Untersuchungen zur Isolierung und Struktur des Eisen-Molybdän-Cofaktors der Nitrogenase:
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I
NHALTSVERZEICHNIS
A
BKUERZUNGEN
.V
II.
M
ATERIAL
UND
M
ETHODEN
.
7
1.
ORGANISMEN
.
7
2.
NAEHRMEDIEN
.
7
2.1
NAEHRLOESUNG
.
7
2.2
AGAR-NAEHRBOEDEN
.
8
3.
ZELLANZUCHTEN
.
8
3.1
STAMMHALTUNG
.
8
3.2
VORKULTUREN
.
9
3.3
HAUPTKULTUREN
.
9
3.4 GROSSKULTUREN
IM
FERMENTERMASSSTAB
.
9
4.
EXTINKTIONSMESSUNGEN
VON
ZELLSUSPENSIONEN
.
9
5.
ZELLEMTE
.
10
6.
ZELLAUFSCHLUSS
.
10
6.1
AUFSCHLUSS
MITTELS
FRENCH-PRESSE
.
10
6.2
LYSOZYM-AUFSCHLUSS
.
11
7.
GEWAEHRLEISTUNG
ANAEROBER
BEDINGUNGEN
.
12
7.1
REINIGUNG
DER
VERWENDETEN
GASE
.
12
7.2 VORBEREITUNG
VON
GEFAESSEN
UND
LOESUNGEN
.
12
7.3 UEBERFUEHREN
VON
ENZYMPROBEN
.
13
I
NHALTSVERZEICHNIS
H
7.4 UEBERPRUEFUNG
DES
REDUKTIONSZUSTANDES
.
13
8.
REINIGUNG
DER
NITROGENASEKOMPONENTEN.
13
8.1
CHROMATOGRAPHIE
AN
DEAE-SEPHACEL
.
13
8.2
GEIFILTRATION
MIT
SEPHACRYL
S-400
.
15
8.3
AUFKONZENTRIERUNG
DER
FRAKTIONEN
.
15
9.
BESTIMMUNG
DER
NITROGENASEAKTIVITAET.
16
10.
PROTEINBESTIMMUNG
.
17
10.1
PROTEINBESTIMMUNG
GANZER
ZELLEN
.
18
10.2
PROTEINBESTIMMUNG
ZELLFREIER
EXTRAKTE
.
18
11.
SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
.
18
11.1
HERSTELLUNG
DES
GELS
.
19
11.2
VORBEREITUNG
DER
PROTEINPROBEN
.
20
11.3
DURCHFUEHRUNG
DER
ELEKTROPHORESE
.
20
11.4
PROTEINFAERBUNG
UND
ENTFAERBUNG
DER
GELE
.
20
11.5
PROTEINMARKER
FUER
MOLEKULARGEWICHTSBESTIMMUNGEN
.
21
12.
IMMUNOLOGISCHER
NACHWEIS
DER
DINITROGENASE
.
21
12.1
GEWINNUNG
DES
ANTISERUMS
.
21
12.2
OUCHTERLONY-DOPPELIMMUNDIFFUSIONSTEST
.
22
13.
EXTRAKTION
DES
EISEN-MOLYBDAEN-COFAKTORS.
22
13.1
KONVENTIONELLE
EXTRAKTION
NACH
SHAH
UND
BRILL
(1977)
.
23
13.2
EXTRAKTION
NACH
MCLEAN
ET
AL.
(1989)
.
23
13.3
MODIFIZIERTE
EXTRAKTIONSMETHODEN
.
24
14.
REKONSTITUTIONSTEST
.
25
15.
UMSETZUNG
DES
EXTRAHIERTEN
FEMOCO
MIT
LIGANDEN
.
25
15.1
UMSETZUNG
MIT
FESTEN
UND
FLUESSIGEN
SUBSTANZEN
.
25
I
NHALTSVERZEICHNIS
M
15.2
UMSETZUNG
MIT
STICKSTOFFMONOXID.
26
16.
METALLANALYSEN
.
