Signaltransduktion durch die Todesdomäne des p55-Tumor-Nekrose-Faktor-Rezeptors: Untersuchungen zur Aktivierung der sauren Sphingomyelinase durch p55-Tumor-Nekrose-Faktor-Rezeptor assoziierte Proteine
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| Published: |
München
Utz, Wiss.
1998
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3
INHALTSVERZEICHNIS
VERZEICHNIS
DER
VERWENDETEN
ABKUERZUNGEN.
5
ZUSAMMENFASSUNG
.
7
EINLEITUNG
9
P
ROGRAMMIERTER
Z
ELLTOD
(A
POPTOSE
)
.
9
ZELLTOD-INDUZIERENDE
MEMBRAN-REZEPTOREN
.
14
TNF-R
EZEPTOR
S
IGNALTRANSDUKTION
.
17
D
IE
SAURE
S
PHINGOMYELINASE
,
EIN
TNF
RESPONSIBLES
E
NZYM
.
22
FRAGESTELLUNG
.
.27
MATERIAL
UND
METHODEN
.
.
28
C
HEMIKALIEN
UND
E
NZYME
.
28
B
IOLOGISCHE
R
EAGENZIEN
.
29
Z
ELLKULTUR
UND
Z
ELLINIEN
.
29
V
EKTOREN
UND
P
LASMIDKONSTRUKTION
.
30
T
RANSFEKTION
VON
Z
ELLINIEN
DURCH
K
ALZIUM
-P
HOSPHAT
-P
RAEZIPITATION
.
30
B
INDUNG
VON
TRADD
AUF
P
EPTIDBANKEN
AUS
DEM
TNF-R55
.
30
P
ROTEIN
-I
NTERAKTION
VON
TRADD
UND
FADD
IN
INTAKTEN
Z
ELLEN
.
31
R
ADIOAKTIVE
M
ARKIERUNG
VON
5'-OH
E
NDEN
DURCH
P
HOSPHORYLIERUNG
.
32
ANNEALING
VON
OLIGONUKLEOTIDEN
.
32
N
UKLEAERE
E
XTRAKTE
.
32
N
ACHWEIS
VON
NF
-
K
B
DURCH
G
ELRETARDIERUNGSEXPERIMENTE
.
33
P
RAEPARATION
VON
Z
ELLEXTRAKTEN
.
34
W
ESTERN
B
LOT
A
NALYSE
.
34
S
TIMULIERUNG
VON
Z
ELLEN
.
35
S
AURE
S
PHINGOMYELINASE
(A-SM
ASE
)
A
KTIVITAETSMESSUNG
.
35
N
EUTRALE
S
PHINGOMYELINASE
(N-SM
ASE
)
A
KTIVITAETSMESSUNG
.
35
Z
ELLZYKLUS
A
NALYSE
MITTELS
P
ROPIDIUM
J
ODID
F
AERBUNG
(DNA-F
RAGMENTIERUNG
)
.
36
A
NNEXIN
V
A
POPTOSE
T
EST
.
37
ERGEBNISSE
_
38
C
HARAKTERISIERUNG
DER
TRADD-B
INDUNGSTELLE
.
38
UE
BEREXPRESSION
VON
TRADD
AKTIVIERT
TNF
ABHAENGIG
DIE
SAURE
SM
ASE
.
41
D
IE
A
KTIVIERUNG
DER
NEUTRALEN
S
PHINGOMYELINASE
(N-SM
ASE
)
VERLAEUFT
UNABHAENGIG
VON
TRADD
.
41
4
_
A
KTIVIERUNG
DER
A-SM
ASE
IST
UNABHAENGIG
VON
TRAF2
.
44
A
KTIVIERUNG
DER
A-SM
ASE
IST
UNABHAENGIG
VON
RIP
.
47
FADD
BINDET
IN
INTAKTEN
ZELLEN
AN
DAS
TNF-R55
ASSOZIIERTE
PROTEIN
TRADD
.
50
FADD
IST
AN
DER
AKTIVIERUNG
DER
A-SMASE
BETEILIGT
.
52
CD95-REZEPTOR
(FAS/APO
1)
INDUZIERT
UBER
FADD
DIE
AKTIVIERUNG
DER
A-SM
A
SE
.
52
K
INETISCHE
U
NTERSUCHUNGEN
DER
SAUREN
S
PHINGOMYELINASE
IN
TRANSFIZIERTEN
293
Z
ELLEN
.
56
T
RANSIENTE
A
KTIVIERUNG
DER
A-SM
ASE
DURCH
TNF
IN
293
Z
ELLEN
.
58
K
EINE
A
KTIVIERUNG
VON
A-SM
ASE
DURCH
C
ASPASEN
-8/
A
(FLICE)
.
60
K
EINE
AE
NDERUNG
DER
A-SM
ASE
A
KTIVITAET
DURCH
DIE
E
XPRESSION
EINER
DOMINANT
NEGATIVEN
C
ASPASE
-8
(FLICE-DN)
.
62
S
PEZIFISCHE
C
ASPASE
P
EPTID
-I
NHIBITOREN
VERRINGERN
DIE
A
KTIVITAET
DER
A-SM
ASE
.
62
I
NTERLEUKIN
-
1
SS
KONVERTIERENDES
E
NZYM
(ICE)
VERSTAERKT
DIE
TNF
INDUZIERTE
A
KTIVIERUNG
DER
A-SM
ASE
.
67
V
ERRINGERTE
APOPTOTISCHE
R
EAKTION
IN
A-SM
ASE
D
EFIZIENTEN
Z
ELLEN
.
69
R
EKONSTITUTION
DER
A-SM
ASE
IN
NP-Z
ELLEN
VERSTAERKT
DIE
APOPTOTISCHE
R
EAKTION
.
71
P
HARMAKOLOGISCHE
I
NHIBITION
DER
A-SM
ASE
A
KTIVITAET
REDUZIERT
DIE
APOPTOTISCHE
R
EAKTION
.
71
DISKUSSION.
_
75
B
INDUNG
VON
TRADD
AN
TNF-R55
.
76
TRADD
UND
FADD
VERMITTELT
DIE
AKTIVIERUNG
DER
A-SMASE
.
79
R
OLLE
VON
A-SM
ASE
BEI
DER
ZYTOKIN
-
VERMITTELTEN
A
POPTOSE
.
85
LITERATURVERZEICHNIS.
89
D
ANKSAGUNG
.
103
L
EBENSLAUF
.
104 |
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