Das Gen swi10 + von Schizosaccharomyces pombe: Nukleotidexcisionsreparatur und Paarungstyp-switching
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
1
1.1
DAS
PAARUNGSTYP-SYSTEM
3
1.2
MUTANTEN
MIT
VERRINGERTER
HAEUFIGKEIT
DES
PT
SWITCHING
7
1.3
SWITCHING
MUTANTEN
MIT
ERHOEHTER
STRAHLENSENSITIVITAET
8
1.4
NUKLEOTIDEXCISIONSREPARATUR
(NER)
8
1.5
ZIELSETZUNG
DER
ARBEIT
12
2
MATERIAL
UND
METHODEN
13
2.1
GERAETE
13
2.2
MEDIEN
14
2.3
STAEMME,
VEKTOREN
UND
OLIGONUKLEOTIDE
14
2.3.1
S.
POMBE
STAEMME
14
2.3.2
S.
CEREVISIAE
STAEMME
15
2.3.3
E.
COLI
STAEMME
16
2.3.4
VEKTOREN
16
2.3.5
VERWENDETE
OLIGONUKLEOTIDE
17
2.4
STANDARDMETHODEN
ZUR
UNTERSUCHUNG
VON
S.
POMBE
19
2.4.1
LODBEDAMPFUNG
VON
KOLONIEN
19
2.4.2
PAARUNGSTYPTEST
19
2.4.3
UV-INAKTIVIERUNGSKURVEN
19
2.5
ISOLIERUNG
VON
DNA
20
2.5.1
ISOLIERUNG
VON
DNA
AUS
E.
COLI
20
2.5.2
ISOLIERUNG
CHROMOSOMALER
DNA
AUS
S.
CEREVISIAE
UND
S.
POMBE
20
2.6
SPALTUNG
VON
DNA
MIT
RESTRIKTIONSENZYMEN
21
2.7
DEPHOSPHORYLIERUNG
21
2.8
HERSTELLUNG
VON
BLUNT
ENDS
21
2.9
ISOLIERUNG
VON
DNA
FRAGMENTEN
AUS
AGAROSE
GELEN
NACH
WEICHENHAHN
22
2.10
PCIA-EXTRAKTION
UND
FAELLUNG
VON
DNA
AUS
LOESUNGEN
22
2.11
LIGATION
VON
DNA
22
2.12
TRANSFORMATIONEN
23
2.12.1
TRANSFORMATION
VON
S.
POTNBE
UND
VON
S.
CEREVISIAE
23
2.12.2
TRANSFORMATION
VON
E.
COLI
NACH
HANAHAN
23
2.13
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
24
2.13.1
ELEKTROPHORESE
VON
DNA
IN
AGAROSEGELEN
24
2.14
TRANSFER
VON
DNA
AUF
NITROCELLULOSE
(SOUTHERN
BLOT)
24
2.15
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
MIT
DEM
MULTIPRIME
LABELLING KIT
25
2.16
HYBRIDISIERUNG
UND AUTORADIOGRAPHIE
25
2.16.1
HYBRIDISIERUNG
VON
DNA
25
2.17
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(PCR)
25
2.17.1
REAKTIONEN
UND
ENZYME
26
2.18
DNA-SEQUENZIERUNG
26
2.19
AUFTRENNUNG
IM
POLYACRYLAMIDGEL
27
2.20
ARBEITEN
MIT
PROTEINEN
28
2.20.1
EXTRAKTION
VON
PROTEINEN
AUS
S.
POMBE
UNTER
DENATURIERENDEN
BEDINGUNGEN
28
2.20.2
SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
28
2.20.3
HERSTELLUNG
VON
SDS-POLYACRYLAMIDGELEN
FUER
DIE
TRENNUNG
VON
PROTEINEN
29
2.20.4
VORBEREITUNG
DER
PROBEN
UND
GELELEKTROPHORESE
30
2.20.5
GELFAERBUNG
MIT
COOMASIE-BLAU
30
2.20.6
BESTIMMUNG
DER
PROTEINKONZENTRATION
30
2.20.7
IMMUNOLOGISCHER
NACHWEIS
VON
PROTEINEN
31
2.20.7.1
WESTERN-BLOT
31
2.20.7.2
IMMUNODETEKTION
31
2.20.8
DAS
TWO-HYBRID
SYSTEM
32
2.20.8.1
VEKTOREN
FUER
DAS
TWO-HYBRID
SYSTEM
33
2.20.8.2
QUALITATIVER
TEST
DER
PROTEINWECHSELWIRKUNG
35
2.20.8.3
QUANTITATIVER
TEST
DER
PROTEINWECHSELWIRKUNG
35
3
VERSUCHE
UND
ERGEBNISSE
36
3.1
EXPRESSION
VON
RADIO
AUS
S.
CEREVISAE
IN
S.
