN
.
20
II
INHALTSVERZEICHNIS
6.1
IN
VITRO
TRANSKRIPTION/TRANSLATION
UND
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
PROTEINEN
.
20
6.2
EXPRESSION
UND
REINIGUNG
VON
GST-FUSIONSPROTEINEN
.
20
6.3
UBIQUITINIERUNGS-UND
DEGRADATIONS-EXPERIMENTE
.
21
7.
IMMUNOLOGISCHE
METHODEN
.
21
7.1
WESTEMBLOT-ANALYSE
.
21
7.2
KOIMMUNPRAEZIPITATION
.
22
V.
ERGEBNISSE
.
23
1.
INTERAKTION
DER
E6-PROTEINE
GENITALER
UND
KUTANER
PAPILLOMVIRUS-TYPEN
(HPV)
MIT
DEM
TUMORSUPPRESSOR-PROTEIN
P53
.
23
1.1
ANALYSE
DER
UBIQUITIN-ABHAENGIGEN
DEGRADATION
DES
P53-PROTEINS
DURCH
DIE
E6-PROTEINE
HUMANER
PAPILLOMVIREN
.
23
1.2
UNTERSUCHUNG
DER
BINDUNG
DER
E6-PROTEINE
AN
DAS
P53-PROTEIN
MIT
HILFE
DES
HEFE
"
TWO-HYBRID
"
-SYSTEMS
.
25
1.3
NACHWEIS
DER
E6
UND
P53-PROTEINE
IN
KOTRANSFORMIERTEN
HEFEZELLEN
.
29
1.4
CHARAKTERISIERUNG
DER
DOMAENE
IN
P53,
WELCHE
FUER
DIE
INTERAKTION
MIT
DEN
E6-PROTEINEN
GENITALER
HPV-TYPEN
IN
HEFEZELLEN
VERANT
WORTLICH
IST
.
30
1.5
EINFLUSS
DER
E6-PROTEINE
AUF
DIE
P53-VERMITTELTE
TRANSAKTI
VIERUNG
.
32
1.6
ANALYSE
VON
DELETIONSMUTANTEN
VON
HPV
16
E6
HINSICHTLICH
IHRER
INTERAKTION
MIT
P53
.
33
2.
INTERAKTION
DER
E6-PROTEINE
HUMANER
PAPILLOMVIREN
MIT
DEM
E6-ASSOZIIER
TEN
PROTEIN
(E6AP)
.
38
2.1
ANALYSE
VON
INTERAKTIONEN
ZWISCHEN
E6-PROTEINEN
UND
E6AP
IN
VIVO
.
38
2.2
ANALYSE
VON
INTERAKTIONEN
ZWISCHEN
E6-PROTEINEN
UND
E6AP
IN
VITRO
.
39
3.
INTERAKTION
DER
E6-PROTEINE
HUMANER
PAPILLOMVIREN
MIT
DEM
E6-BINDEN-
DEN
PROTEIN
(E6BP)
.
40
4.
INTERAKTION
DER
E6-PROTEINE
GENITALER
UND
KUTANER
HPV-TYPEN
MIT
KOM
PONENTEN
DER
BASEN-EXZISIONS-REPARATUR
.
43
4.1
INTERAKTION
DER
E6-PROTEINE
MIT
XRCC1
IM
HEFE
"
TWO-HYBRID
"
-
SYSTEM
.
43
4.2
INTERAKTION
DER
E6-PROTEINE
MIT
XRCC1
AUS
ZELLEXTRAKTEN
.
44
4.3
INTERAKTION
DER
E6-PROTEINE
MIT
POLYMERASE
SS
UND
DNA-LIGASE
DI
IM
HEFE
"
TWO-HYBRID
"
-SYSTEM
.
46
VI.
DISKUSSION
.
47
VII.
LITERATURVERZEICHNIS
.
54
VM.
ABKUERZUNGS
VERZEICHNIS
.
65
IX.
ANHANG
.
66 |
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