Kohlenhydrat-unabhängiger Proteintransport in die Lysosomen:
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1997
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE:
0
ABKUERZUNGEN
1
1
EINLEITUNG
3
1.1
SYNTHESE
UND
POSTTRANSLATIONALE
MODIFIKATIONEN
LYSOSOMALER
ENZYME
3
1.2
MANNOSE-6-PHOSPHAT-ABHAENGIGER
T
RANSPORT
6
1.3
MANNOSE-6-PHOSPHAT-UNABHAENGIGER
TRANSPORT
11
1.4
PROTEINSORTIERUNG
MITTELS
TRANSPORTVESIKEL
12
1.5
KATHEPSIN
D
15
1.6
LYSOZYM
16
1.7
ZIELSETZUNG
17
2
MATERIAL
UND
METHODEN
18
2.1
MATERIAL
18
2.1.1
LABORGERAETE
18
2.1.2
CHEMIKALIEN
19
2.1.3
RADIOCHEMIKALIEN
21
2.1.4
ENZYME
UND
ANTIKOERPER
21
2.1.5
EUKARYOTE
ZELLINIE
21
2.1.6
MATERIAL
FUER
DIE
ZELLKULTUR
22
2.1.7
MEDIEN
UND
WASCHLOESUNGEN
FUER
EUKARYOTE
ZELLEN
22
2.2
METHODEN
23
2.2.1
ZELLKULTUR
23
2.2.2
ZELLFRAKTIONIERUNG
23
2.2.2.1
GRADIENTENPRAEPARATION
24
2.2.3
METABOLISCHE
MARKIERUNG
25
2.2.4
PROTEINPRAEZIPITATION
26
2.2.4.1
ACETONFAELLUNG
26
2.2.4.2
IMMUNPRAEZIPITATION
26
2.2.5
PROTEIN-GELELEKTROPHORESE
28
2.2.5.1
AUFTRENNUNG
VON
PROTEINEN
IN
SDS-POLYACRYLAMIDGELEN
28
2.2.5.2
VORBEREITUNG
DER
GELE
FUER
DIE
FLUOROGRAPHIE
30
2.2.5.3
QUANTITATIVE
GELAUSWERTUNG
30
2.2.6
ENZYMAKTIVITAETSBESTIMMUNGEN
31
2.2.6.1
SS-HEXOSAMINIDASE-TEST
(SS-N-ACETYLGLUCOSAMINIDASE;
EC
3.2.1.52)
31
2.2.6.2
A-GLUCOSIDASE
II-TEST
(EC
3.1.4.45)
32
2.2.6.3
GALAKTOSYLTRANSFERASE-TEST
(EC
2.4.1.90)
32
2.2.7
ISOLIERUNG
GENOMISCHER
DNA
34
2.2.8
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
34
3
ERGEBNISSE
36
3.1
INTRAZELLULAERER
TRANSPORT
VON
LYSOZYM
UND
KATHEPSIN
D
36
3.1.1
SUBZELLULAERE
FRAKTIONIERUNG
MIT
HILFE
EINES
SACCHAROSE-STUFENGRADIENTEN
36
3.1.2
SUBZELLULAERE
FRAKTIONIERUNG
MIT
HILFE
EINES
LINEAREN
SACCHAROSEGRADIENTEN
39
3.1.3
SUBZELLULAERE
LOKALISIERUNG
NACH
30
MIN
PULSE-MARKIERUNG
41
3.1.4
SUBZELLULAERE
LOKALISIERUNG
NACH
60
MIN
PULSE-MARKIERUNG
42
3.1.5
SUBZELLULAERE
LOKALISIERUNG
NACH
60
MIN
PULSE-MARKIERUNG
UND
15
MIN
CHASE
44
3.1.6
SUBZELLULAERE
LOKALISIERUNG
NACH
60
MIN
PULSE-MARKIERUNG
UND
90
MIN
CHASE
46
3.1.7
SUBZELLULAERE
LOKALISIERUNG
NACH
18
H
PULSE-MARKIERUNG
UND
8
H
CHASE
48
3.1.8
SUBZELLULAERE
LOKALISIERUNG
UNTER
EINFLUSS
VON
TPA
50
3.1.9
TPA-INDUZIERTE
PHOSPHORYLIERUNG
VON
PROTEINEN
IN
DER
GOLGI-FRAKTION
55
3.4.10
WIRKUNG
VON
BREFELDIN
A
UND
VERMINDERTER
TEMPERATUR
AUF
DEN
TRANSPORT
VON
LYSOZYM
57
3.1.11
SUBZELLULAERE
LOKALISIERUNG
UNTER
EINFLUSS
VON
AMMONIUMCHLORID
62
3.2
EXPRESSION
UND
SEGREGATION
VON
KATHEPSIN
D
UND
LYSOZYM
NACH
EINWIRKEN
VERSCHIEDENER
WIRKSTOFFE
65
3.2.1
EINFLUSS
VON
WORTMANNIN
AUF
U937
ZELLEN
65
3.2.2
EINFLUSS
VON
N-ACETYL-D-SPHINGOSIN
AUF
U937
ZELLEN
66
3.2.3
EINFLUSS
VON
MANNOSE-6-PHOSPHAT
AUF
DIE
SEKRETION
VON
KATHEPSIN
D
UND
LYSOZYM
IN
ANWESENHEIT
VON
TPA
70
3.2.4
EINFLUSS
VON
MONENSIN
AUF
DIE
SEKRETION
VON
KATHEPSIN
D
UND
LYSOZYM
71
4
DISKUSSION
74
4.1
TRANSPORTKINETIK
VON
KATHEPSIN
D
UND
LYSOZYM
74
4.2
EINFLUSS
VON
VERSCHIEDENEN
WIRKSTOFFEN
UND
VERMINDERTER
TEMPERATUR
AUF
DIE
SUBZELLULAERE
LOKALISATION
VON
KATHEPSIN
D
UND
LYSOZYM
81
4.3
EINFLUSS
VON
WORTMANNIN
86
4.4
EINFLUSS
VON
N-ACETYL-D-SPHINGOSIN
88
4.5
EINFLUSS
VON
MANNOSE-6-PHOSPHAT
UND
MONENSIN
89
5
ZUSAMMENFASSUNG
94
6
LITERATUR
96 |
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