Expression eines immunogenen Proteins aus dem parasitären Nematoden Dirofilaria immitis in Caenorhabditis elegans:
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1998
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
1
2
MATERIAL
UND
METHODEN
11
3
ERGEBNISSE
46
3.1
DIPLA2
-
EIN
LARVALES
ANTIGEN
AUS
DIROFILARIA
IMMITIS
46
3.11
BEI
C.
ELEGANS
SIND
KEINE
ZU
EPLA2
HOMOLOGEN
SEQUENZEN
BEKANNT
_
46
3.1.2
DIE
ANALYSE
DER
PEPTIDSTRUKTUR
VON
DIPLA2
GIBT
HINWESE
AUF
DIE
FUNKTION
48
3.1.3
DIPLA2
BESITZT
HOMOLOGIEN
ZU
SEQUENZEN
MEHRERER
ANDERER
LARVALE
FILARIEN-PROTEINE
48
3.1.4
DIE
DIGOXYGENIN-MARKIERTE
FIP/A2-SONDE
HYBRIDISIERT
MIT
KEINER
DER
SEQUENZEN
AUF
EINEM
GENOMISCHEN
YAC
GRID
VON
C.
ELEGANS
50
3
1.5
DIPLA2
BESITZT
HOMOLOGIEN
ZUR
KONSERVIERTEN
REGION
DES
AKTIVEN
3.1.6
ZENTRUMS
VON
PHOSPHOLIPASE
A2
52
3.1.7
VEGLEICH
DE
AMINOSAEURESEQUENZEN
AKTIVE
ZENTREN
VERSCHIEDENE
SEKRETIERTE
PHOSPHOLIPASEN
A2
MIT
DE
SEQUENZ
VON
DIPLA2
53
3
2
DIPLA2
WURDE
IN
DREI
VERSCHIEDENE
C
ELEGANS-SPEZISSSCHE
EXPRESSIONSVEKTOREN
KLONIERT
53
3.2.1
DIE
PLASMID-DNA
WIRD
AUF
DIE
FL-GENEATION
DER
INJIZIERTEN
TIEE
VERTEILT
56
3.3
EXPRESSION
57
3.3
1
REKOMBINANTE
DIPLA-WUERME
ZEIGTEN
MORPHOLOGISCHE
VERAENDERUNGEN
57
3.3
2
MIT
PPD
30
3I-DIPLA2
TRANSFORMIERTE
TIERE
ZEIGTEN
KEINE
DEFEKTE
60
3.3.3
DIE
TRANSFORMATION
VON
C.
ELEGANS
MIT
DIPLA2-HITZESCHOCK
KONSTRUKTEN
FUEHRTE
ZU
ROLLER
LINIEN,
DIE
SEHR
BALD
WIEDER
AUSSTARBEN
_
60
3.3.4
DIE
SCHAEDIGUNG
DER
NACHKOMMEN
WURDE
DURCH
DAS
EXPRESSIONSPRODUKT
DIPL
A2
VERURSACHT
61
3.4
DIE
MRNA
VON
UEPLA2
KONNTE
DURCH
EINE
PCR-REAKTION
NACHGEWIESEN
WERDEN
62
33
DURCH
DIE
MOLEKULARE
MARKIERUNG
VON
DIPLA2
KONNTE
DAS
GENPRODUKT
SPEZIFISCH
NACHGEWIESEN
UND
AUFGEREINIGT
WERDEN
_
65
3.5.1
DIE
SEQUENZ
VON
DIPLA2
WURDE
MIT
EINEM
YYHISTIDIN
TAG
"
MARKIERT
_
66
3.5.1.1
AENDERUNG
DER
DIPLA2-PBLUESCRIPT
SEQUENZ
DURCH
MISMATCH
PRIMER
67
3.5.2
DAS
DIPLA-HIS
FRAGMENT
WURDE
SEQUENZIERT
69
3.5.2.1
LIGATION
VON
DIPLA-HIS
IN
DEN
LINEARISIERTEN
EXPRESSIONSVEKTOR
PPD
95.86
70
3.5.2.2
C.
ELEGANS
WURDE
MIT
DEM
DIPLA-HIS
PLASMID
TRANSFORMIERT
71
3.5.3
DIE
INJEKTION
VON
HOHEN
VEKTORKONZENTRATIONEN
FUEHRTE
ZU
REKOMBINANTEN
LINIEN
MIT
STARK
VERRINGERTER
NACHKOMMENZAHL
71
3.6
DIE
PLASMID
DNA
WURDE
IN
DAS
GENOM
VON
C
ELEGANS
INTEGRIERT
74
3.7
PROTEIN
NACHWEIS
DURCH
WESTERN
BLOTS
75
3.7.1
LOESLICHE
PROTEINE
AUS
WILDTYP
UND
TRANSGENEN
C.
ELEGANS
WURDEN
DURCH
SDS-GELELEKTROPHORESE
AUFGETRENNT
75
3.7.2
DIPLA2
KONNTE
DURCH
POLYKLONALE
ANTIKOERPER
NACHGEWIESEN
WERDEN
_
76
3.7.3
IN
REKOMBINANTEN
WUERMERN
MARKIERTEN
POLYKLONALE
ANTIKOERPER
EIN
21
KDA-PROTEIN
76
3.7.4
DIPLA-HIS
KONNTE
IN
PROTEINEXTRAKTEN
REKOMBINANTER
TIERE
NACHGEWIESEN
WERDEN
77
3.7.5
GEGEN
BACW/OWAS-DIPLA
GERICHTETE
ANTIKOERPER
MARKIERTEN
AUCH
C.
ELEGANS-EXPRIMIERTES
DIPLA
80
3.7.6
DIPLA-HIS
WURDE
AUCH
IN
NACHKOMMEN
ROENTGENBESTRAHLTER
DIPLA
HIS
ROLLER
EXPRIMIERT
82
3.8
IMMUNHISTOCHEMIE
_
83
3.8.1
IMMUNHISTOCHEMISCHE
UNTERSUCHUNGEN
MIT
GEGEN
DIPLA2
GERICHTETEN
_
POLYKLONALEN
ANTIKOERPERN
ERGABEN
EINE
UNPEZIFISCHE
KEMFAERBUNG
83
3.8.2
DIPLA-HIS
KONNTE
IN
REKOMBINANTEN
TIEREN
MIT
MONOKLONALEN
ANTIKOERPERN
NACHGEWIESEN
WERDEN
83
3.8.3
UNTERSUCHUNG
DER
REKOMBINANTEN
DIPLA-ROLLER
IM
LICHTMIKROSKOPISCHEN
HELLFELD
90
3.9
IMMUNISIERUNGSVERSUCHE
92
3.9
1
DIE
IMUNISIERUNG
EINES
HUNDES
MIT
C.
ELEGANS-PROTEIN
FUEHRTE
ZU
EINEM
ANSTEIGEN
DES
ANTIKOERPERTITERS
IM
SERUM
92
3.9.2
KANN
IN
HUNDEN
EINE
SPEZIFISCHE
IMMUNANTWORT
GEGEN
C.
ELEGANS
EXPRIMIERTES
DIPLA2
HERVORGERUFEN
WERDEN
'
92
4
DISKUSSION
94
5
ZUSAMMENFASSUNG
107
6
LITERATURVERZEICHNIS
109
7
ANHANG
I |
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