Kostimulation humaner T-Lymphozyten durch den Erreger der Lyme-Borreliose, Borrelia burgdorferi:
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Sprache: | German |
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1997
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Beschreibung: | Heidelberg, Univ., Diss., 1998 (Nicht für den Austausch) |
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IN HALTSVERZEICHN IS
ABKUERZUNGEN
1 EINLEITUNG 1
1 .1 DAS HUMANE IMMUNSYSTEM
1
1.1.1 T-LYMPHOZYTEN 2
1.1.2 T-ZELL-REZEPTOR 3
1.1.3 ANTIGENABHAENGIGE T-ZELL-AKTIVIERUNG UEBER DEN TCR-KOMPLEX 4
1.1.4 TH1/TH2-SUBPOPULATIONEN DER CD4-POSITIVEN T-LYMPHOZYTEN 6
1 .2
LYME-BORRELIOSE 7
1.2.1 ENTSTEHUNG DES KRANKHEITSBEGRIFFS 7
1.2.2 BORRELIA BURGDORFERI 8
1.2.3 VEKTOR, WIRT UND EPIDEMIOLOGIE 1 0
1.2.4 KLINISCHE SYMPTOMATIK, DIAGNOSE UND THERAPIE 1 2
1.2.5 IMMUNANTWORT UND PATHOGENESE 1 4
1 .3 ZIELSETZUNG DER ARBEIT 1 9
2 MATERIAL 2 0
2.1
ANTIBIOTIKA 2 0
2.2 ANTIKOERPER 2 0
2.3 BAKTERIEN-STAEMME 2 1
2.4 BORRELIEN-ANTIGENE 2 1
2.5 CHEMIKALIEN 2 1
2.6 ENZYME 2 3
2.7 FILMMATERIAL 2 4
2.8 GERAETE
2 4
2.9
KOMPLETT-KITS FUER SPEZIELLE ANWENDUNGEN 2 5
2.1 0 KULTURMEDIEN FUER BAKTERIEN-ZELLEN 2 5
2.11
KULTURMEDIEN FUER HUMANE LYMPHOZYTEN 2 5
2.1 2 LAENGENSTANDARDS FUER DIE GELELEKTROPHORESE 2 6
2.1 3
MEMBRANEN 2 6
2.14
OLIGONUKLEOTIDE (PRIMER) 2 6
2.1 5
PLASMID-VEKTOREN 2 7
2.16
PUFFER UND LOESUNGEN 2 8
2.17
RADIOAKTIVE SUBSTANZEN 2 9
2.1 8
VERBRAUCHSMATERIAL 2 9
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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2.19
ZELL-LINIEN
3 METHODEN
3.1 ZELLBIOLOGISCHE UND IMMUNOLOGISCHE METHODEN
3.1.1 KULTIVIERUNG VON SAEUGERZELLEN
3.1.2 BESTIMMUNG DER ZELLDICHTE UND VITALITAET DER ZELLEN
3.1.3 LAGERUNG VON SAEUGERZELLEN IN FLUESSIGEM STICKSTOFF
3.1.4 FIXIERUNG VON INTAKTEN
BORRELIA BURGDORFERI-ORGANISMEN
3.1.5 T-ZELL-ISOLATION AUS HUMANEM VOLLBLUT
3.1.6 STIMULATION PERIPHERER T-LYMPHOZYTEN
3.1.7 ANALYSE DER ANTIKOERPER-VERMITTELTEN ZYTOTOXIZITAET STIMULIERTER
T-LYMPHOZYTEN
3.1.8 ZYTOKIN-ANALYSE DER KULTURUEBERSTAENDE STIMULIERTER T-LYMPHOZYTEN
3.1.9 "FLUORESCENCE-ACTIVATED CELL SORTER" (FACS)-ANALYSE
3.1.10 ELISA ZUR ANALYSE DER OSPA-BINDUNG AN T-LYMPHOZYTEN
3.1.11 FACS-ANALYSE DER OSPA-BINDUNG
3.1.12 FLUORESZENZ-FAERBUNG VON BORRELIEN
3.2 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN
3.2.1 KULTIVIERUNG VON BAKTERIEN
3.2.2 DNA-ISOLIERUNG (MINI-PRAEPARATION) AUS BAKTERIEN
