Ischämie und Reperfusion am Hundeherzen: Wirkung auf Zellorganellen und zelluläre Proteine sowie ihre Auswirkung auf das Vorkommen von Apoptose
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1998
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1.
EINLEITUNG
1
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
2
2.1
TIERMODELL
2
2.1.1.
VERSUCHSTIERE
2
2.1.2.
PRAEMEDIKATION
UND
NARKOSE
2
2.1.3.
TRANSPLANTATIONSMODELL
UND
OPERATIONSTECHNIK
FUER
DIE
GLOBALE
ISCHAEMIE
2
2.1.4.
OPERATIONSTECHNIK
REGIONALE
ISCHAEMIE
5
2.1.5.
VERSUCHSAUFBAU
UND
PROBENENTNAHME
5
2.2.
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
8
2.2.1.
PROBENVORBEREITUNG
FUER
DIE
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
8
2.2.2.
AUSWERTUNG
DER
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
8
2.3.
IMMUNHISTOCHEMIE
9
2.3.1.
VORBEREITUNG
DES
PROBENMATERIALS
FUER
DIE
IMMUNFLUORESZENZ
9
2.3.2.
HERSTELLUNG
DER
GEFRIERSCHNITTE
9
2.3.3.
GELATINEBESCHICHTUNG
DER
OBJEKTTRAEGER
9
2.3.4.
DURCHFUEHRUNG
DER
IMMUNHISTOCHEMIE
9
2.3.4.1.
FIXIERUNG
DES
GEWEBES
10
2.3.4.2.
INKUBATION
MIT
DEM
ERSTEN
ANTIKOERPER
11
2.3.4.3.
INKUBATION
MIT
DEM
ZWEITEN
ANTIKOERPER
11
2.3.4.4.
INKUBATION
MIT
DEM
DRITTEN
ANTIKOERPER
11
2.3.4.5.
KERNGEGENFAERBUNG
12
2.3.4.6.
EINDECKEN
DER
PRAEPARATE
12
2.3.4.7.
KONTROLLPRAEPARATE
13
2.3.4.8.
FLUORESZENZMIKROSKOPIE
13
2.4.
IN
SITU
HYBRIDISIERUNG
(ISH)
14
2.4.1.
SONDEN
15
2.4.2.
OBJEKTTRAEGERBESCHICHTUNG
15
2.4.3.
ANFERTIGUNG
UND
FIXIERUNG
DER
ISH
GEFRIERSCHNITTE
15
2.4.4.
AUFTRAEGEN
UND
INKUBIEREN
DER
RADIOAKTIV
MARKIERTEN
PROBE,
KONTROLLEN
16
2.4.5.
WASCHSCHRITTE
16
1
2.4.6.
AUTORADIOGRAPHIE
16
2.4.7.
ENTWICKLUNG
DER
SCHNITTE
18
2.5.
RNA-ANALYSE
19
2.5.1.
ISOLIERUNG
VON
RNA
19
2.5.2.
NORTHERN
BLOT
HYBRIDISIERUNG
19
2.5.3.
KAPILLAR-BLOT
20
2.5.4.
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
CDNA-PROBEN
21
2.5.5.
HYBRIDISIERUNG
21
2.5.6.
QUANTIFIZIERUNG
22
2.6.
TUNEL-METHODE
(TERMINAL-DEOXY
NUCLEOTIDYL-TRANSFERASE
MEDIATED
D-UTP
NICK
END-LABELING
METHOD)
23
2.6.1.
FIXIERUNG
DER
SCHNITTE
23
2.6.2.
IN
SITU
APOPTOSE
24
3.
ERGEBNISSE
25
3.1.
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
(EM)
25
3.1.1.
SUBZELLULAERE
ORGANELLEN,
SCHAEDIGUNGSGRAD
25
3.2.
IMMUNHISTOCHEMIE
(IH)
28
3.2.1.
PROTEINE
DER
MYOZYTEN
28
3.2.1.1.
AKTIN
29
3.2.1.2.
MYOSIN
29
3.2.1.3.
A-AKTININ
29
3.2.1.4.
DESMIN
30
3.2.2.
60'
GLOBALE
ISCHAEMIE
UND
6H
REPERFUSION
35
3.2.3.
90'
GLOBALE
ISCHAEMIE
UND
6H
REPERFUSION,
SERIE
I
37
3.2.4.
90'
GLOBALE
ISCHAEMIE
UND
6H
REPERFUSION,
SERIE
II
39
3.2.5.
KONTROLLEXPERIMENTE
41
3.2.6.
75'
REGIONALE
ISCHAEMIE
UND
6H
REPERFUSION
42
3.2.7.
90'
REGIONALE
ISCHAEMIE
UND
6H
REPERFUSION
44
3.2.8
0'
-
90'
FORTLAUFENDE
GLOBALE
NORMOTHERME
ISCHAEMIE
46
3.2.9.
0'
-
90'
FORTLAUFENDE
GLOBALE
HYPOTHERME
ISCHAEMIE
48
3.3.
ERGEBNISSE
DER
IN
SITU
HYBRIDISIERUNG
50
3.4.
ERGEBNISSE
DER
NORTHERN
BLOT
HYBRIDISIERUNG
52
3.4.1.
SS-MYOSIN-GENEXPRESSION
52
3.4.2.
DESMIN-GENEXPRESSION
53
3.5.
ERGEBNISSE
DER
TUNEL-METHODE
54
3.6.
ZUSAMMENFASSUNG
DER
ERGEBNISSE
57
4.
DISKUSSION
59
4.1.
ISCHAEMIE
59
4.2.
REPERFUSION
61
4.3.
EXPERIMENTELLES
MODELL
61
4.4.
VERAENDERUNGEN
DER
ZELLORGANELLEN
62
4.5.
VERAENDERUNGEN
DER
PROTEINE
62
4.5.1.
AKTIN
63
4.5.2.
MYOSIN
65
4.5.3.
A-AKTININ
66
4.5.4.
DESMIN
67
4.6.
VERHALTEN
DER
PROTEINE
BEI
ISCHAEMIE
UND
REPERFUSION
67
4.7.
APOPTOSE
68
4.7.1.
MERKMALE
DER
APOPTOSE
69
4.7.2.
REGULATION
70
4.7.3.
EIGENE
RESULTATE
71
4.8.
MRNA
FUER
MYOSIN
UND
DESMIN
73
5.
ZUSAMMENFASSUNG/SUMMARY
74
6.
ABKUERZUNGEN
79
7.
LITERATURVERZEICHNIS
81
8.
DANKSAGUNG
92 |
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