b-Adrenozeptoren auf Alveolarmakrophagen:
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Regensburg
Roderer
1998
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| Series: | Allergopharmakologie
2 |
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis I
Inhaltsverzeichnis
A Zusammenfassung 1
B Einleitung 3
B.1 Physiologie der Alveolarmakrophagen 3
B.2 Das B Adrenozeptor cAMP System 5
B.2.1 Informationsübertragung im Organismus S
B 2.2 Zyklisches Adenosinmonophosphat (cAMP) und ß Adrenozeptoren 5
B.3 Der Alveolarmakrophage eine Zelle des pulntonalen Immunsystems 8
B.4 Fragestellung 9
C Material und Methoden 11
C.l Material 11
C. 1.1 Reagenzien 11
C 1 2 Puffermedien für Isolations und Stimulationsversuche 12
C.1.3 Kulturmedien für bovine Alveolarmakrophagen 13
C.l.4 Einmalartikel 13
C.1.5 Geräte 14
C.1.6 PC Software 15
C.2 Methoden 15
C.2.1 Probanden und Probengewinnung 15
C.2.1.1 Auswahl der Probanden 15
C.2.1.2 Gewinnung der BALF 16
C 2 1 3 Blutabnahme zur Gewinnung der pMNL 16
C.2.1.4 Probanden für die Untersuchungen zum Einfluß reduzierter Sauerstoffzu¬
fuhr auf die Expression und Funktion der ßrAdrenozeptoren auf pMNL
(Hypoxieversuche) 16
C.2.1.5 Blutabnahme während der Hypoxieversuche 17
C.2.2 Probengewinnung vom Rind 17
C.2.2.1 BALF Gewinnung aus Rinderlungen 17
C.2.2.2 Gewinnung der Blutproben vom Rind 18
C.2.3 Zellpräparationen 18
C.2 3.1 Versuche zur Isolation menschlicher BALF Zellen, Bestimmung der Zell¬
ausbeute 18
Inhaltsverzeichnis D
C.2.3.1.1 Zentrifügation bei 800 xg (Methode A) 18
C.2.3.1.2 Dichtegradientenzentrifugation (Methode B) 18
C.2.3.1.3 Zentrifugation bei 800 xg mit anschließender Glasadhäsion (Methode C) 19
C.2.3.1.4 Bestimmung der Zellausbeute 19
C.2.3.2 Isolation der RAM 20
C.2.3.3 Zellkultur der RAM 20
C.2.3.4 Präparation der RAM aus der 24 h Kultur 20
C.2.3.5 Präparation der pMNL 2
C.2.3.6 Präparation der Rinderleukozyten 21
C.2.3.7 Zellzahlbestimmung 21
C.2.4 Durchführung der Hypoxieversuche 22
C.2.4.1 Durchführung der in vivo Hypoxieversuche 22
C.2.4.2 Durchführung der in vitro Hypoxie und Hyperoxie bei RAM 22
C.2.5 Stimulation intrazellulärer cAMP Produktion 23
C.2.S.1 Stimulation mit Isoprenalin und Forskolin
C.2.5.2 cAMP Produktion unter dem Einfluß verschiedener Stimulanzien 23
C.2.S.3 Quantitative Bestimmung des cAMP Gehalts 24
C.2.6 Untersuchungen zur Bestimmung der ß Adrenozeptor Expression 25
C.2.6.1 Theorie der Rezeptorbindungsstudien 25
C.2.6.2 Durchführung der Rezeptorbindungsstudien mit radioaktiven Liganden 26
C.2.6.3 Auswertung der Rezeptorbindungsstudien 2
C.2.7 Bestimmung der Histaminfreisetzung aus Zellen der BALF 27
C.2.7 1 Durchführung der Histaminfreisetzung 27
C.2.7.2 Quantitative Bestimmung des Histamins 28
C.2.8 Versuche zur Migrationsaktivität der Alveolarmakrophagen 28
C.2.8.1 Herstellung des zymosanaktivierten Serums (ZAS) 2S