POMBE
36
3.2
NACHWEIS
DES
SWILO
PROTEINS
IN
S.
POMBE
39
3.2.1
HERSTELLUNG
EINES
SWILO
HIS-TAG
FUSIONSPROTEINS
FUER
DIE
EXPRESSION
IN
S.
POMBE
39
3.2.2
KOMPLEMENTIERUNG
DER
SWILO
MUTATION
DURCH
DAS
SWILO
6HIS-TAG
FUSIONSPROTEIN
40
3.2.3
IMMUNODETEKTION
DES
SWILO
6HIS
FUSIONSPROTEINS
41
3.3
KONSTRUKTION
UND
CHARAKTERISIERUNG
VERSCHIEDENER
SWILO
ALLELE
42
3.3.1
DELETION
DES
POSTULIERTEN
DNA-BINDENDEN
DOMAENE
IN
SWILO
42
3.3.2
EXPRESSION
VON
SWIL0A80-96
IN
EINER
SWILO-154
MUTANTE
45
3.3.3
ERZEUGUNG
VON
PUNKTMUTATIONEN
IN
DER
POSTULIERTEN
DNA
BINDENDEN
DAMAENE
VON
SWILO
47
3.3.4
CHARAKTERISIERUNG
DER
PUNKTMUTATIONEN
51
3.3.5
UNTERSUCHUNG
AUF
PROTEINWECHSELWIRKUNG
ZWISCHEN
RADL6
UND
SWIL0A80-96
54
3.3.6
DELETION
DER
AMINOSAEUREN
111-252
VON
SWILO
56
3.3.7
EXPRESSION
VON
SWILOALLL-252
IN
EINER
SWILO-154
MUTANTE
56
3.3.8
UNTERSUCHUNG
AUF
PROTEINWECHSELWIRKUNG
ZWISCHEN
SWILOALLL-252
UND
SWILOAL-LLO
UND
RADL6
58
3.4
EXPRESSION
VON
ERCC1
IN
S.
POTNBE
60
3.4.1
IMMUNODETEKTION
VON
ERCC1
IN
S.
PORNBE
60
3.4.2
UNTERSUCHUNG
DER
PROTEINWECHSELWIRKUNG
ZWISCHEN
ERCC1
UND
RADLOE
62
3.4.3
DELETION
DER
AMINOSAEUREN
291-297
VON
ERCC1
64
3.4.4
KOMPLEMENTIERUNG
DER
MUTATION
SWILO-154
DURCH
ERCC1A291-297
64
3.4.5
UNTERSUCHUNG
DER
PROTEINWECHSELWIRKUNG
ZWISCHEN
RADLOE
UND
ERCC1A291-297
66
3.4.6
DELETION
DER
AMINOSAEUREN
173-297
VON
ERCC1
67
3.4.7
CHARAKTERISIERUNG
DER
ALLELS
ERCC1A1
73-297
68
3.4.8
UNTERSUCHUNG
VON
SWILO-ERCCL
HYBRIDGENEN
70
3.5
UEBEREXPRESSION
VON
ERCC1
ALLELEN
72
3.5.1
UEBEREXPRESSION
VON
ERCC1
IM
WILDTYP
72
3.5.2
UEBEREXPRESSION
VON
ERCC1
IN
RADL6::URA4
+
STAEMMEN
73
3.5.3
UEBEREXPRESSION
VON
ERCC1A291-297
IN
RADL6::URA4
+
STAEMMEN
74
4
DISKUSSION
75
5
ZUSAMMENFASSUNG
85
6
LITERATURVERZEICHNIS
87
7
ANHANG
I |
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| spelling | Rödel, Carsten 1966- Verfasser (DE-588)120055228 aut Das Gen swi10 + von Schizosaccharomyces pombe Nukleotidexcisionsreparatur und Paarungstyp-switching von Carsten Rödel 1998 [6], 98, XX S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Braunschweig, Techn. Univ., Diss., 1997 Switching Immunologie (DE-588)4318167-3 gnd rswk-swf Mutante (DE-588)4256709-9 gnd rswk-swf Gen (DE-588)4128987-0 gnd rswk-swf Schizosaccharomyces pombe (DE-588)4179645-7 gnd rswk-swf Ultraviolett (DE-588)4186733-6 gnd rswk-swf Paarungstyp (DE-588)4298252-2 gnd rswk-swf DNS-Reparatur (DE-588)4150347-8 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Schizosaccharomyces pombe (DE-588)4179645-7 s Mutante (DE-588)4256709-9 s Paarungstyp (DE-588)4298252-2 s DNS-Reparatur (DE-588)4150347-8 s Ultraviolett (DE-588)4186733-6 s DE-604 Switching Immunologie (DE-588)4318167-3 s Gen (DE-588)4128987-0 s DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=008118996&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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