26
16.1
PROBENVORBEREITUNG
FUER
METALLANALYSEN
.
26
16.2
ICP/MS-METALLANALYSEN
.
27
17.
ELEKTRONENSPINRESONANZ
(ESR)-SPEKTROSKOPISCHE
UNTERSUCHUNGEN
.
27
17.1
PRAEPARATION
DER
ESR-PROBEN
.
27
17.2
ESR-SPEKTROSKOPISCHE
MESSUNGEN
.
27
17.3
SPINQUANTIFIZIERUNGEN
.
27
18
CHEMIKALIEN
.
28
III.
E
RGEBNISSE
.
_
.
_
._
.
_
._
_
_
_
_
30
1.
ISOLIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DER
NITROGENASEKOMPONENTEN
.
30
2.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
KONVENTIONELLEN
EXTRAKTION
DES
FEMOCO
NACH
SHAH
UND
BRILL
(1977)
.
32
3.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
REKONSTITUTION
.
34
3.1
OPTIMIERUNG
DER
ZELLANZUCHT
VON
A.
VINELANDII
DJ
141.
34
3.2
REKONSTITUTIONSVERSUCHE
NACH
KONVENTIONELLER
EXTRAKTION
.
37
4.
UMSETZUNG
DES
EXTRAHIERTEN
FEMOCO
MIT
LIGANDEN
.
37
4.1
UMSETZUNG
MIT
FESTEN
UND
FLUESSIGEN
SUBSTANZEN
.
37
4.2
UMSETZUNG
MIT
STICKSTOFFMONOXID.
39
5.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
DEAE-SEPHACEL-CHROMATOGRAPHISCHEN
EXTRAKTION
DES
FEMOCO
.
44
6.
MODIFIZIERTE
EXTRAKTIONSVERFAHREN
.
47
6.1
MODIFIZIERTE
EXTRAKTION
UNTER
VERWENDUNG
VON
2-BUTANON
.
47
6.2
MODIFIZIERTE
EXTRAKTION
UNTER
VERWENDUNG
VON
ACETONITRIL
.
53
6.3
MODIFIZIERTE
EXTRAKTION
UNTER
VERWENDUNG
VON
NMF
.
54
INHALTSVERZEICHNIS
IV
I
V
.
UISHUSSIUN
YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY
JJ
1.
ISOLIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DER
NITROGENASEKOMPONENTEN
.
55
2.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
KONVENTIONELLEN
EXTRAKTION
DES
FEMOCO
NACH
SHAH
UND
BRILL
(1977)
.
55
3.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
REKONSTITUTION
.
56
4.
UMSETZUNG
DES
EXTRAHIERTEN
FEMOCO
MIT
LIGANDEN
.
57
4.1
UMSETZUNG
MIT
FESTEN
UND
FLUESSIGEN
SUBSTANZEN
.
57
4.2
UMSETZUNG
MIT
STICKSTOFFMONOXID.
58
5.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
DEAE-SEPHACEL-CHROMATOGRAPHISCHEN
EXTRAKTION
DES
FEMOCO
.
62
6.
MODIFIZIERTE
EXTRAKTION
DES
FEMOCO
.
63
6.1
VERGLEICH
DER
KONVENTIONELLEN
UND
DER
MODIFIZIERTEN
EXTRAKTIONSMETHODE
.
63
6.2
EINFLUSS
DER
KATIONEN
UND
DER
ANIONEN
AUF
DAS
EXTRAKTIONSERGEBNIS
.
66
6.3
DER
EINFLUSS
DES
EXTRAKTIONS-LOESEMITTELS
.
68
6.4
ESR-SPEKTROSKOPISCHE
UNTERSUCHUNGEN
.
69
6.5
REKONSTITUTIONSVERSUCHE.
71
V.
Z
USAMMENFASSUNG
.
.
---------------------------------
73
VI.
L
ITERATURVERZEICHNIS
.
-
.
-------------------------------------------
76
A
NHANG
DANKSAGUNGEN
LEBENSLAUF |
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