C.2.8.2 Versuchsdurchführung 28
C.2.8.3 Auswertung der Migrationsmembranen
C.2.9 Versuche zur Phagozytoseaktivität der Alveolarmakrophagen 29
C.2.9.1 Präparation opsonierter Erythrozyten
C.2.9.2 Versuchsdurchführung 30
C.2.9.3 Auswertung der Phagozytoseversuche 30
C.2.10 Statistik 31
D Ergebnisse 32
DA Ergebnisse der methodischen Untersuchungen 32
Dl 1 Einflüsse auf Zellzahl und Zusammensetzung der BALF Zellen 32
Dill Einfluß des Instillationsvotumens 32
Inhaltsverzeichnis III
D. 1.1.2 Einfluß des Isolationsverfahrens 33
D. 1.2 Einfluß des Isolationsverfahrens auf den intrazellularen cAMP Gehalt 34
D.2 Untersuchungen zur Funktion de* B Adrenozeptor cAMP Systems
von HAM 35
D.2.1 Stimulation der intrazellulären cAMP Produktion bei HAM 35
D.2.2 Stimulierbarkeit der intrazellularen cAMP Produktion bei verschiedenen
Patientengruppen 36
D.2.3 Vergleich der Stimulierbarkeit der intrazellularen cAMP Produktion zwi¬
schen HAM und pMNL von Patienten 37
D.2.4 Vergleich der Stimulierbarkeit der intrazellularen cAMP Produktion zwi¬
schen pMNL von Patienten und gesunden Probanden 39
D.3 Das B AdFenozeptor cAMP System bei RAM 41
D.3.1 Das ß Adrenozeptor cAMP System bei RAM unter physiologischen Be¬
dingungen 41
D.3.1.1 Expression der ß Adrenozeptoren 41
D.3.1.2 Funktion des ß Adrenozeptor cAMP System 41
D.3.2 Veränderungen im ß Adrenozeptor cAMP System unter Kulturbedingungen 42
D.3.2.1 Expression der ß Adrenozeptoren 42
D.3 2 2 Funktion des ß Adrenozeptor cAMP Systems 43
D.4 Stimulation und Hemmung der intrazellulären cAMP Biklung; Inter
und Intraspeziesvergleich zwischen HAM, RAM, humanen pMNL
und bovinen pML 44
D.4.1 Untersuchungen zur Stimulierbarkeit und Hemmung der intrazellulären
cAMP Produktion bei RAM 45
D.4.1.1 Stimulation durch die Sympathomimetika Isoprenalin, Adrenalin und Nor
adrenalin 45
D.4.1.2 Modifikation der Wirkungen von Isoprenalin und Adrenalin durch Propra
nolol und Clonidin 46
D.4.1.3 Einfluß von Forskolin und Histamin auf den intrazellulären cAMP Gehalt 48
D.4 1 4 Einfluß von PGE1 und PGE2 auf den intrazellulären cAMP Gehalt 49
D.4 2 Vergleich von Stimulierbarkeit und Hemmbarkeit der intrazellulären cAMP
Produktion bei HAM und RAM 50
D.4.2.1 Stimulation durch die Sympathomimetika Isoprenalin, Adrenalin und Norad
renalin 50
D.4.2.2 Modifikation der Wirkungen von Isoprenalin und Adrenalin durch Propra
nolol und Clonidin 51
D.4.2.3 Einfluß von Forskolin und Histamin auf den intrazellulären cAMP Gehalt 53
Inhaltsverzeichnis IV
D.4.2.4 Einfluß von PGE1 und PGE2 auf den intrazellulären cAMP Gehalt 54
D.4.3 Vergleich der Stimulierbarkeit der intrazellulären cAMP Produktion durch
Isoprenalin, Forskolin, PGE1 und PGE2 bei RAM und bovinen pML 55
D.4.4 Zusammensetzung der zellulären Blutbestandteile bei Rindern 58
D.5 Phagozytose und MigrationsaktiviUt ab funktioneUe Parameter bei
AlveoUrmakrophagen W
