Langzeitstudie zur Persistenz des bovinen Leukosevirus (BLV) in einer leukosesanierten Milchviehherde:
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Aachen
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| adam_text | Titel: Langzeitstudie zur Persistenz des bovinen Leukosevirus (BLV) in einer leukosesanierten Milchviehherd
Autor: Mewes, Gunnar
Jahr: 1998
Inhaltsverzeichnis
1. Einleitung 1
2. Literaturübersicht 2
2.1. Enzootische Rinderleukose (eRL) 2
2.1.1. Verbreitung 2
2.1.2. Bedeutung 6
2.1.3. Ätiologie 9
2.1.4. Erscheinungsbilder 11
2.1.5. Erregerreservoire und Infektiosität 14
2.1.6. Prä- und postnatale Übertragung 17
2.1.7. Empfänglichkeit und Resistenz 23
2.2. Bovines Leukosevirus (BLV) 26
2.2.1. Morphologie und Morphogenese 26
2.2.2. Biophysikochemische Eigenschaften 27
2.2.3. Zielzellen und Infektionsmechanismus 28
2.2.4. Provirusintegration und Provirusgenom 31
2.2.5. Provirusexpression und ihre Regulation 36
2.2.6. Proteine und Antigenität 41
2.3. Wirtsreaktionen auf die BLV-Infektion 47
2.3.1. Lymphozytenpopulationsdynamik 47
2.3.2. Zielzelltransforrnation und Kanzerogenese 49
2.3.3. Tumorassoziiertes Antigen (TAA) 54
2.3.4. Immunantwort 55
2.3.5. Immunkompetenz 60
2.3.6. Immunprophylaxe 61
2.4. Labordiagnostische Verfahren zum Nachweis der BLV-Infektion 63
2.4.1. Serologische Nachweisverfahren (Überblick) 63
2.4.1.1. Immundiffusionstest (IDT) 67
2.4.1.2. Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) 69
2.4.2. Direkte Nachweisverfahren (Überblick) 75
2.4.2.1. Nukleinsäurehybridisierung (NAH) 80
2.4.2.2. Polymerasekettenreaktion (PCR) 82
3. Material und Methoden 86
3.1. Untersuchungsgegenstand 86
3.2. Entnahme, Primäraufbereitung und Aufbewahrung von Proben 87
3.3. Durchgeführte Untersuchungen (Überblick) 87
3.4. Serologische Nachweisverfahren 88
3.4.1. Immundiffusionstest (IDT) 88
3.4.2. Catch Enzyme-linked Immunosorbent Assay (cELISA) 88
3.5. Direkte Erregernachweisverfahren 90
3.5.1. Dot-Blot-Hybridisierung (DBH) 90
3.5.1.1. Präparation genomischer DNA aus Vollblut 90
3.5.1.2. Präparaüon provirusspezifischer DNA-Sonden 91
3.5.1.3. BloBing und Hybridisierung 93
3.5.2.
3.5.2.1.
3.5.2.2.
3.5.2.3.
3.5.2.4.
3.5.2.5.
4.
4.1.
4.2.
4.2.1.
4.2.1.1.
4.2.1.2.
4.2.1.3.
4.2.1.4.
4.2.2.
4.2.2.1.
4.2.2.2.
4.2.2.3.
4.2.2.4.
4.2.3.
4.2.3.1.
4.2.3.2.
4.2.3.3.
4.2.3.4.
4.2.3.5.
4.2.4.
4.2.5.
5.
5.1.
5.2.
5.2.1.
5.2.2.
5.2.3.
5.2.4.
6.
7.
8.
Polymerasekettenreaktion (PCR) 94
Probenaufbereitung 94
Reaktionskomponenten 95
DNA-Amplifikation 96
Produktanalyse 97
Kontaminationsprävention 98
Ergebnisse 100
Amtliche Untersuchungsbefunde 100
Eigene Untersuchungen 100
Catch Enzyme-linked Immunosorbent Assay (cELISA) 100
Bestandsuntersuchungen mittels gp51-cELISA 100
Vergleichende Untersuchungen mittels p24-cELISA 105
Verfolgsuntersuchungen mittels p24- und gp51-cELISA 106
Zusammenfassung von cELISA-Ergebnissen 108
Dot-Blot-Hybridisierung (DBH) 109
DBH 5/89 109
DBH 2/90 110
DBH 9/90 111
Zusammenfassung von DBH-Ergebnissen 111
Polymerasekettenreaktion (PCR) 113
PCR 2/90 113
PCR 9/90 113
PCR 12/91 113
PCR 4/93 115
Zusammenfassung von PCR-Ergebnissen 116
Zusammenfassung von cELISA-, DBH- und PCR-Ergebnissen 116
Epizootiologische Beobachtungen 119
Diskussion 122
Amtiicher IDT und Sammelmilch-ELISA 123
Eigene Untersuchungen 124
cELISA 124
Dot-Blot-Hybridisierung (DBH) 129
Polymerasekettenreaktion (PCR) 132
Spekulationen über die ungewöhnlichen Befundkonstellationen 135
unter Berücksichtigung der epizootiologischen Beobachtungen
Zusammenfassung 142
Summary 144
Literaturverzeichnis 146
Danksagung
Lebenslauf
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