3.2.3 PLASMID-MAXI-PRAEPARATION NACH QIAGEN
3.2.4 ETHANOLPRAEZIPITATION VON NUKLEINSAEUREN
3.2.5 BESTIMMUNG DER REINHEIT UND KONZENTRATION VON NUKLEINSAEUREN
3.2.6 RESTRIKTIONSSPALTUNG
3.2.7 RNA-PRAEPARATION AUS HUMANEN T-LYMPHOZYTEN
3.2.8 CDNA-SYNTHESE DES 1.STRANGES
3.2.9 POLYMERASE-KETTEN-REAKTION (PCR)
3.2.10 ELEKTROPHORESE VON DNA IN AGAROSE-GELEN
3.2.11 DNA-FRAGMENT-ISOLATION AUS AGAROSE-GELEN (JET SORB)
3.2.12 SOUTHERN-BLOT
3.2 13 DIGOXIGENIN-LABELING UND DETEKTION MIT CHEMOLUMINESZENZ
3.3 BIOCHEMISCHE METHODEN
3.3.1 AUFREINIGUNG MONOKLONALER ANTIKOERPER AUS KULTURUEBERSTAND
3.3.2 BESTIMMUNG DES ISOTYPS MONOKLONALER ANTIKOERPER MITTELS ELISA
3.3.3 MARKIERUNG VON PROTEINEN MIT BIOTIN
2 9
3 0
3 0
3 0
3 0
3 0
3 0
3 1
3 3
3 4
3 5
3 5
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3 6
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3 7
3 7
3 7
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3 8
3 8
3 9
3 9
4 0
4 0
4 2
4 2
4 3
4 4
4 5
4 5
4 6
4 6
3.3.4 HERSTELLUNG VON ZELLYSATEN
4
Q
3.3.5 SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE)
4
7
3.3.6 WESTERN BLOT
4 7
4 ERGEBNISSE
5
0
4.1 ISOLIERUNG RUHENDER T-LYMPHOZYTEN AUS MENSCHLICHEM BLUT
50
4.2 ERMITTLUNG DER SUBOPTIMALEN CD3-ANTIKOERPER-KONZENTRATION ZUR
52
STIMULIERUNG HUMANER T-LYMPHOZYTEN
4.3 UNTERSUCHUNGEN ZUM EINFLUSS KOSTIMULIERENDER OBERFLAECHENMOLE-
54
KUELE AUF DIE CD3-INDUZIERTE T-ZELL-PROLIFERATION
4.4 UNTERSUCHUNGEN ZUR VARIABILITAET DER STIMULIERBARKEIT DER T- 5 6
LYMPHOZYTEN VERSCHIEDENER SPENDER
4.5 KOSTIMULATORISCHE WIRKUNG VERSCHIEDENER ANTIGENE VON
BORRELIA 5 8
BURGDORFERI
4.5.1 KOSTIMULATION HUMANER T-LYMPHOZYTEN MIT INTAKTEN BORRELIA
BURGDORFERI
5
8
ORGANISMEN
4.5.2 KOSTIMULATION HUMANER T-LYMPHOZYTEN DURCH LYSATPRAEPARATIONEN VON
5
G
BORRELIA BURGDORFERI
4.5.3 KOSTIMULATION HUMANER T-LYMPHOZYTEN DURCH GEREINIGTE
BORRELIA
6
0
BURGDORFERI
ANTIGENE
4.5.4 KOSTIMULATION HUMANER T-LYMPHOZYTEN MIT LIPOPEPTIDEN UND LPS
6
2
4.5.5 UNTERSUCHUNGEN ZUR KOSTIMULATION HUMANER T-LYMPHOZYTEN VON 6
4
SEROPOSITIVEN SPENDERN MIT
B. BURGDORFERI-ANTIGENEN
4.5.6 EINFLUSS DER MAXIMALEN PROLIFERATION NACH KOSTIMULATION MIT
BORRELIEN-
6
5
ANTIGENEN AUF DIE STIMULATIONS-INDEX-WERTE
4.6 KOSTIMULIERENDE WIRKUNG VON BORRELIEN-ANTIGENEN AUF 6 7
SELEKTIONIERTE T-ZELL-SUBPOPULATIONEN
4.6.1 CD
8
-POSITIVE T-LYMPHOZYTEN 6
7
4.6.2 CD4-POSITIVE T-LYMPHOZYTEN UND CD45RA /CD45RO SEPARIERTE
CD4*-ZELLEN
6
9
4.7 EINFLUSS DER BLOCKADE DES IL-2-REZEPTORS AUF DIE KOSTIMULATION 7 2