D.51 Phagozytoseaktivität bei RAM 60
D.5.11 Phagozytoseaktivität unter physiologischen Bedingungen 60
D.5 1.2 Beeinflussung durch das ß Adrenozeptor cAMP System 60
D.5 1.3 Beeinflussung durch eine 24h Kuhur 61
D.5.2 Phagozytoseaktivität bei HAM 62
D.5.3 Migrationsaktivität bei RAM 63
D.5.3.1 Migration unter physiologischen Bedingungen 63
D.5.3.2 Beeinflussung durch das ß Adrenozeptor cAMP System 64
D.5.3.3 Beeinflussung durch eine 24h Kultur 65
D.5.4 Migrationsaktivität bei HAM 66
D.6 HisUminfreitetzuag durch HAM und RAM 67
D.7 Beeinflussung der Expression und Funktion des ß Adrenozeptor
cAMP Systems durch verringerte und erhöhte Sauerstoflzufuhr 68
D.7.1 Das ß Adrenozeptor cAMP System bei pMNL gesunder Probanden und
seine Veränderungen bei verringerter Sauerstoflzufuhr (in vivo Hypoxie) 68
D. 7.1.1 Expression der ß Adrenozeptoren 68
D.7.1.2 Funktion der ß Adrenozeptoren 69
D 7.2 Veränderungen im ß Adrenozeptor cAMP System bei RAM bei verringer¬
ter und erhöhter Sauerstoflzufuhr (in vitro Hypoxie und Hyperoxie) 70
D.7.2.1 Expression der ß Adrenozeptoren 7I
D.7.2.2 Funktion der ß Adrenozeptoren 72
D.7.3 Beeinflussung der Phagozytoseaktivität und Motilität von RAM durch ver¬
ringerte und erhöhte Sauerstoflzufuhr 74
D. 7.3.1 Beeinflussung der Phagozytoseaktivität 74
D.7.3.2 Beeinflussung der Migrationsaktivität 76
£. Dfakussion 79
E.1 Diskussion der methodischen Untersuchungen 79
Eil Gewinnung der BALF und Isolation ihrer Zellbestandteile 79
E.1.2 Einfluß des Isolationsverfahrens auf die intrazelluläre cAMP Produktion 81
Inhaltsverzeichnis V
E.2 Auswahl der Patienten 82
E.3 Stimulierbarkeit der intrazellulären cAMP Produktion; Vergleich zwi¬
schen AM und pMNL von Patienten und pMNL gesunder Probanden 83
E.4 Das B Adrenozeptorsystem bei Rindendveolarmakrophagen (RAM) 85
E.5 Stimulierende und hemmende Einflösse auf die intrazeUulire cAMP
Produktion bei Alveolarmakrophagen und peripheren Blutleukozyten
von Mensch und Rind 88
E.6 Funktionelle Charakteristik» der AM und deren Beeinflussung durch
das B Adrenozeptor cAMP System 94
E.6.1 Phagozytoseaktivität und Motilität bei HAM und RAM 94
E.6.2 Histaminfreisetzung durch Alveolarmakrophagen 97
E.7 Einflüsse verringerter und erhöhter Sauerstoflzufuhr auf die Expres¬
sion und Funktion von B Adrenozeptoren und ihre Auswirkung auf
die Zellaktivitüt 98
E.7.1 Expression und Funktion von ß Adrenozeptoren bei menschlichen pMNL
unter in vivo Hypoxie Vergleich zur in vitro Hypoxie mit RAM 99
E.7.2 Auswirkungen von in vitro Hypoxie und Hyperoxie auf die Phagozytose¬
aktivität und Motilität von RAM 100
F Tabellenanhang 102
G Literaturverzeichnis 104
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| topic_facet | Broncho-alveoläre Lavage Beta-Rezeptor Alveolarphagozyt Obstruktive Ventilationsstörung Hochschulschrift |
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