VON T-LYMPHOZYTEN
4.8 EINFLUSS DER FCS-KONZENTRATION IM KULTURMEDIUM AUF DIE KO-
73
STIMULATION VON T-LYMPHOZYTEN
4.9 PROLIFERATION NACH KOSTIMULATION MIT
B. BURGDORFERI 7 3
(ZUSAMMENFASSUNG)
4.10
ANALYSE DER LYMPHOKIN-PRODUKTION NACH KOSTIMULATION HUMANER
74
T-LYMPHOZYTEN MIT B. BURGDORFERI- ANTIGENEN
4.10.1 INTERLEUKIN 2
74
4.10.2 INTERLEUKIN 4 7
6
4.10.3 INTERLEUKIN
6
77
4.10.4 TUMOR-NEKROSE-FAKTOR A
7
G
4.10.5
INTERFERON Y 8 0
4.11
NACHWEIS VON LYMPHOKIN-MRNA IN STIMULIERTEN T-LYMPHOZYTEN 8 1
DURCH DIE POLYMERASE-KETTEN-REAKTION (PCR)
4.11.1
BESTIMMUNG DER OPTIMALEN PCR-BEDINGUNGEN
8
2
4.11.2
BESTIMMUNG DER PCR-SENSITIVITAET 8 2
4.11.3
NACHWEIS UND MENGEN-BESTIMMUNG DER SS-AKTIN-MRNA
8
3
4.11.4
NACHWEIS DER LNTERLEUKIN-1SS-MRNA
8
4
4.11.5
NACHWEIS DER LNTERLEUKIN-2-MRNA
8
5
4.11.6
NACHWEIS DER LNTERLEUKIN-4-MRNA UND LNTERLEUKIN-5-MRNA
8
6
4.11.7 NACHWEIS DER LNTERLEUKIN
6
-MRNA
8
6
4.11.8
NACHWEIS DER INTERFERONY-MRNA
8
8
4.11.9
NACHWEIS DER LNTERLEUKIN-10-MRNA
8
8
4.10.10 NACHWEIS DER GMCSF-MRNA
39
4.10.11 NACHWEIS DER TNFA-MRNA 89
4.12
ZYTOKINPRODUKTION NACH KOSTIMULATION HUMANER T-LYMPHOZYTEN 8 9
MIT BORRELIA BURGDORFERI (ZUSAMMENFASSUNG)
4.13
INDUKTION ZYTOTOXISCHER EFFEKTORZELLEN NACH KOSTIMULATION MIT 9 0
INTAKTEN B. BURGDORFERI- ORGANISMEN UND BORRELIEN-ANTIGENEN
4.14
UNTERSUCHUNGEN ZUR SIGNALTRANSDUKTION IN T-LYMPHOZYTEN NACH 9 2
KOSTIMULATION MIT LIP-OSPA UND CD28-ANTIKOERPER
4.15 UNTERSUCHUNGEN ZUR BINDUNG VON LIP-OSPA AN HUMANE T-LYMPHO- 9 5
ZYTEN
5 DISKUSSION 9 9
5.1
EXPERIMENTELLES IN VITRO SYSTEM 9 9
5.2 PROBLEME DES EXPERIMENTELLEN SYSTEMS 101
5.2.1
VARIABILITAET DER PROLIFERATION IN ABHAENGIGKEIT VOM KOSTIMULUS 101
5.2.2
SPENDERABHAENGIGE VARIABILITAET DER PROLIFERATION 102
5.3 KOSTIMULATORISCHE WIRKUNG VON
B. BURGDORFERI-ANTIGENEN AUF 103
HUMANE T-LYMPHOZYTEN
5.4 UNTERSUCHUNGEN ZUR BINDUNG VON OSPA AN HUMANE T-LYMPHOZYTEN 106
5.5 ANALYSE DER ZYTOKIN-PRODUKTION NACH KOSTIMULATION HUMANER 107
T-LYMPHOZYTEN MIT BORRELIEN-ANTIGENEN
5.6 ANALYSE DER SIGNAL-UEBERTRAGUNGSWEGE IN T-LYMPHOZYTEN NACH 111
KOSTIMULATION MIT OSPA
5.7 INDUKTION ZYTOTOXISCHER EFFEKTORFUNKTIONEN NACH KOSTIMULATION 112
HUMANER T-LYMPHOZYTEN MIT LIP-OSPA
5.8 BEDEUTUNG DER KOSTIMULATORISCHEN WIRKUNG VON
BORRELIA 113
BURGDORFERI FUER DIE PATHOGENESE DER LYME-BORRELIOSE
5.9 AUSBLICK 116
6 ZUSAMMENFASSUNG
11 7
1 2 O
1 43
LEBENSLAUF
DANKSAGUNG
7 LITERATUR
EIGENE PUBLIKATIONEN UND KONGRESSBEITRAEGE |
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